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U., Ein kleiner Apparat für die Gesamtbehandlung vieler Objektträger 185 Bartel, J., Zur Technik der Gliafärbung 18 Fleischmann, A. , Notiz über einen Apparat zur Herstellung von Wachsplatten für die Rekonstruktion 445 Fuhrmann, Fr., Über einen Universal-Paraffineinbettungsthermostaten 462 Harz, C. O., Jodparaffinöl, ein neues Mikroreagens und Einbettungs- luedium 25 Köhler, A., Mikrophotographische Untersuchungen mit ultraviolettem Licht 129, 273 — ., — , Ernst Abbe f 417 Kohl, F. G., Der neue Leitzsche mikrophotographische Apparat . . 305 Lendenfeld, R. v. , Über die Herstellung von Nadelpräparaten von Kieselschwämmen 23 Lichtenberg, S. , Objektträgergestell zur gleichzeitigen Behandlung zahlreicher Schnitte 321 Mayer, P., Über die Verwendung des Planktonsuchers 447 Pavlow, W., Einige Bemerkungen über die Hämatoxylinfärbung der Nervenfasern des Zentralnervensystems 14 Peiser, J., Ein Mikroskopierschirm 467 Peter, K., Eine neue Dotterfärbung 314 Pirone, R,. , Note sur l'emploi du jode apres la fixation en sublime, ou en liquides qui en contiennent 179 Regaud, CL, Le CoUodionnage des cellules. Methode de preparation applicable aux Clements anatomiques naturellement ou arti- ficiellement dissocies 10 JY Inhaltsverzeiclinis. Seite Ries, J., Ein erschütterungsloses Stativ für Mikropliotographie . . 475 — ^ — ^ Nadel zur Blutentnahme für Untersuchungszwecke .... 479 Sanzo, L., Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare al microscopio un punto qualunque di un preparato 27 — ^ — ^ Apparecchio utile in embriologia per la fissazione automatica a tempi voluti di embrioni in via di sviluppo 449 Schaper, A., Eine Methode zur Durchschneidung großer Wachs- platten-Modelle 200 Schlüpfer, V., Über eine Modifikation der Cornetschen Pinzette . . 458 Schultze, O., Über Stückfärbung mit Chromhämatoxylin 5 Sommerfeldt, E., Ein für mineralogische Untersuchungen bei hoher Temperatur geeignetes Mikroskop 181 Studnicka, F. K., Das „pankratische" Präparier - Mikroskop . . . . 440 — ^ — ^ Über die Anwendung des Abbeschen Kondensors als eines Objektives 432 Tandler, J., Über einen einfachen Apparat zum Zeichnen und Photo- graphieren mikroskopischer Schnitte 470 Tuzson, J., u. Herrmann, M. , Objekttisch mit Meßvorrichtung (Schlittenmeßtisch) 189 Yasoin, B., Über die Veränderungen des Rückenmarkes bei der Fixierung 420 Walsem, G. C. van. Der Mikro-Pantograph als Zeichenapparat . . 166 — , — , Eine Methode zur Aufhebung kleiner Zentrifugatraengen . . 172 — ^ — ^ Über ein einfachstes fakultatives Demonstrationsokular (das Stecknadelokular) 1''4 Weigert, K., Eine kleine Verbesserung der Häraatoxyhn- van Gieson- Methode 1 II. Referate. Abbe, E., Gesammelte Abhandlungen. I. Bd.: Abhandlungen über die Theorie des Mikroskops 327 Abramow, S., u. Samoilowicz, A., Zur Frage 'der normalen und pathologischen Histologie der Gallenkapillaren in Verbin- dung mit der Lehre von der Pathogenese des Ikterus . . . 518 Adler, L., Über helle Zellen der menschlichen Leber 246 Allegra, Fr. G., Tre metodi pratici per ritrovare facilmente al micro- scopio un punto qualunque di un preparato 485 Arnold, J., Weitere Beispiele granulärer Fettsynthese (Zungen- und Darmschleimhaut) . 218 Bakhuis Roozeboom, H. W., Die heterogenen Gleichgewichte vom Standpunkte der Phasenlehre 400 Inhaltsverzeichnis. V Seite Barger, G., Mikroskopische Methode der Molekuhirgewichtsbestim- mung- 209 Bataillon, E., Nouveaux essais de Parthenogenese experimentale chez les Vertebres inferieurs (Rana fusca et Petromyzon Planeri) 369 Bauer, M., Lehrbuch der Mineralogie 260 Bauer, V., Zur inneren Metamorphose des Zentralnervensystems der Insekten 356 Becke, F., Bestimmung der Dispersion der Doppelbrechung .... 109 Beguin, F., L'Intestin pendant le Jeüne et Tlntestin pendant la Digestion. Etudes faites sur le Crapaud des Jongs et le Lezard, des Murailles • 515 Belir, M., Über Schnellhärtung und Schnelleinbettung 57 Berliner, K., Beiträge zur Histologie und Entwicklungsgeschichte des Kleinhirnes . . . 366 Bethe, A., Allgemeine Anatomie und Physiologie des Nerven- systemes 344 Bettencourt, Kopke, de Rezende, Mendes, La maladie du sommeil 374 Bielscliowsky , 31., u. Pollack, B., Zur Kenntnis der Innervation des Säugetierauges 512 Blackman, V. H., On the fertilization, alternation of generations and general cytology of the Uredineae 391 Bloch, C. E., Die Säuglings- Atrophie und die Pameth sehen Zellen . 74 Bodin et Castex, Appareil pour l'agitation continue des cultures . 91 Boden, K., Die morphologischen und tinktoriellen Veränderungen nekrobiotischer Blutzellen 72 Böhm, A., u. Oppel, A., Taschenbuch der mikroskopischen Technik. Mit einem Beitrag (Rekonstruktionsmethoden) von Prof. Dr. G. Born 481 Borst, M. , Neue Experimente zur Frage nach der Regenerations- fähigkeit des Gehirnes . 238 Branca, A., Recherches sur le testicule et les voies spermatiques des Lemuriens en captivite 367 Brasil, L. , Contribution ä la connaissance de l'appareil digestif des Annelides polychetes. L'epithelium intestinal de la Pectinaire 353 Brauns, R. , Ein Projektionsapparat für den mineralogischen Unter- richt 396 Bruhns, AV., Kristallographie 107 Buchholz , Über Züchtung von Tuberkelbazillen aus menschlichem Sputum - 378 Bütschli, O., Notiz über die sogenannte Florideenstärke 259 Buscalioni, L., e Pollacci, G., Le Antocianine ed il loro signilicato biologico nelle piante 538 Byloff, Ein Beitrag zur Kenntnis der Rattentrypanosomen .... 371 Caullery, M., et Mesnil, F., Contribution ä l'etude des Enteropneustes. Protobalanus (n. g.) Koehleri, Caull. et Mesn 353 Cavini, Apparat für intravenöse Injektion größerer Mengen infek- tiöser Kultur 88 VI Inhaltsverzeichnis, Seite Cazzani, E., Osservazioni critiche sopra alcune ricerche clell'esculina eseguite dal Dott. A. Goris 390 Chenzinski, C, Zur Frage über den Bau der Nervenzellen (Was sind die Nissl sehen Körperchen?) 82 Chesneaii, G. , Etüde microscopique des bronzes prehistoriques de la Charente 399 Chmlelewski, V., Über Phototaxis und die physikalischen Eigen- schaften der Kulturtropfen 391 Clauditz, Typhus und Pflanzen 376 — , Untersuchungen über die Brauchbarkeit des von Endo emp- fohlenen Fuchsinagars zur Typhusdiagnose 378 Cohn, E. , Die v. Kupffer sehen Sternzellen der Säugetierleber und ihre Darstellung 517 Darbishire, O. V., Observation on Mamillaria elongata 38G Deflandre, C. , La fonction adipogenique du foie dans la serie ani- raale 7(3 Deraux, H., Sur la Structure de la Lamelle moyenne dans les Tissus •uous 531 Dickel, O., Entwicklungsgeschichtliche Studien am Bienenei . . . 355 Dorr, R, , Mikroskopische Faltungsformen. Ein physikalisches Ex- periment 398 Dreuw, Vereinfachtes, anaerobes Plattenverfahren 380 Du Bois, C. C, Granule Cells in the Mucosa of the Pig's Intestine . 502 Dünn , E. H. , On the number and on the relation between diameter and distribution of the nerve fibers innervating the leg of the frog, Rana virescens brachycephala, Cope 241 Duparc, L., Eine neue Varietät des Orthoklas 399 Ehrlich, L., Der Ursprung der Plasmazellen 222 Emmerling, Ein einfacher und zuverlässiger Anaerobenapparat . . 89 Eycleshymer, A. C. , The cytoplasmic and nuclear Changes in the striated Muscle Cell of Necturus 509 Faber, F. C. v., Zur Verholzungsfrage 103 Federley, H. , Die Kopulation der Konidien bei Ustilago Tragopogi pratensis Pers 534 Fedorow, E. v., Einfluß verdrängender Beimischungen auf die Kri- stallisation 541 — , — , tTher die Anwendung des Dreispitzenzirkels für kristallo- graphische Zwecke 392 — , — , Achsendispersion und ihre Bestimmung 394 — , — , Einfluß des Kapillar-, Wärme- und elektrischen Stromes auf die Bildung der Kristallej 399 Fisher, W. K., The Anatomy of Lottia gigantea Gray 494 Folke Henschen , Über Trophospongienkanälchen sympathischer (xanglienzellen beim Menschen 238 Fuhrmann, F., Der feinere Bau der Nebenniere des Meerschweinchens 519 Garber, J. F., The Life History of Ricciocarpus natans 539 Garten, S., Leitfaden der Mikroskopie 326 Inhaltsverzeichnis. VII Seite Geneau de Laniarliere, L, , Sur hi presence dans certaines mem- branes cellulaires d'une substance ä reactions aldehydiques . 384 Gieinsa, S., Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Me- thylenazur - Methylenblau - Eosin - Färbemethode zur Erzielung der Romanowski -NocHT sehen Chromatintarbung 522 Görich, W. , Zur Kenntnis der Spermatogenese bei den Poriferen und Coelenteraten nebst Bemerkungen über die Oogenese der ersteren G5 Gössl, J. , Über das Vorkommen des Mangans in der Pflanze und über seinen Einfluß auf Schimmelpilze 529 Goldschmidt, V., Über Ätzfiguren, deren Entstehung und Eigenart . 394 Goris, Alb., Recherches microchiraiques sur quelques glucosides et quelques tanins vegetaux 382 Gothan, W., Über die Präparation von Braunkohlenhölzern zur mikro- skopischen Untersuchung 101 Gregory, R. P., Spore-formation in leptosporangiate ferns .... 390 Gross, J., Die Spermatogenese von Syromastes marginatus L. . . . 499 Grynfeltt, E. , Notes histologiques sur la capsiile surrenale des amphibiens 250 — , — , Reclierches anatomiques et histologiques sur les organes surrenaux des Plagiostomes 369 Guiliiermond, A., Recherches sur la Karyokinese chez les Ascomy- cetes 101 Gungl, O., Anatomie und Histologie der Lumbricidenblutgefäße . . 495 Gutmann, C, Über Schnellhärtung und Schnelleinbettung .... 56 Haemers, A., Modification de la methode de coloration par l'hema- toxyline ä l'alun de fer 61 flagemann, Eine Vereinfachung des Drigalski- Nährbodens ... 381 Hager, A., Das Mikroskop und seine Anwendung 325 Hamlyn-Harris, R., Die Statocysten der Cephalopoden 65 Hanneke, P., Die Herstellung von Diapositiven 54 Hannig, E,, Zur Physiologie pflanzlicher Embryonen. I. Über die Kultur von Kruziferen -Embryonen außerhalb des Embryo- sacks 256 Hargitt, Ch. W., The Early Development of Eudendrium .... 250 Hartmanu, J., Objektivuntersuchungen 47 Hatai Shiukishi, The neurokeratin in the medullary sheaths of the pcripheral nerves of mammals 237 — — , On the nature of the pericellular network of nerve cells . . 239 — — , On the origin of neuroglia tissue from the raesoblast . . . 239 _ —^ Note on the Significance of the Form and Contents of the Nucleus in the Spinal Ganglion Cells of the foetal Rat . . . 511 — — , Number and size of the spinal ganglion cells and dorsal root fibers in the white rat at dift'erent ages 240 Hauswaldt, H., Interferenzerscheinungen im polarisierten Licht . . 261 Heicke, A., Ein Beitrag zur Kenntnis der Weichteile der Madre- porarier 494 VIII Inhaltsverzeichnis, Seite Heideulialu , M., i'ber die NilbLaubase als Reagens auf die Kohlen- säure der Luft und über die Einwirkung von Farbsäuren auf Cellulose, Alkohol und Azeton mit Beiträgen zur Theorie der histologischen Färbung 61 Hein, W., Zur Epithelfrage der Trematoden 350 Heineck, Fr., Die mikrophotographische Aufnahme von Dünnschliffen 106 Herbig, A. C, Anatomie und Histologie des tibialen Gehörapparates von Gryllus domesticus 66 Herxheimer, G., Zur Fettfärbung. Bemerkung zu der gleichnamigen Erwiderung des Herrn Dr. Fischer in No. 15 dieses Zentral- blattes 58 Hillesheim, C. , Some Observations on the Staining of the Nuclei of fresh-water Algae 534 Hirscbbruch u. Schwer, Bemerkungen über feste Nährböden zum Zwecke der Choleradiagnose 90 Hirschwald, J. , Über ein neues Mikroskopmodell und ein „Plani- meter- Okular" zur geometrischen Gesteinsanalyse 399 Holm, E., Das Photographieren mit Films 341 Holmgren, E., Beiträge zur Morphologie der Zelle. II. Verschiedene Zellarten 501 Ites, F., Über die Abhängigkeit der Absorption des Lichtes von der Farbe in kristallisierten Körpern 397 Iwanowski, D., Über die Mosaikkrankheit der Tabakspflanze . . . 102 Jackson, C. N., Zur Histologie und Histogenese des Knochenmarkes 506 Jacque, Le procede de Cambier pour la recherche du bacille typhique 89 Jamin, F., Experimentelle Untersuchungen zur Lehre von der Atrophie gelähmter Muskeln 232 Jankowski, J. , Beitrag zur Entstehung des Corpus luteum der Säugetiere 369 Janowsky, R., Über die Polygordiuslarve des Hafens von Triest . 497 Jennings, H. S., A method of demonstrating the externa! Discharge of the contractile Vacuole 353 Joris, H., A propos d'une nouvelle Methode de Coloration des Neuro- fibrilles. Structure et Rapports des Cellules nerveuses . . . 486 Jörns, Über die Brauchbarkeit des Mahichitgrünnähragars zum Nach- weise von Typhusbazillen 377 Juel, O. H., En billig mikrofotograti-apparat 343 Kaiserling:, C, Lehrbuch der Mikrophotographie nebst Bemerkungen über Vergrößerung und Projektion 340 Kallius, E., Sehorgan 85 Kartulis, Gehirnabscesse nach dysenterischen Leberabscessen . . . 524 Klebahn, H., Die wirtswechselnden Rostpilze, Versuch einer Gesamt- darstellung ihrer biologischen Verhältnisse 102 Kleist, K. , Experimentell-anatomische Untersuchungen über die Be- ziehungen der hinteren Rückenmarkswurzeln zu den Spinal- ganglien 509 Inhaltsverzeichnis. IX Seite Kleist, K. , Die Veränderungen der Spinalganglienzellen nach der Durchschneidung der peripherischen Nerven und der hinteren Wurzel 239 Kley, P., Contribution ä l'Anal} se des Alcaloides 541 Klingmüller, V,, u. Veiel, F., Sublamin als Fixierungsmittel ... 59 Koch, A., Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen 86 König, E., Die Farbenphotographie 53 — , — , Über dife Herstellung von Pinachrom-Badeplatten 342 Konrädi, Über die Lebensdauer pathogener Bakterien im Wasser . 87 Kostanecki, K., Cytologische Studien an künstlich parthenogenetisch sich entwickelnden Eiern von Mactra 65 Krause, R., Gibt es eine „vitale" Färbung? 60 Laguesse , E. , Sur l'histogenese de la fibre collagene et de la sub- stance fondamentale dans la capsule de la rate chez les Selaciens 69 Land, AV. J. G., Spermatogenesis and Oogenesis in Ephedra trifurca 393 Lawson , A. A. , The gametophyte , fertilization and embryo of Crjptomeria japonica 385 Lehmann, O., Flüssige Kristalle sowie Plastizität von Kristallen im allgemeinen, molekulare Uralagerungen und Aggregatzustands- änderungen 104 Leiss , C. , Über eine neue Kamera zur stereoskopischen Abbildung mikroskopischer und makroskopischer Objekte 395 — , — , Neues Kristallrefraktometer zur Bestimmung größerer und mikroskopisch kleiner Objekte nach C. Klein 108 Lenssen, J., Systeme nerveux, Systeme circulatoire, sj^steme respira- toire et Systeme excreteur de la Neritina fluviatilis (Fragments d'un travail monographique sur cette espece) 218 Levi , G. , Über die Entwicklung und Histogenese der Ammonshorn- formation 362 Lipschütz, Über einen einfachen Gonokokkennährboden 379 Ljubuschin, A., Nekotoryja ekssperimentalnyja dannyja k woprossu ob endogennych woloknach w peredne-bokowych sstolbach sspinnogo mosga (Einige experimentell gefundene Tatsachen in der Frage nach den endogenen Fasern in den Vorderseiten- strängen des Rückenmarks) 362 Lubosch, W., Untersuchungen über die Morphologie des Neunaugen- eies 246 Lumiere, A. u. L. , u. Seyewetz , A., Einfluß der Natur der Ent- wickler auf die Größe des Kornes des reduzierten Silbers . 342 Luther, A., Die Eumesostominen 348 Maas, O. , Einführung in die experimentelle Entwicklungsgeschichte (Entwicklungsmechanik) 482 Mac Ward, Neal a. Novy, Fr. E., On the cultivation of Trypano- soma Lewisi 372 X Inhaltsverzeichnis. Seite Mallory, F. B., A hitherto undescribed fibrillar substance produced by connective tissue-cells 70 Marceau F., Recherches sur la structure et le developpement com- pares des libres cardiaques dans la serie des Vertebres . . 357 Marino, F., Colöration des Protozoaires et Observation sur la neutro- philie de leur noyau 491 Marx, H., u. Ehrnrooth, E., Eine einfache Methode zur forensischen Unterscheidung von Menschen- und Säugetierblut 226 Mascha, E,, Über die Schwungfedern 360 Mattiesen, E., Ein Beitrag zur Embryologie der Süßwasserdendro- coelen 349 3Iay, A, J., A Contribution to the Morphology and Development of Corymorplia iiendula 66 aiay, R., u. Grünwald, L., Beiträge zur Blutfärbung 361 Meisliug, Aage A., Ein Polarisationskolorimeter 262 Merriman, M. B., Vegetative Cell Division in Allium 540 Meves, Fr,, Über das Vorkommen von Mitochondrien, bezw. Chondro- miten in Pflanzenzellen 257 Meyer, A., Orientierende Untersuchungen über Verbreitung, Morpho- logie und Chemie des Volutins 94 Michaelis, L., Über einige Eigenschaften der Nilblaubase .... 489 Misch, J., Das Binnennetz der spinalen Ganglienzellen bei verschie- denen Wirbeltieren 82 Mitlacher, W., Toxikologisch oder forensisch wichtige Pflanzen und vegetabihsche Drogen 258 Möller, W., Zur Kenntnis der Entwicklung des Gehörknöchelchens bei der Kreuzotter und der Ringelnatter nebst Bemerkungen zur Neurologie dieser Schlangen 512 Molisch, H. , Über Kohlensäure-AssimilationsVersuche mittels der Leuchtbakterienmethode 255 Mollison, Th., Die ernährende Tätigkeit des Follikelepithels im Ova- rium von Melolontha vulgaris 354 3Ioriya, Gozo, Über die Muskulatur des' Herzens 227 Musgrave, W. E., a. Clegg, M. T., Amebas: Their Cultivation and etiülogic Significance 489 Nestler, A., Hautreizende Primeln 538 Neumann, R. O., Kapseltragende pathogene Streptokokken im Rachen- nasenraum 525 Nissle, A.. Zur Kenntnis der Nagana- und Rattentrypanosomen . . 524 Oppermann, M., A Contribution to the Life History of Aster . . 539 Osborn, H. L. , On the Habits and Structure of Cotylaspis insignis Leidy, from Lake Chautauqua, New York, U. S. A 498 Osterhout, W. J. V., Contributions to cytological Technique . . . 527 Otto, R., Über die Lebensdauer und Infektiosität der Pestbazillen in den Kadavern von Pestratten 93 Owsjannikow, Ph., Das Rückenmark und das verlängerte Mark des Neunauges 78 Inhaltsverzeichiiiss. XI Seite Oyama, R., Entwicklungsgeschichte des Deckhaares der weißen Maus [Mus musculus, var. alba] 505 Petersen, H., Anatomische Studie über die Glandulae parathyreoi- deae des Menschen 251 Petkowitsch, Beitrag zur Frage des diagnostischen Wertes einiger Nährböden für die Typhusdiagnose 86 Petrasch, K., Beiträge zur experimentellen Petrographik .... 398 Petri, L., Ricerche sopra la struttura del nucleolo 386 Pfuhl, E,, Ergebnisse einer erneuten Prüfung einiger Kieselgur- und Porzellanfilter auf Keimdichtigkeit 93 Pittaluga, G., Observaciones morfolögicas sobre los Embriones de las Filarias de los Perros (Filaria immitis Leidy) 492 Plowmau, A. B., The celloidin method with hard tissues .... 388 Pollacci , G. , Intorno al miglior metodo di ricerca microchiraica del Fosforo nei tessuti vegetali 531 Popoflf, B., Eine neue Untersuchungsweise sphärolithischer Bil- dungen 542 Prentiss, C. AV., The nervous Structures in the Palate of the Frog; the peripheral Networks and the Nature of their Cells and Fibers 509 — , — , The neurofibrillar structures in the ganglia of the leech and crayfisli, with especial reference to the neurone theory . . 217 Prow, A. H., On fertilization in the Saprolegnieae 387 Radlkofer, L., Über Tonerdekörper in Pfianzenzellen 104 Ranson, VV. , On the medullated nerve fibers crossing the site of lesions in the brain of the white rat 237 Reed, H. S., A study of the enzyme-sekreting cells in the seedlings of Zea Mays and Phoenix dactylifera 99 Regaud, CL, et Policard, A., Recherches sur la structure du rein de quelques Ophidiens 83 Reinlsch, R., Petrographisches Praktikum. Zweiter Teil: Gesteine. 395 Reitzeustein , W. v. , Untersuchungen über die Entwicklung der Stirnaugen von Periplaneta orientalis und Cloeon 498 Reyher, P., Über die Ausdehnung der Schleimbildung in den Magen- epithelien des Menschen vor und nach der Geburt .... 515 Rinne, F., Pleochroismus des grünen Mikroklins 110 — , — , Verwandtschaft von Bromradium und Brombarium in kristallo- graphischer Hinsicht 109 Röthig, P., Handbuch der embryologischen Technik 207 Rohr, M. V., Die Theorie der optischen Instrumente. Bd. I: Die Bilderzeugung in optischen Instrumenten vom Standpunkte der geometrischen Optik 484 Rogers, A. F., Ein neuer Transporteur zur Bestimmung der Indices der Kristalltlächen 396 Rosenberg, O., Zur Kenntnis der Reduktionsteilung in Pflanzen . . 535 Roseubusch, H., Mikroskopische Physiographie der Mineralien und Gesteine. 1. Aufl. Bd. I : Die petrographisch wichtigen Mine- XII Inhaltsverzeiclinis. Seite ralien. Erste Hälfte: Allgemeiner Teil. In Gemeinschaft mit E. A. VVÜLFiNG 540 Rüge, Die mikroskopische Diagnose des anteponierenclen Tertian- fiebers 381 Rüssel, N. \V., Recherches siir la Localisation de la Taxine chez l'If 528 Rüssig, H. , Von welchen Organen der Gallwespenlarven geht der Reiz zur Bildung der Pflanzengalle aus? Untersuchung der Drüsenorgane der Gallwespenlarven, zugleich ein Beitrag zixr postembryonalen Entwicklung derselben (33 Rumpf, G., Rhizodermis, Hypodermis und Endodermis der Farnwurzel 53G Scaffldi, V., Über den feineren Bau und die Funktion der Hypophysis des Menschen 365 Schaifer, J., Knorpelkapseln und Chondrinballen 226 Scheifer, W., Anleitung zur Stereoskopie. Mit einem Anhang: Stereos- kopische Formeln u. a . . . . 341 Schepotieff , A., Untersuchungen über die Borstentaschen einiger Polychäten 353 Schiefferdecker, P. , Beiträge zur Kenntnis der Mj'otonia congenita, der Tetanie mit myotonischen Symptomen, der Paralysis agitans und einiger anderer Muskelkrankheiten, zur Kenntnis der Aktivitäts-Hypertrophie und des normalen Muskelbaues, mit klinischen Beiträgen von Prof. E. Schultze 228 Schiffmauu , J, , Die Histogenese der elastischen Fasern bei der Organisation des Aleuronatexsudates 74 Schlockow, A., Zur Anatomie der braunen Blüten 386 Schuberg, A., u. Schröder, 0., Myenchus bothryophorus, ein in den Muskelzellen von Nephelis schmarotzender neuer Nematode . (j3 Schulten, A. de, Reproduction artificielle par voie humide de la barytine, de la celestine et de l'anglesite 541 Schumacher, A. v.. Über die Entwicklung und den Bau der Bursa Fabricii 368 Schwarzmann, M. , Die Polarisationsbank für die mineralogisch- optische Schausammlung 108 Schweikart, A., Beiträge zur Morphologie und Genese der Eihüllen der Cephalopoden und Chitonen 64 Seckowski , H. , Ein neuer Nivellierapparat und dessen Anwendung 522 Seibolrt, W. , Anatomie von Vitrella Quenstedtii (Wiedersheim) Clessin 493 Sent-Iler, K. , Nabljudenija nad obmenom weschtschesstw w kletke i tkani. Tschasst 1 (Saint-Hilaire, K., Untersuchungen über den Stoffwechsel in der Zelle und in den Geweben. I. Teil) . 212 Siethoff, E. G. A. ten, Beitrag zur Kristalluntersuchung im kon- vergenten polarisierten Lichte 109 Sijpkeus, B., Die Kernteilung bei Fritillaria imperiahs 535 Slonaker, J. R. , The eye of the common mole, Scalops aquaticus machrinus 370 Smoläk, J., Über vielkernige Zellen bei einigen Euphorbiaceen . . 538 Inhaltsverzeichnis. XIII Seite Sonza Brandao, V. de, t'ber ein Mikroskopgoniometer 39(5 Soukhauoff, S., et Czarniecki, F., Sur Tetat des prolongements proto- plasmatiques des cellules nerveuses de la moelle epiniere chez las vertebres siiperieurs 241 Spalteholz, W,, Mikroskopie und Mikrochemie. Betrachtungen über die Grundlagen der mikroskopischen Untersuchungsmethoden 55 Stein, A., Über Schnellhärtung und Öchnelleinbettung 56 Stevens, F. L., Oogenesis and fertilization in Albugo Ipomoeae-pan- duranae 393 Stiasny, G., Beitrag zur Kenntnis des Exkretionsapparates der Ento- prokta 495 Stitz, H., Zur Kenntnis des Genitalapparates der Trichopteren . . 354 Stransky, E., Bemerkungen über die bei Marchi- Färbung auf- tretenden artefiziellen Schwärzungen 211 Stroug, O. S. , Notes on the technique of Weigert s raethod for staining medullated nerve fibers 243 Swelleugrebel, N, N., Quelques Notes sur la Morphologie et la Bio- logie du Bacterium Zopfii (Kurth) 523 Tarchetti, C, Beitrag zum .Studium der Regeneration der Hautdrüsen bei Triton cristatus 253 Tartakowsky, S., Die Resorptionswege des Eisens beim Kaninchen (Eine mikrochemische Studie) 247 Tichomirow, WL, Sur les inclusions intracellulaires du parenchyme charnu de certains fruits : Datte, Kaki, Jujube, Anone et Chalef 389 Tölg, F., Beiträge zur Kenntnis drüsenartiger Epidermoidalorgane der Eidechsen 516 Unna, P. G., Eine neue Darstellung der Epithelfasern und die Membran der Stachelzellen 68 — , — , Die wirksamen Bestandteile der polychromen Methylenblau- lösung und eine Verbesserung der Spongioplasmafärbung . . 210 Vialleton, L., Etüde sur le coeur des Lamproies Petromyzon marinus L., P. planeri Bloch, Ammocoetes branchialis L. avec quelques remarques sur l'anatomie comparee du coeur des Cyclostomes 75 Yillard, J., Contribution ä l'etude cytologique des Zoochlorelles . . 103 Vuillemin, J., Recherches morphologiques et morphogeniques sur la membrane des zygospores 392 AVarncke, Zur Darstellung der Achsenzylinderfibrillen in den mark- haltigen Fasern des Zentralnervensystems nebst Bemerkungen zur Histologie des Achsenzylinders im allgemeinen .... 81 AVeigert, Über das Bakterienwachstura auf wasserarmen Nährböden 92 Weyberg, Z., Einige Bemerkungen über das Wachstum der Kalium- aluminium-Alaunkristalle 394 Wilson, J. G., The Relation of the Motor Endings on the Muscle of the Frog to neighbouring Structures 510 Wiuton, A. L., Anatomie der Früchte des Taumellolches und der Roggentrespe 258 — . — , Anatomie des Hanfsamens 258 XIV Inhaltsverzeichnis. Seite Wolfe, J. J., Cytological studies on Nemalion 388 AVoltereck, G., Truchophora-Ötudien. I. Über die Histologie der Larve und die Entstehung des Annelids bei den Polygordius- Arten der Nordsee 496 Yendo, K., A study of the genicula of Corallinae . 260 Zarnik. B., Über die Geschlechtsorgane von Amphioxus 520 Zetzsche, Fr., Die wichtigsten Faserstofte der europäischen Industrie 483 Zlatogoroif, S. J., Zur Mikrobiologie der Masern 526 Zii)kin, R., Beiträge zur Kenntnis der gröberen und feineren Struktur- Verhältnisse des Dünndarmes von Inuus Rhesus 249 Zugmayer, E., Über Sinnesorgane an den Tentakeln des Genus Cardium 62 Verzeiclinis der Mitarbeiter an Band XXL Prof. Dr. H. Ambronn in Jena. Prof. E. A. Andrews in Baltimore. Dr. C. U. Ariens Kappers in Amsterdam. Dr. J. Bartel in Wien. Dr. E. A. Bessey in Washington. Prof. Dr. A. Fleischmann in Erlangen. Dr. Fr. Fuhrmann in Prag. Prof. Dr. C. 0. Harz in München. Dr. 0. Henker in Jena. Dr. M. Herrmann in Selmeczbänya. Dr. W. HofFmann in Coblenz. Dr. A. Köhler in Jena. Prof. Dr. F. G. Kohl in Marburg. Dr. E. Küster in Halle (S.). Prof. Dr. R. v. Lendenfeld in Prag. Dr. 0. Levy in Halle (S.). Dr. S. Lichtenberg in Heidelberg. Prof. Dr. P. Mayer in Neapel. Prof. W. Pavlow in Charkow. Dr. J. Peiser in Breslau. XVI Verzeichnis der Mitarbeiter an Band XXI. Dr. K. Peter in Würzburg. Prof. Cl. Regaud in Lyon. Dr. 0. Richter in Prag. Dr. J. Ries in Bern. Prof. L. Sanzo in Messina. Prof. Dr. A, Schaper in Breslau. Prof. Dr. P. Scliiefferdecker in Bonn. Med. prakt. V. Schlüpfer in Zürich. Prof. Dr. H. Schmaus in München. Dr. E. Schoebel in Neapel. Prof. Dr. 0. Schultze in Würzburg. Dr. G. Seliber in Paris. Dr. 0. Sommerfeldt in Tübingen. Dr. F. K. Studnicka in Brunn. Prof. Dr. J. Tandler in Wien. Dr. J. Tuzson in Selmeczbänya. Dr. B. Vasoin in Padua. Prof. Dr. D. Vorländer in Halle (S.). Geh. Rat Prof. Dr. K. Weigert in Frankfurt a. M. Prof. G. C. von Walsem in Leiden. Band XXI. Heft 1. o ^ Eine kleine Verbesserung der Hämatoxylin- van Gieson- Methode. Von Karl Weigert in Frankfurt a. M. Das prinzipiell Neue bei der im folgenden mitzuteilenden Modi- fikation der ursprünglichen Hämatoxylin- van Gieson -Methode war vor vielen Jahren von mir zum Zwecke ganz anderer Färbungen gefunden worden. Über diese andern Zwecke soll weiter unten be- richtet werden, und es wird sich dabei herausstellen, daß dieselben eigentlich nicht recht erreicht worden sind. Inzwischen hat sich aber gezeigt, daß das neue Prinzip gerade für die aller gewöhn- lichsten Untersuchungen besonders g'eeignet ist, sozusagen für den histologischen Hausgebrauch, und hierfür wenden wir denn seit längerer Zeit die modifizierte Methode an. Die nach dieser ge- färbten Präparate haben allen , die sie gesehen haben , so gut ge- fallen, daß der Wunsch laut wurde, die Modifikation, so unbedeutend sie ist, auch weiteren Kreisen zugänglich zu machen, was im folgen- den geschehen soll. Kurz habe ich über das seitdem nur wenig ver- besserte Verfahren schon in der Arbeit von Eduard Mltller (Deutsche Zeitschrift für Nervenheilkunde Bd. XIII, p. 305) berichten lassen. Es handelt sich um eine der Säurefuchsin-Pikrinsäure-Iiehand- lung vorausgehende Färbung mit Eisenhämatoxylin statt der mit Alaun hämatoxylin, wie sie die klassische van GiESON-Methode er- fordert.^ Eisenhämatoxylin ist ja in der Histologie schon vielfach ^) Bei der auch das Säurefuchsin -Pikrinsäure -Gemisch etwas anders aramengesetzt ist. Zeitsclir. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 1 2 Weigert: Verbesserung der Hämatoxylin- v:in Gieson-Methode. XXI, 1. benutzt worden. Wenn icli dabei von meinen schon vor zwanzig Jahren mitgeteilten Versuchen, dasselbe für die Markscheidenfärbung zu verwenden, absehe, so ist es namentlich die BENDASche und vor allem die Martin Heidenhain sehe Methode, die den Eisenlack des Hämatoxylins zu Ehren gebracht haben. Aber diese, sowie alle andern mir bekannten Methoden gehen in der Weise vor , daß sie das Gewebe zunächst mit einem Eisensalze beizen und dann erst das Hämatoxylin einwirken lassen. Bei allen mir bekannten Methoden der Eisenhämatoxylinfärbung ist ferner eine nachträgliche Differen- zienmg der (ja überfärbten) Schnitte notwendig. Bei der Färbung, die ich mir vorzuschlagen erlaube, wird hingegen die fertige Eisenhämatoxylinverbiudung den Präparaten ohne vorherige Beizung zugeführt, und es fällt jede Differenzierung fort. Das wären ja immerhin schon gewisse Vorzüge der neuen Modifikation. Das Wich- tigste ist aber doch, daß die Präparate gerade bei der Färbung nach VAN GiESON viel schöner werden , als nach der bisher üblichen Me- thode. Es treten nicht nur die Kerne durch ihre schwarze Farbe viel besser als durch Alaunhämatoxylin hervor , sondern , was be- sonders hervorzuheben ist, auch die roten und gelben Töne, die erst durch die Säurefuchsin-Pikrinsäurebehand- lung erzeugt werden, erscheinen außerordentlich viel schärfer abgetönt, als man das bisher zu sehen gewohnt war. Ja, die Differenzen treten namentlich bei einem Gewebe besonders zutage, für dessen (Rot-) Färbung die van Gieson- Methode zu allererst von ihrem Erfinder empfohlen worden ist, näm- lich für die Neuroglia. Diese wird bei unserer Modifikation nicht nur nicht rot gefärbt , sondern durchaus gelblich, so daß sie ganz scharf vom Bindegewebe des Zentralnervensystems differen- ziert werden kann. Welche Vorteile dieses der klassischen van Gieson- Methode ganz entgegengesetzte Verhalten darbietet, hat bereits Eduard Müller in seiner oben erwähnten Arbeit gezeigt. Die von uns benutzte Färbung zerfällt naturgemäß in zwei Akte : in die Färbung mit Eisenhämatoxylin und in die darauf folgende Behandlung mit Säurefuchsin-Pikrinsäure. 1) Für die Hämatoxylinfärbung bereitet man sich zwei Lö- sungen : A. Ein Gramm Hämatoxylin auf 100 cc 96prozentigen Al- kohols. B. Eine Eisenchloridlösung mit Salzsäure, und zwar 4 cc Liquor XXI, l. Weigert: Verbesserung der Hämatoxylin- van Gieson-Methode. 3 ferri sesqniclüorati ^ Pli. G. IV, 1 cc der offizin eilen Salzsäure" und 95 Wasser. Zum Gebrauche mischt man von Lösung A und von Lösung B gleiche Raumteile. Es tritt keine Fällung ein. Die Mischung wird ganz schwarz , und man kann sie so lange immer wieder ge- brauchen, als sie nicht stark nach Äther riecht, was erst nach einem bis mehreren Tagen der Fall zu sein priegt. Bei der leichten Her- stellung der Mischung ist es aber vorteilhafter , immer nur frische Lösungen zu benutzen. Der Zusatz von Salzsäure, der in der Arbeit von Eduard MtJLLER noch nicht erwähnt ist , hat den Vorteil , daß eine Überfärbung auch nach längerem Liegen der Schnitte in der Farblösung nicht eintritt. Anderseits ist die volle Tinktion schon nach wenigen Minuten erreicht. Die Schnitte werden dann in Wasser abgespült und nunmehr mit der sogleich zu besprechenden Säure- fuchsin-Pikrinsäure-Mischung behandelt. 2) Seit vielen Jahren ist bei uns eine ganz bestimmte Säure- fuchsin -Pikrinsäure -Mischung im Gebrauch, die in der Weise her- gestellt wird, daß man zu 100 Raum-Teilen einer bei Zimmertemperatur gesättigten (filtrierten) wässerigen Pikrinsäurelösung 10 Teile einer einprozentigen Säurefuchsinlösung (in Wasser) hinzusetzt. Wie sehr wir in dieser Beziehimg das Richtige getroffen hatten, geht daraus hervor, daß Hansen in Kopenhagen (ganz selbständig natürlich) eine fast identische Mischung später, als wir, gefunden hat (Hospitaltidende 1898), zu der er nur noch etwas Essigsäure (einen Tropfen einer 2prozentigen Lösung auf 9 cc der Farbflüssigkeit) fügte. Die mit Eisenhämatoxylin vorgefärbten Schnitte bleiben in der Säurefuchsin-Pikrinsäure-Mischung nur ganz kurze Zeit, dann werden sie (ebenfalls kurze Zeit) in Wasser abgespült , mit 90prozentigem Alkohol entwässert und mit Karbol xylol aufgehellt. Läßt man die Salzsäure bei der Eisenchlorid-Hämatoxylin-Mischung fort, so tritt mit der Zeit eine Überfärbung der Schnitte ein, doch kann man an diesen die Differenzierung durch bloße längere Einwirkung der Säure- fuchsin-Pikrinsäure-Mischung erreichen. Da es aber unter allen Um- ständen besser ist, wenn man gar keiner Differenzierung bedarf, so ziehe ich die neuere Modifikation der bei Eduard 1) Enthält 10 Prozent Elsen. '^) Also vom spezifischen Gewicht 1'124, entsprechend einem Gehalt von 25 Prozent Chlorwasserstoff. 1* 4 Weigert: Verbesserung der Hämatoxylin- van Gieson-Methode. XXI, 1. Müller verijffentlicliten Anwendungsweise bei wei- tem vor. — — In den einleitenden Bemerkungen war davon die Rede, daß die neue Eisenhämatoxylinlösung ursprünglich zu andern Zwecken ver- wendet worden ist. Ohne Salzsäurezusatz und ohne nachfolgende Behandlung mit Säurefuchsin-Pikrinsäure kann die genannte Flüssig- keit zur Markscheidenfärbung verwendet werden,^ aber auch andere Gewebsbestandteile lassen sich mit geringen Veränderungen an den Mischungsverhältnissen von Eisenchlorid, Hämatoxylin und Salzsäure unter Umständen ditferenziert gefärbt erhalten, doch ist es mir nicht gelungen , hierbei absolut sichere Resultate zu erzielen. So kann man die elastischen Fasern darstellen, aber niemals mit solcher Sicherheit und Vollkommenheit, wie bei der von mir seitdem an- gegebenen Färbung mit dem aus Fuchsin, Resorcin und Eisenchlorid hergestellten Farbstoffe (Zentralblatt für pathologische Anatomie etc. 1897). Ganz besonders traten diese Fasern bei Mischungen hervor, die gleichzeitig die Ausläufer der Knochenkörperchen (in Schnitten entkalkter Präparate) tingierten. Mit den Versuchen, diese Aus- läufer (oder vielmehr eine membranartige Auskleidung der Knochen- körperchen und ihrer Fortsätze) differenziert gefärbt zu erhalten, habe ich mich viele Jahre lang hindurch abgequält. Ich habe mit- unter recht gute Erfolge erzielt , wie die an verschiedene Kollegen geschickten Schnitte beweisen, aber es fehlte die Sicherheit. Ich hatte diese Versuche zu einer Zeit unternommen , in der noch kein Mensch daran gedacht hatte , an entkalkten Stücken die Knochen- körperchen und ihre Ausläufer zu färben, und ich schickte einige, wie ich meinte, sehr gute Präparate an den inzwischen leider ver- storbenen, aber damals noch in voller Gesundheit und Arbeitsfrische gerade mit Untersuchungen über Knochen beschäftigten Artur Hanau in St. Gallen. Aber da ging es mir, wie der bösen Königin im Märchen , der das Spieglein an der Wand sagte , daß sie zwar die schönste im ganzen Land wäre , daß aber Schneewittchen über den sieben Bergen etc. viel schöner wäre als sie. Hanau schrieb mir nämlich, daß meine Präparate zwar recht gut, die (damals noch nicht bekannten) von Schmorl aber viel schöner wären. Hanau hatte vollkommen recht, und jeder, der seitdem die wun- dervollen Schmorl sehen Präparate gesehen hat, wird mit sehr hohen Anforderungen an die Färbung der Knochenkörperchen herantreten. 1) Vgl. Enzyklopädie der mikroskopischen Technik (Bd. II), p. 942. XXI, 1. Schultz e: Über Stückfiirbung- mit Chromhämatoxylin. 5 Ich habe mich nicht abhalten hissen, noch weiter zu probieren, aber das mir gesteckte Ziel habe ich mit der Eisenhämatoxylinfärbung doch nicht erreichen können. Vielleicht ist ein anderer glückUcher. Absolut notwendig erschien es mir dabei, daß man keiner Differenzierung bedürfte, denn in diesem Falle war man über- haupt nicht sicher, alles zu entfärben, was entfärbt Averden mußte, und alles zu tingieren, was von Knochenkörperchen und deren Aus- läufern da war. [Eingegangen am 22. Mai 1904.] Über Stückfärbung mit Chromhämatoxylin. Von Oskar Schnitze iu Würzburg. Bekanntlich besteht die von R. Heidenhain eingeführte Beiz- färbemethode mit Hämatoxylin und Chromsalzen darin, daß die in der Regel mit Alkohol oder Pikrinsäure fixierten Objekte mit wässe- riger Hämatoxylinlösung und dann mit Kaliumbichromat oder Kalium- monochromat behandelt werden und der Überschuß des Chromsalzes mit Wasser ausgewaschen wird , worauf sich die Wasserentziehimg durch Alkohol anschließt. Obwohl die Methode vortreffliche Bilder zu liefern imstande ist, wird sie doch wenig ausgeübt, und M. Heiden- hain sagt richtig vor kurzem^ gelegentlich der Besprechung dieses Verfahrens: „Diese Färbung ist für gewisse Zwecke auch heute noch unentbehrlich, denn wir haben kein anderes Verfahren, welches einerseits die , Durchfärbung' ganzer Stücke gestattet, anderseits trotz dieser so primitiven Technik viele Feinheiten der Plasma- und Kernstruktur zeigt. Demgegenüber scheint es bedauerlich , daß der gewünschte Färbungseffekt oft nicht eintritt, vielmehr das Gewebe sich vergilbt, schwächlich und unscharf gefärbt zeigt." 1) Vgl. Enzyklopädie der mikroskopischen Technik, p. 516. 6 Schul tze: Über Stücktarbung mit Chromhämatoxylin. XXI, 1. Ich habe schon vor ungefähr 15 Jahren gelegentlich der Ar- beiten für Kurszwecke das Heidenhain sehe Verfahren bedeutend vereinfacht und zugleich so gestaltet, daß ihm die erwähnten Übel- stände nicht anhaften. Diese Vereinfachung besteht darin , daß ich — ähnlich wie bei der Weigert sehen Markscheidenfärbung — das Kaliumbichromat zugleich als Fixierungsmittel benutze oder dem Jlxierungsmittel zusetze und den Farbstoff mit einem der Alkohole der Nachhärtung kombiniere , so daß sich die einfache Reihen- folge : Kaliumbichromat bezw. Chromatmischung , Alkohol 50 Pro- zent, Alkohol 70 Prozent mit 0"5 Prozent Hämatoxylingehalt , Alko- hol 80 Prozent etc. bis zur Einbettung ergibt. Von den damals auf solche Weise hergestellten Präparaten gehören z. B. die noch heute unveränderten Fundusdrüseu mit ihren tiefschwarzen Beleg- zellen zu den besten Präparaten der genannten Drüsen in der Würz- burger Sammlung. Obwohl die Kerne schon hinreichend deutlich erschienen, ergab sich bei Nachfärbung der Stücke mit Alaunkarmin ein noch gefälligeres Bild. Seit jener Zeit habe ich oft , um Plasmafärbungen , Färbungen von Interzellularen oder von intrazellularen Strukturen zu erhalten, nach dem obigen einfachen Prinzip gehandelt, und zwar mit sehr befriedigendem I^rfolg bei tierischen und pflanzlichen Objekten. Im Grunde handelt es sich also immer darum, daß das Fixierungsmittel einen genügenden Gehalt an Kaliumbichromat besitzt, daß dann aber (nach 12 bis 24 Stunden) nicht ausgewässert wird, sondern sich direkt die Nachbehandlung mit öOprozentigem Alkohol (im Halbdunkel oder im Dunkeln) anschließt und nach weiteren 12 bis 24 Stunden der konzentriertere (TOprozentige) hämatoxylinhaltige Alkohol zur An- wendung kommt. Dieser muß bei kleinen Objekten 12 bis 24 Stun- den , bei größeren 48 oder noch länger wirken , um vollständig durchzufärben. Auch Apäthy hat bekanntlich zum Durchfärben mit Hämatoxylin mit nachträglicher Chromierung alkoholische Hämatoxylin- (Hämatein-)Lösung angewandt. Außer dem reinen Kaliumbichromat in Sprozentiger Lösung habe ich alkoholische Bichromatlösung, Kaliumbichromatessigsäure, Kalium- bichromatformol, Kaliumbichromatpikrinsäure (20*0 konzentrierte wäs- serige Pikrinlösung zu 500*0 Kaliumbichromat 3 Prozent) und Zen- ker sehe Flüssigkeit benutzt. Im letzteren Fall erhielt ich bessere Resultate, wenn ich aus dem Alkohol von 50 Prozent die Stücke in 0*5prozentige wässerige Lösung von Hämatoxylin brachte und mit >A^asser und Alkohol nachbehandelte. Bei der direkten Alkohol- XXI, 1. Schul tze: Über Stückfärbung mit Chromhämatoxylin. 7 nachbehandhnig- der mit den Kaliumbicliromatmisclmngen fixierten Stücke ist es zum Zwecke völliger Extraktion der Zusatzflüssigkeiten gut, vor Anwendung (\er Farbe den Alkohol einige Male zu wechseln, wobei zweckmäßig kaliumbichromathaltiger Alkohol verwendet wird (ein Prozent), um genügende Menge der Vorbeize in dem Präparat zu behalten. Je nach der Art der dem Chromsalz zugesetzten Flüssig- keit werden die definitiven Färbungen in der Stärke des Tones ver- schieden. Sollte bei irgend einem Objekt oder nach irgend einer Fixierungsflüssigkeit die Methode nicht befriedigen, so empfiehlt es sich , die Fixierungsflüssigkeit vor der Alkoholbehandlung durch Kaliumbichromat in einprozentiger wässeriger Lösung zu extrahieren ; speziell dürfte dies für sublimathaltige Chromsalzlösung zu empfelden sein, doch habe ich in dieser Beziehung nur wenig Erfahrungen, da ich überhaupt nur in Ausnahmefällen mit Sublimat arbeite. Sehr geeignet für die gleiche Methode sind nun aber außer den chrom- salzhaltigen Fixierungsmitteln die chromsäurehaltigen, und so ist es — um mich kurz zu fassen — vor allem die Kaliumbichromat- osmiumsäure, die ich in der Zusammensetzung von Kaliumbichromat 3 Prozent 45"0 plus Osmiumsäure 2 Prozent 15"0 anwende, und die Chromosmiumessigsäure Flemmings in der starken Form. Beide Flüssigkeiten können auch nach Belieben bis zum Zehnfachen ver- dünnt zur Anwendung kommen, wodurch natürlich die Färbung nach- her weniger intensiv wird , was ja für dickere Schnitte unter Um- ständen erwünscht sein kann. Nur mit Osmiumsäure fixierte Objekte werden mit Kalium- bichromat nachbehandelt, und dann verfährt man so weiter, als ob das Kaliumbichromat direkt gewirkt hätte. Hier ergibt sich auch der Wert der Methode für in schwacher Osmiumsäure mazerierte Objekte. Diese habe ich mit bestem Erfolg mit Kaliumbichromat 0'5 Prozent nachbehandelt, und dann Alkohol von 50 Prozent, Hämat- oxylin 0*5 Prozent in Alkohol 60 Prozent, sowie Alkohol von 70 Pro- zent angeschlossen. Dann wird in einer von mir zum Einschluß und zur Beobachtung als sehr zweckmäßig erprobten Mischimg gleicher Volumina von Kalium aceticum, Methylalkohol und Aq. destillata unter dem binokularen Mikroskop präpariert oder zerzupft und in der gleichen Flüssigkeit mit Deckglaskitt eingeschlossen. Die ge- nannte Lösung ist dem Einschluß in Lack für alle zarten Strukturen und da , wo es sich darum handelt , auch minimale Schrumpfungen zu vermeiden, bei weitem vorzuziehen. 8 Schultze: Über Stückfärbung mit Chromhämatoxylin. XXI, 1. Bevor ich kurz auf die Vorteile der Methode eingehe , wieder- hole ich kurz die Hauptmomente : 1) Fixierung in kaliumbichromathaltigen oder Chromsäure ent- haltenden Lösungen , am besten Kaliumbichromatosmiumsäure und Chromosmiumessigsäure 12 Stunden oder länger. Beide Flüssigkeiten können bekanntlich auch mehrere Tage wirken. 2) Alkohol von 50 Prozent im Dunkeln 24 Stunden oder länger. Auch mehrtägiges (ja mehrwöchentliches , jedoch besser zu ver- meidendes) Liegen in diesem Alkohol beeinträchtigt nicht erheblich die Färbefähigkeit. 3) Alkohol von 70 Prozent mit 0*5prozentigem Hämatoxyliugehalt. Diese Farbe kann schon 24 Stunden nach Bereitung verwendet werden und ist — zu Hämatein oxydiert — unbegrenzt haltbar. Dauer der Wirkung 24 Stunden und länger bis zur Durchschwärzung. 4) Alkohol von 80 Prozent. Dieser extrahiert Farbstoff und wirkt, wenn auch nur in geringem Grade, ditferenzierend. 5) Alkohol absolutus und Einbettung. Die Schnitte müssen im allgemeinen recht dünn (5 /^i oder weniger) sein. Will man dicker schneiden, so wählt man entweder von vornherein geringereu Chromgehalt der Fixierungsflüssigkeiten oder bis zum 20fachen mit Alkohol von 70 Prozent verdünnte Farbe oder beides. Hier läßt sich keine für alle Objekte in gleicher Weise gültige Angabe machen. Zur Nachfärbuug der Kerne empfehle ich Alauucochenille nach C. Rabls Angaben. Es wirkt, nachdem das Objekt aus Alkohol von 80 Prozent (4pr.) 24 Stunden in Wasser gelegen hat. Das Alaun- cochenille ist vor jedem Gebrauch zu filtrieren. Die Einbettung darf nicht durch Bergamottöl vermittelt werden, da dieses den Chrom- lack löst. Dieses Öl kann bei zu dunkel gewordener Färbung zweck- mäßig zur Entfärbung, beziehungsweise Abschwächung der gefärbten und aufgeklebten Schnitte benutzt werden, bis zu dem Moment, wo durch Alkoholbehandlung der gewünschte Ton fixiert werden kann. Zur Einbettung sind Chloroform oder Zedernöl zu verwenden. Im übrigen ist der auf die beschriebene Weise erhaltene Chromlack eine sehr konstante V^erbindung, die nicht in kalt gesättigter wässe- riger Oxalsäurelösung, nicht in f]ssigsäure beliebiger Konzentration und Eisessig, nicht in Ameisensäure von 10 Prozent und in Salz- säure von 1 Prozent löslich ist. Eine Mischung von reiner Salzsäure, Glyzerin und Wasser kann zweckmäßig zur Naclimazeratiou ver- wendet werden, da die Farbe sich in dieser Mischung gut hält. XXI, 1. Schnitze: Über Stückfiirbiing mit Chromhämatoxylin. 9 Ich zweifle nicht , daß derjenige , welcher diese a on mir für Embryonen aller Wirbeltiere nnd für viele Organe erwachsener Orga- nismen, auch für Ptlanzenteile erprobte Methode benutzt , neben der jetzt fast ausschließlich geübten 8chnittfärbuug auch die Stückfärbuug wieder mehr zu ihrem Recht kommen läßt, in der Einsicht, daß im allgemeinen die geringere Zahl der angewandten Manipulationen so- wohl der Einfachheit halber, als mit Rücksicht auf gute Erhaltung- feiner Strukturverhältnisse den Vorzug verdient. Ich bin überzeugt , daß diese Methode imstande ist , in vielen Fällen die Eiseuhämatoxylinmethode M. Heidenhain s zu ersetzen, denn sie stellt in vortretflicher Weise nicht nur die Zellgrenzen ( Kittleisteuj , die Interzellularen, Bindegewebsfibrillen und Neuro- fibrillen dar, sondern auch intrazellulare Strukturen, z. B. in den Darmepithelien und den Nebenhodenzellen, kommen in schönster Weise zur Anschauung. Sehr zweckmäßig und durch keine Schnittmethode ersetzbar hat sich mir die auf Kaliumbichromatosmiumsäurepräparate angewandte Methode bei der Darstellung der ausgebreiteten sensiblen Neuroblastennetze erwiesen , die ich vor kurzem in der Haut der Amphibienlarven nachwies , und der Wert der Methode kommt naturgemäß überall da zur Geltung, wo das Zerschneiden der Teile nicht zum Ziele führen kann , sondern die feinere präparatorische und Mazerationstechnik ergänzend zur Mikrotomtechnik hinzukommt oder auch allein zu benutzen sich empfiehlt. [Eingegangen am 28. Mai 1904.] 10 Regaud: Le CoUodionnage des cellules, XXI, 1. Le Collodionnage des cellules. Methode de preparation applicable aux elements anato- miqiies naturellement oii artificiellement dissocies. Par Cl. Regaud, Professeur agrege a la Faciilte de medecine de Lyon. Une interessante commnnication de M. Heidenhaix^ m'engage n faire connaitre iine methode de preparation que nous avons iniaginee, M. le Dr. Barjon et moi, et dont nous avons publie un resume recemment. •^ Cette methode repond k peu pres au meme but que le procede indique par M. Heidenhain, mais eile a sur lui le grand avantage de permettre, dans la plupart des cas, la colo- ration des preparatio7is sivr lame, comme s'il s'agissait de coupes minces collees. Notre procede, auquel nous avons donne le nom de collodion- nage des cellules^ comprend les temps successifs suivants. l®"" temps. — Dissociatioii des cellules (s'il y a Heu) et fixation. — On peut proceder de plusieurs fagons differentes, sui- vant les cas. Voici quelques indications. 1*^ Elements anatomiques naturellement dissocies (par exemple : globules du sang-, elements du sperme, elements en Suspension dans les liquides des sereuses ou dans l'urine, etc.). A. Elements contenus en grande quantite dans le liquide (sang, ^) Heidenhain, M., Über die Verwertung' der Zentrifuge bei Gelegen- heit der Herstellung von Präparaten isolierter Zellen zu Kurszwecken. Diese Zeitschrift, Bd. XX, H. 2, p. 172. -) Barjon (F.) et Regaud (C), Nouveau procede pour l'etude histo- logique du sang et generalement de fous liquides tenant en Suspension des elements anatomiques naturellement ou artificiellement dissocies (Note deposee le 24 Janvier 1903), C. R. de la Soc. de Biol. (Paris), seance du 14 Nov. 1903. Note compleraentaire sur la methode de collodionnage des elements anatomiques dissocies, ibidem, seance du 28 Nov. 1903. XXI, 1. Reg and: Le CoUodionnage des cellules. 11 sperme , etc.). — Si on emploie l'acide osmiqiie a 1 ou 2 p. 100, ou le formol a 10 p. lOÖ, qiii ne coagiüeat pas (ou coagiileut lentemeut) les matieres albiirainoides des plasmas , ou fait tomber uue ou deux gouttes du liquide riche en cellules directemeut dans quelques ceutimetres cubes du liquide fixateur. On agite le melange (par exemple , en y soufflant de Fair avec une pipette effilee ) de maniere a bien separer les cellules et a eviter leur agglutination. — Si on desire employer des melanges fixateurs qui coagulent imme- diatement les matieres albumiuoides des plasmas (melanges contenant : acide cliromique, acide picrique , acide acetique , bichlorure de mer- cure, chlorure de platine, alcool, etc.), il faut au prealable, corame le recommande Heidenhain, laver les cellules avec de l'eau salee (Na Cl) au titre physiologique , puis les sedimenter (par centrifuga- tion ou par Sedimentation spontanee) et decanter le liquide surnageant. Autrement, la coagulation des albumiuoides par les fixateurs agglu- tinerait les cellules et nuirait beaucoup a leur bon isolement. Le lavage une fois opere, on procede 5i la fixation. B. Elements suspendus dans une graude quantite de liquide : urine, epanchement de sereuse, etc. II faut, avant la fixation, con- centrer les cellules , par centrifugation ou en les laissant se sedi- menter spontanement. Dans le cas d'un liquide fibrineux (epanche- ment pleural ou peritoneal), il est preferable d'eviter la coagulation spontanee, qui entraine un grand nombre de cellules. 2^ Elements anatomiques non dissocies naturellement : c'est le cas le plus general , qui se presente , par exemple , quand on veut preparer des cellules du foie , du rein , de la rate , de la moelle osseuse, des epitheliums gastrique, intestinal, vesical, seminaux, etc. II faut dissocier les cellules. On a le clioix entre un grand nombre de procedes, qu'on peut classer en trois groupes : a) Commencer par la dissociation mecanique (räclage), achever s'il y a lieu celle-ci par la maceration — fixation (alcool au tiers), ou fixer de suite par un fixateur approprie les cellules separees. b) Commencer par la fixation, par un fixateur approprie ; faire agir ensuite un liquide macerateur ; terminer par la dissociation mecanique (räclage, agitation sur un diapason electrique, etc.). c) Faire agir sur le tissu, un agent ä la fois fixateur et mace- rateur (par exemple: l'alcool au tiers, — l'acide osmique ä 1 p. 100, puis dilue ä 1 p. lOOOj et terminer par la dissociation mecanique. Quoi quil en soit , ä la fin de ce premier temps , on est en 12 Regaud:Le Collodionnage des cellules. XXI, 1. possessio!! de cellules dissociees, suspendues dans iiu liquide fixateur ou dans l'eau. 2* temps. — Premiere Sedimentation. — L'emulsion de cel- lules fixees est versee dans Fun des tubes en verre^ de la !nacliine ä centrifuger.- On ajoute de l'eau jusqu'a un centimetre du bord, environ ; on agite , pour le melanger , le contenu du tube , et on opere la centrifugatiou. 3® temps. — Lavage et deuxieme Sedimentation. — Le Sedi- ment est debarrasse (s'il y a lieu) du liquide fixateur par decantation. On remplace ce liquide par de l'eau distillee et ou agite le tube. On lave ainsi les cellules et ou les debarrasse de la plus grande partie du fixateur. Une deuxieme centrifugatiou donne de nouveau un Sediment qu'on debarrasse, par decantation, de l'eau de lavage. Ce 3® temps est naturellement supprime dans tous les cas oü la fixation a precede la dissociation. Meme dans le cas du sang, du sperme, des Sediments uriuaires, etc. on peut le supprimer quand on a employe comnie fixateur l'acide osmique ou le formol. 4® temps. — Deshydratation et collodionnage. — Sur le Sediment, lave ou non, on fait tomber goutfe ä goiitte quelques centimetres cubes d'alcool absolu, en agitant consta!nment le tube. L'alcool se melange a la petite quantite d'eau qui reste dans le tube et deshydrate peu ä peu les cellules. On verse ensuite dans le tube, en une seule fois, une quantite d'ether anbydre ji peu pres egale ä la quantite d'alcool employe. On agite, de faeon a, emul- sionuer finement les cellules dans le melange d'alcool et d'ether. Enfin on ajoute au melange environ dix gouttes de collodion officinal (pour dix centimetres cubes d'alcool et d'ether employes) et on agite une derniere fois le melange. A ce !nome!!t, les cellules sout a l'etat d'emulsion dans un ^) On peut souvent operer la fixation dans le tube meme de la centrifugeuse. -) Nüus nous servons d'une petite machine ä centrifuger electrique, dont les tubes sont portes direetement sur l'arbre vertical du moteur. Cette machine , tres peu encombrante et tres robuste , fait de 3 ä 4000 tours ä la minute, et centrifuge en 30 secondes environ les hquides dont il est ici question. Elle est vendue par la maison S. Maury, ä Lyon. Si on ne possede pas de machine ä centrifuger (electrique, hydrau- lique ou ä la main) on est oblige de laisser les cellules se deposer lente- ment par leur propre poids au fond du tube. XXI, 1. Regaiid: Le CoUodionnage des cellules. 13 melange d'alcool et d'ether collodioime , contenant iine faible trace d'eaii, non genante. 5® temps. — Etalemcnt et pelliculation du liquide. — Avee une pipette effilee sechs, on aspire un pen du melange collodionne, et on en depose iine goutte sur autant de lames porte-objets tres propres qu'on veut faire de preparations. Le melange s'etale cir- eulairement en couclie tres mince. An bout de quelques secondes, il est completemeut etale et ne coule plus lorsqu'on incline la lame de verre. Sans laisser sedier le collodion , on transporte alors les preparations dans l'alcool a 80^. L'alcool preeipite le collodion sous forme d'une pellicule mince et tres adherente qui englobe les cellules. Les preparations sont ensuite passees par l'alcool ä 60^ et enfin portees dans l'eau. Des lors elles peuvent etre manipulees de la meme maniere que de lines coupes histologiques collees sur verre. Dans toutes les manipulations ulterieures, il importe seulement d'eviter deux choses : 1 ^ l'emploi des couleurs teignant energiquement le collodion; 2^ l'emploi des liquides qui le dissolvent. Dans le cas, assez rare, oii on a besoin de colorer les cellules par une couleur teignant energiquement le collodion (par exemple, le mucicarmin de Mayer), il est indispensable de faire agir le colo- rant prealablement au collodionnage. II est tres facile de monter dans le bäume les preparations colorees. On les deshydrate en les faisant passer successivement par l'alcool a 80^, l'alcool absolu additionne de 10 *^7o ^^ chloro- forme, le chloroforme (ou le xylol) pur. L'alcool absolu, chloro- forme a 10 p. 100 ne dissout pas le collodion. Le melange d'alcool et d'ether collodionne contenant les cellules se eonserve indefiniment, et peut servir a plusieurs reprises jusqu'ä epuisement, pour faire de nouvelles preparations. II suftit de le tenir dans de petits flacons fermes par un bouchon de verre ou de caoutchouc recouvert de paraffiue. Lorsque nous avons fait connaitre ce procede , nous avions en vue, M. Barjon et moi , son application aux recherches de micro- scopie clinique. Compare au procede dit d'etalement et de dessi- cation rapides, presque universellement usite actuellement pour l'etude des elements du sang, le procede du collodionnage a des avantages et des inconvenients. Ses avantages sont de conserver parfaitement la forme et la structure des cellules •, son inconvenient est d'etre peu favorable a la diagnose des diverses varietes de leucocytes. 14 Paviow: Einige Bemerkungen über die Hämatoxylinfärbung. XXI, 1. Au contraire, l'etalement des leucocytes reud leurs granulations tres distinctes. Le collodionnage est excellent pour retiide du sperme, des Sediments urinaires, des cellules des epanchemeuts des sereuses. Je Tai applique tres avantageusement a la technique speciale des cours pratiques d'histologie dont je suis Charge. Gräce a lui, il est extremement facile de distribuer aux eleves d'un cours des spermatozoides, des globules du sang, des cellules hepatiques, intes- tinales , etc. , en supprimant presque totalement les difficultes dont la confection de semblables preparations etaient jusqu'ä mainteuant entourees. [Eingegangen am 28. Mai 1904.] Einige BemerkuDgen über die Hämatoxylinfärbung der Nervenfasern des Zentralnervensystems. Von W. Paviow in Charkow. Die von mir im nachfolgenden vorgeschlagene kombinierte Färbungsmethode der markhaltigen Nervenfasern des Zentralnerven- systems soll nichts prinzipiell Neues geben. Es stehen uns schon viele gute Methoden zu dem genannten Zweck zur Verfügung: Weigert, Pal, Kaiser, Vassale, Koultschizky u. a. haben aus- gezeichnete Methoden beschrieben. Sie alle geben vortreffliche Bilder, aber um mit ihnen erfolgreich arbeiten zu können, ist einige Übung erforderlich, die man nur mit Zeitverlust sich aneignen kann. Außer- dem leiden die meisten der bisher vorliegenden Methoden an dem Übelstand , daß man , besonders was die Dauer der Fixation , der Färbung etc. betrifft (z. B. „Färbung von 18 bis 24 Stunden", oder „von einer bis 3 Stunden, selten 24 Stunden" etc.) mit peinlicher Genauigkeit arbeiten muß. Auf Grund meiner persönlichen Erfahrungen kann ich eine Methodenkombination vorschlagen, die gar keine Übung voraussetzt. XXI, 1. Pavlow: Einige Bemerkungen über die Hämatoxylinfärbung. 15 Es genügt , die unten gegebenen Vorschriften gewissenhaft inne zu halten: auch der Anfänger wird dann prächtig gefärbte Präparate des Zentralnervensystems gewinnen. — Das Gehirn des Menschen wird spätestens drei Tage nach dem Tode — in Stücke von etwa 4 cm Durchmesser geschnitten. Die Stücke werden sorgfältig von der Membran befreit und bei 35^ C. in MtJLLER scher Flüssigkeit oder in Sprozentigem Kalium- bichromat fixiert. Die Flüssigkeit wird während der ersten Woche täglich erneuert, später zweimal in der Woche. Die Fixierung bei 35^ muß drei Wochen lang und hiernach noch eine Woche bei gewöhnlicher Temperatur fortgesetzt werden. Während dieser Zeit werden die Stücke gelblich-braun. Die so fixierten Objekte werden 2 Stunden lang in fließendem Wasser gewaschen und auf drei Tage in 75prozentigen Methylalkohol, dann auf drei Tage in absoluten Methylalkohol und auf fünf Tage in ein Gemisch von Methyl- alkohol und Äther zu gleichen Teilen gebracht. Von dort kommen sie auf eine Woche in die Celloidinmischung, in Kolloxylin oder Pho- toxylin.^ Diese Mischungen werden folgendermaßen bereitet: Die Lamellen des Celloidin (40 g) werden in feine Stückchen geschnitten und in der Mischung Alcohol methylicum concentr 500 g Aether sulfuric 500 „ aufgelöst. Bei Verwendung von Kolloxylin oder Photoxylin nimmt man auf 30 g Substanz 800 cc Äthermischung. Hiernach werden die Gehirnstücke in entsprechender Stellung auf Holz- oder Paraffinpfropfen gesetzt, mit derselben Mischung ab- gegossen und nach 15 Minuten in GOprozentigen Methyl-Alcohol gelegt , wo sie vollständig erhärten und sich viele Jahre ohne Ver- änderung halten, so daß sie später je nach Bedürfnis verarbeitet werden können. Wir bedienen uns eines Schanzen sehen Mikrotoms mit einer Wanne, die mit öOprozentigem Aethyl- oder Methylalkohol gefüllt wird. Die Schnitte werden in mit destilliertem Wasser gefüllte Petri- Schalen gelegt, zu 10 bis 15 oder 20 Stück in jede. (Die Zahl der Schnitte hängt von der gewünschten Genauigkeit in der späteren Reihenfolge der Schnitte ab.) 1) Alle erwähnten Manipulationen müssen im Dunkeln ausgeführt werden. 16 Paviow: Einige Bemerkungen über die Hiimatoxylinfärbung. XXI, 1. Die Scharaten von Kieselscliwämmen. Von R. von Leudenfeld in Prag. Da ich mit der fraktionierten Sedimentation , die ich bei der Untersuchung- der tetraxonideu Spongien der Valdivia-Sammlung zur Herstellung von Nadelpräparaten anwende , recht gute Ergebnisse erzielt habe, will ich diese Methode hier mitteilen, obwohl sie nur in ihrer Anwendung auf Spongiennadeln, nicht aber an sich, neu ist. Will man mit Hilfe dieser Methode ein Nadelpräparat herstellen, so verfährt man folgendermaßen. Man nimmt ein bis haselnußgroßes Stück des Schwammes und kocht es in Wasser aus. Dann füllt man eine Eprouvette, deren Durchmesser mindestens doppelt so groß wie der Durchmesser des Schwammstückes sein soll , je nach der Größe des letzteren, l^o bis 3 Finger hoch mit konzentrierter Sal- petersäure ; legt das ausgekochte Schwammstück hinein ; läßt es einige Stunden bei gewöhnlicher Temperatur darin liegen und kocht dann so lange, bis die Säure eine lielle Farbe erlangt. Dann füllt man die Eprouvette fast bis oben mit destilliertem Wasser, schüttelt kräftig und läßt etwa 20 Sekunden (länger bei durchaus klein- nadligen, kürzer bei Spongien, deren größte Nadeln sehr voluminös und schwer sind) absetzen. Hierauf gießt man, unter Zurücklassung des gebildeten Sedimentes, die Flüssigkeit in eine zweite Eprouvette 5 läßt genau doppelt so lange, wie in der ersten, absetzen; gießt eventuell noch in eine dritte , wo man doppelt so lange, wie in der zweiten, sedimentieren läßt, ab und setzt dies — immer unter Verdoppelung der Sedimentationsdauer — so lange fort, bis keine mit freiem Auge sichtbaren Nadeln mehr in der Flüssigkeit schweben. Gewöhnlich tritt dieser Fall schon nach dem zweiten oder dritten Sedimentieren ein. Die also von den größereu Nadeln befreite Flüssigkeit, in der nur mehr die kleinen Nadeln schweben, wird auf Zentrifugen-Tuben abgegossen, worauf diese 1^2 Minuten zentrifugiert werden. Die die großen Nadeln sortiert enthaltenden 24 Lendenfeld: Über die Herstellung von Nadelpräparaten. XXI, 1. vSedimente in den Eprouvetten werden durch mehrmaliges Hinzufügen destillierten Wassers, Aufschütteln, Sediraentieren und Abgießen aus- gewaschen und auf Objektträger ausgebreitet. Von diesen wird die Flüssigkeit vorsichtig durch langsames Neigen abgegossen , worauf die Objektträger zwecks Beseitigung eines möglichst großen Teiles der Flüssigkeit vertikal gestellt und dann, wieder horizontal gehalten, über der Flamme getrocknet werden. Nun bedarf es nur der Hinzu- fügung des Balsams oder Damarlacks und eines großen Deckgläschens, um das Präparat fertig zu machen. Aus den zentrifugierten Tuben wird die Flüssigkeit sorgfältig abgegossen, so daß die kleinen in der Kalotte angesammelten Nadeln zurückbleiben. Es wird dann frisches destilliertes Wasser hinzugefügt, geschüttelt und nochmals l^/g Mi- nuten zentrifugiert, worauf das nun hinreichend gewaschene Sediment in der Kalotte mit der Pipette aufgenommen und auf einem oder mehreren Objektträgern ausgebreitet wird. Die weitere Behandlung ist dieselbe wie oben, nur muß man beim Neigen und Abgießen der Flüssigkeit noch vorsichtiger verfahren. Mit Hilfe dieser Methode erhält man alle Nadeln, auch die kleinsten und zartesten Mikrosklere , in großen Massen in den Prä- paraten , so daß einem auch die seltener vorkommenden nicht ent- gehen. Ich habe mit Hilfe derselben nicht nur bisher ganz un- bekannte Mikrosklerenformen aufgefunden, sondern auch bei alt- bekannten Spongien, wie der Tethya (Tetilla) cranium, das Vorkommen von Mikrosklerenformen nachweisen können , die allen früheren Be- obachtern entgangen sind. Auch die durch diese Methode erzielte Sortierung der megaskleren Nadeln nach der Größe ist von beträcht- lichem praktischen Werte, weil sie die Bestimmung der dimensionalen und morphologischen Variationsgrenzen der einzelnen Nadelformen wesentlich erleichtert. [Eingegangen am 6. Juli 1904.1 XXI, 1. Harz: Jodparaffinöl, ein Mikroreagens und Einbettungsmedium. 25 Jodparaffiiiöl, ein neues Mikroreagens und Einbettungsniedium. Von Dr. C. 0. Harz in München. Dieses Präparat wird durch Auflösung- von 1 Teil Jod in 100 Teilen neutralen und farblosen Paraffinöles ^ unter Anwendung gelinder Wärme dargestellt. Dasselbe besitzt die prachtvoll rote Farbe einer Lösung von Jod in Schwefelkohlenstoff. Ich habe nun seit längerer Zeit teils mit diesem, teils mit dem nicht jodierten Paraffinöl verschiedene mikroskopische Demonstrationspräparate gefertigt und zum Teil vor- zügliche Resultate erzielt. Es eignen sich zum Einbetten in Paraffinöl außer den früher 1. c. erwähnten Spaltpilzen etc. vorzüglicli auch die Sporangien und Sporen der Farne , Schachtelhalme und Lyco- podiaceen, PoUenköruer, die Sporen der Basidiomyceten und anderer Pilze, ferner die Myxomyceten und andere Protisten, Kristalle, Stärke- körner, Holzschnitte und sonstige harte Gewebe, Gespinstfasern etc. Für jodierte und nicht jodierte Stärkekörner eignet sich das Jodparaffinöl oft vorzüglich und kann gelegentlich als diagnostisches Mittel dienen. So bewirkt dasselbe bei Kartoöelstärke eine Gelb- bis Dunkelgelbbraunfärbuug der meisten Körner , wobei der Kern und eine ihm sich anreihende, oft pferdeschweifähnliche Masse braun bis dunkelbraun erscheint. Einige wenige Prozente werden gebläut und etwa ebenso viele bleiben farblos. Arrow-root verhält sich etwas anders : Eine kleinere Zahl der Körner färbt sich braun bis dunkel- braun oder etwas mehr gelb und die Mehrzahl bleibt farblos ; eine pferdeschweifartige innere Masse ist nicht vorhanden ; nur sehr ver- einzelte Körner werden blau bis blauschwarz. Die Stärke von Convolvulus Batatas (aus Dar-es-Salam erhalten) färbt sich rasch durchgängig grau- oder blauviolett bis braungrau , während die ihr 1) Vgl. Harz, Dr. C. 0., Diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 187—188 und ebenda p. 292. 26 Harz: Jotlparnftinöl, ein Mikrorea^ens und Einbettungsraedium. XXI, 1. zum Verwechseln ähnliche Cassave (lange Zeit) farblos bleibt und sich schließlich kaum merkbar abtönt. Dieses eigentümliche Verhalten ist offenbar bedingt durch Ver- schiedenheiten in der Dichte des molekularen Aufbaues der einzelnen Körner, welche variiert nicht nur bei verschiedenen Pflanzenarten, sondern auch noch innerhalb derselben Spezies, selbst derselben Zelle. Mit der festeren oder lockeren Struktur wechseln wiederum Luft- und Wassergehalt der einzelnen Körner , wodurch die Färbungen gleichfalls nuanciert werden können. Die Stärke ist demnach keineswegs gleichartig beschaffen, sondern, zumal in der Dichte und Härte, also auch in der Angriffsfähigkeit durch abbauende Substanzen , innerhalb gewisser Grenzen sehr ver- schiedenartig beschaffen. Daher kommt es auch, dala, wie ich a. a. 0.^ nachgewiesen, verschiedene Stärkearten, wie z. B. Kartoffel-, Getreide- und Reisstärke, sehr verschiedene Mengen von Jod absorbieren, ein Verhalten, welches beim vorherigen Verkleistern teilweise wieder ausgeglichen wird. Außer den Stärkekörnern halten sich auch die aus Kartoffel- stärke bereiteten C. J. LixXtner sehen Amylodextrinkörner (lösliche Stärke), sowie die Körner aus Lintners Erythrodextrin I und IIa und II /5 bestehend, in ihren charakteristischen Färbungen sehr schön und lange in Jodparaffinöl (für Demonstrations- und Vergleichs- zwecke). Das Verfahren, derartige Präparate herzustellen, kann natur- gemäß variiert werden; einfach ist folgendes: Die Stärkekörner werden auf dem Objektträger oder auf dem Deckglas mit destilliertem Wasser oder mit Jodlösuug (l Prozent Jodkaliumlösung durch Jod gesättigt) dünn ausgebreitet; man läßt nach Belieben an der Luft oder bei gelinder Wärme eintrocknen und bettet nun ein in gewöhn- liches oder in jodiertes Paraffinöl. Der Verschluß geschieht mittels 10 Prozent Gelatine, die zuvor erwärmt wurde. Wünscht man eine sehr starke Jodwirkung, so bedeckt man die noch wässerig-feuchte Stärke mit einem Glastrichter, in dessen Tubus sich mit Jodtinktur benetzte Watte befindet. Noch sei bemerkt, daß man Srärkekörner mit alkoholischen Lösungen der verschiedensten organischen Farbstoffe sehr gleich- 1) Harz, Dr. C. 0., Über Jodstärke in „Alkohol" Jahrg. 1898, No. 8. — Sitzungsber. d. Ges. f. Morphologie u. Physiologie in München Bd. XIV, 1898, p. 127—132. XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare iin punto. 27 mäßig färben kann ; nachdem sie trocken geworden, liefern dieselben mit Paraffinöl oder mit Jodparaftinöl oft sehr schöne Dauerpräparate, die je nach der Einwirkung des Jods auf die Pigmente und die Stärke selbst mannigfache Verfärbungen erleiden können. [Eingegangen am 22. Juni 1904.] [Istituto di Zoologia ed Anatoraia comparata dell'Universitä dl Messina.] Tre nuovi metodi per lissare e ritrovare al micro- scopio un j)unto (jualuiK^ue di un preparato/ Per Dr. Luigi Sanzo, Assistente. Con quindici intagli in legno. Varii metodi sono stati proposti per potere con molta facilitä ritrovare, quando che bisogni, un punto qualunque su di un prepa- rato per osservazioni microscopiche ; ma tutti non vanno esenti da inconvenienti di varia natura. Cosi non vanno in genere accettati quei metodi pei quali si fanno dei segni, in qualunque maniera, sul copri- oggetti. II segnale fatto vicino al punto da ricercare , se questo faccia parte di un'intiera sezione, viene ad impedirne l'osservazione d'insieme e la formazione di un sicuro e preciso concetto suUa sua posizione topogratica. Vero e che esso concetto e giä stato formato in precedeuza ; ma spesso, anche dopo ripetute osservazioni, si sente il bisogno di rivedere , ed in questo caso bisognerebbe cancellare il segnale , perdendosi cosi il luogo di ritrovo del punto interessante. Se questo invece e isolato , puo anche darsi che sotto il segnale corrispondano altri punti isolati e di cui puö, quando che sia, tornare 1) Della presente memoria fu dato un breve resoconto alFAccademia Peloritana di Messina nella seduta del 16 Gennaio 1904. 28 Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un pnnto. XXI, 1. utile l'osservazione. E bisogna far notare ancora rinconveniente che se ne ha osservando con obbiettivi ad immersioue, se il segno, come nel raaggior niimero dei casi, e fatto con sostanza il cui residuo piio essere disciolto daU'acqiia o dall'olio che si adopera in tal circo- stanza; ne verra evidentemente disturbata l'osservazione microscopica. A questi inconvenienti se ne aggiungono altri di natura speciale in rapporto aH'apparecchio usato a tracciare sul porta-oggetti dei segni di ritrovo. Trovato poco preciso fare a mano codesti segni, furono escogitati diversi apparecchi. Cosi il Klönne a Berlino costruisce un marcatore il quäle viene niesso al posto deH'obbiet- tivo dei microscopio , al momento di doversi notare sul preparato il punto che si vuole. L'estremita inferiore ad anello e bagnato con bitume di Giudea, di modo che, abbassandosi lentamente il tubo dei microscopio, si lascia sul copri-oggetti un'impronta a cerchietto. Vero e che esso apparecchio e fatto in maniera che, appena avra toccato sul copri-oggetti, per uno scatto a molla ritorni in su ; tuttavia, per quanto cautamente si possa abbassare il tubo dei microscopio, per quanto sensibile possa essere la molla a scatto, non e atfatto esclusa la possibilitä che, apportaudo una qualsiasi pressione sul copri-oggetti, non si possa rovinare il preparato se fresco e si tratti di tessuti troppo delicati. Tanto meno poi sono da raccomandarsi l'apparecchio dello ScHiEFFERDECKER^ c qucUo dcl FuESS^ per cui il cerchietto anziehe segnato, viene nientemeno inciso con il diamante sul copri-oggetti. Privo di tutti i suesposti inconvenienti e di molta precisione sarebbe invece il tavolino translatore per cui si possono dare al porta-oggetti due movimenti ortogonali tra loro e si puo leggere in millimetri e decimi di millimetri la posizione dei punto interessante. Se non che esso apparecchio ha il gravissimo inconveniente di costar troppo (cento e piü lire), di modo che la sua applicazione e limitata di molto. Ed invero quando si parla di prezzi piü o meno elevati ci si riferisce non al valore in se dichiarato dalle cifre, sibbene al rapporto tra questo valore e la necessita piü o meno sentita del- l'apparecchio relativo. Cosi certamente utile e un mezzo per poter trovare con prestezza un punto interessante, ma non e poi assoluta- mente necessario ; perche con un pö di tempo e pazienza si riesce ^) ScHiEFPERDECKER , P. , Über einen Apparat zum Markieren von Teilen mikroskopischer Objekte (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. III, 1886, p. 461). -) FuESS, R. , Apparat zur dauernden Kennzeichnung etc. (Neues Jahrb. f. Mineral, etc. Bd. I, 1895). XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un punto. 29 alla fine n trovare nel preparato ([uel che si cerca. Cosi il prezzo in cento life del tavolino translatore appare altameiite elevato, e se esso apparecchio trovasi in nnico esemplare negli istituti scientifici, difficilinente corapare nel corredo di accessori di clii a proprio spese disponga di un microscopio. Dal punto di vista econoiuico bene si presterebbe il nietodo pro- posto dal DE Vescovi^; pero ancli'esso va incontro a varie difficolta 1. pratiche che ne bauno ostacolato l'uso. II de Vescovi (fig. 1) traccia sulla piattaforma del microscopio quattro rette indefinite e ]);issanti virtualmente per la proiezione del centro ottico del campo visuale in modo che ciascuna retta e a 45 gradi colle contigue. Ora quando si vuol fissare un punto interessante „si segna leggermente verso i margini del porta-oggetti con inchiostro od altro , tre i)unti lungo tre linee contigue del sistema , badando di evitare che i tre punti- 1) Vescovi, P. de, Un semplicissirao marcatore geometrico per luicrogratia (Zuolog. Anzeiger Bd. XV, 1892, p. 203—205). 30 Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un punto. XXI, 1. ciui rappresentiiio i vertici di un triangolo rettangolo che necessaria- meute sarebbe isoscele". Voleiulo marcare piii puuti suUo stesso vetrino „si possono segnare le diverse terne di pmiticini con colori diversi oppure dift'erenziarle con lettere , numeri od altri segni a piacere". Sebbene il suddetto nietodo del de Vescovi, matematicamente considerato ^ sia esatto , pure nel campo pratico presenta non poclii 2. inconvenienti per i quali nou e entrato nell'uso di ogni microscopista. II DE Vescovi asserisce che „grande o piccolo che sia il piattino del microscopio , hi marcazione si puo fare sempre e bene". In realtä perö , date le dimensioni sia della piattaforma dei microscopi che quella dei porta-oggetti in uso, vi sono delle posizioni del pre- parato iielle quali non e possibile segnare verso l'orlo del porta- oggetti, cosi come insegna il metodo de Vescovi, tre punti lungo tre ') Vescovi, P. de, L'indicatore g-eometrico per 11 microscopio mate- maticamente Cdnsiderato (Monitore zoologico italiano vol. VI, 1895, p. 48 — 51). XXI, 1. Siinzo: Tre nuovi metodi per üssare e ritrovare un punto. 31 linee contigue. Si consideri infatti la figiira 2. Se e possibile segnare all'orlo del porta-oggetti diie piinti corrispondenti alle sottostanti rette a e b, non sara possibile far lo stesso per la retta c che trovasi completamente sotto il preparato e non arriva aU'orlo di esso. Volendo segnare il terzo punto anche contrariameute alla norma data dall'autore, ciö non sara fattibile che tra lo spazio intercedente fra il cartellino di annotazioni ed il copri-oggetti , ovvero sul copri- oggetti medesimo. Nel primo caso ove si avverino le condizioni rappresentate nella figura 2 , in ciii il cartellino riesce viciuo al copri-oggetti , se il preparato e fresco , potra trovarsi nello spazio interposto, del balsarao non ancora ben condensato, dove ogni segnale riesce presso che impossibile ; senza dire poi che in tal caso ana- loghe difficolta si ripeterebbero per i punti da segnarsi suUe rette a e h. Nel secondo caso facendo dei segnali siü copri-oggetti si andrebbe incontro agli inconvenienti gia esposti in principio ; ed e da agginngersi che anche quando ciö potesse farsi senza alcun pregiudizio dell'osservazione microscopica, se si sentisse una qualche volta il bisogno di pulire la superficie superiore del copri-oggetti, non sarebbe esclusa la possibilita di far scomparire qualche segnale gia fatto. Per l'esattezza del motodo bisogna poi guardare verticalmente sul posto ove si vuol segnare, perchö altrimenti a seconda dell'inclina- zione della linea d'osservazione si avrebbe , pur rimanendo fermo il porta-oggetti, una differente posizione del segnale da farsi ; e nuoce- rebbe al ritrovamento del punto interessante se, nel far corrispondere i tre punticini coUe linee segnate sulla piattaforma, l'osservatore non si rimettesse nella stessa posizione che nel marcare i punticini sud- detti. Ora e facile ad intendere quanto sia difficile valutare e ri- cordare l'obbliquitä deUa linea d'osservazione ; da qui il bisogno, anche espresso dall'autore , di osservare normalmente sul posto da segnare. Orbene nel caso (fig, 3) in cui una delle tre linee contigue, sulle quali e da segnare la terna dei punti , sia necessariamente la linea antero posteriore «, se la piattaforma non e girevole, l'osservazione in senso verticale ad un punto di essa linea, sani ostacolata e dal tubo del microscopio e dal porta-obbiettivi a revolver se vi se trova. E da osservare inoltre che nel maneggio del preparato puö accadere di rovinare coUe dita i segnali fatti ai bordi del vetrino. Se si hanno da marcare piü punti interessanti del medesimo prepa- rato, perclie le terne siano distinte tra loro, bisogna pur teuer pronti 32 Sanzo: Tre nuovi metodi i^er fissare e ritrovare im punto. XXI, 1. inchiostri di vario colore; seuza dire poi che il residiio secco di un colore potra piü facilmente che non la sua soliizione, confondersi con qiiello di un altro colore. Si hanno insomma per non andar troppo per le hinghe, degli inconvenienti dei qiiali alciini gravi, qiiali i primi due accennati, altri di non molto valore e vero, se considerati separata- mente, ma che neU'insienie e di unito a quelli di piü alto peso, finiscono per rendere pochissimo usato un metodo che teoricamente sarebbe molto esatto, ed economicamente quasi di nessun costo. Si potrebbe pensare di usufruire delle linee tracciate dal DE Vescovi e segnare su di ognuua una divisione in millimetri e mezzi millimetri a contare dal centro del foro della piattaforma. Per fissare un punto basterebbe leggere a che distanza da esso centro tre linee contigue del sistema vengano fuori di sotto del pre- parato. Pero se cosi sono evitati tutti gli inconvenienti di quei metodi pei quali devono esser fatti dei segni sul preparato, restano sempre, come ho notato per il metodo de Vescovi, delle posizioni analog-he a quelle della Hgura 2 dove una delle tre linee non arriva XXI, 1. Sanzo: Tre nm)vi metodi per lissare e ritrovare un punto. 33 agli orli del preparato ; ed auclie qui la lettura , per essere esatta, dovrebbe essere fatta in seuso normale , cosa molto incomoda se iina delle linee e l'antero posteriore (fig. 3, a). Vengo pertanto a proporre tre nuovi metodi che mirano ad evitare gli inconvenienti dei metodi ai quali ho accennato. Primo metodo. Segno sulhi piattaforma del microscopio (fig. 4) due linee indefinite «, ö, da destra a siuistra, parallele fra loro e distanti Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 3 34 Sanzo: Tre nuovi raetodi per fissare e ritrov^are iin punto. XXI, 1. ciascuna di iin centimetro dal centro del foro della piattaforraa, perpendicolarmente a queste segno le linee c e d anclie equidistauti di Uli centimetro dal centro del medesimo foro. Divido le suddette linee in millimetri e mezzi millimetri cosi come e indicato nella figura 4. Per fissare un punto che interessi, con una manovra che non incontra alcuna difficoltä (basta provarcisi una sola volta) , si fa delicataineute girare il porta-oggetti intorno al punto che resta in osservazione , in modo che il lato anteriore,^ vale a dire mj^i venga a mettersi parallelamente ad una delle due linee trasversali, e si legge su due linee ortogonali tra loro , nel nostro caso suUe rette c e b -p. e., a che punto esse linee sono rispettivamente tagliate dal lato anteriore mj) e dal laterale 2JQ- Si noterebbe cioe : c = 31 mm ; b = — 36^/„ mm. Per ritrovare il punto suddetto basta rimettere il vetrino sulla piattaforma in modo che il lato anteriore , sempre pa- rallelo ad una delle due linee trasversali, tagli a 31 mm la retta c, ed a — 36^/o mm la retta b. II parallelismo fra una delle due linee trasversali ed il lato anteriore del porta-oggetti, quando questo lato venga ad interessare entrambe le rette c e d^ puö essere raggiunto con esattezza quasi matematica, se si bada che l'una e l'altra di queste due rette vengano incontrate dall'orlo del vetrino alla medesima distanza dal loro rela- tive punto di partenza. Nel caso tuttavia che una sola delle due rette venga ad essere interessata dal vetrino , per essere questo troppo spostato a destra o a sinistra, non mi e occorso mal di errare di tanto che il punto da ritrovarsi venisse a star fuori dal campo di osservazione la quäle, per altro, si fa dapprima con lenti di lieve ingrandimento , e poi , accentrato meglio il punto interessante , con lenti piü forti. L'annotazioue c = 31 mm; b == — SG^/^ mm, uou ha bisogno di altra aggiunta per essere sufficiente a far ritrovare il punto desi- derato, se si ha Favvertenza di tenere sempre a sinistra il cartellino delle annotazioni, o sempre il medesimo nel caso che ve ne fossero due. S'intenderä di leggieri che la misura relativa alle rette c o d determina la posizione del lato anteriore, mentre quella relativa alle rette b od a determina la posizione di uno dei lati destro o sinistro del preparato , secondo che il numero sia rispettivamente preceduto dal segno — o dal segno -f • L'annotazioue b = — 36^/o mm non si >) Parlando di lato anteriore del porta-oggetti, bisogna intendere, qui cd in appresso, sempre a sinistra iP cartellino di annotazioni. XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un punto. 35 ,11 piK) che riferire al lato tlestro; cli6, se si riferisse al lato sinistro, tutto il porta-oggetti resterebbe fuori del campo di osservazione. Con qiiesto metodo pertanto si evitano gli inconvenienti dei rnetodi, iiichiso quello del de Vescovi, pei quali si fainio dei segnali sul vetrino sia copri che porta-oggetti. 8e la piattaforma lia nna lunghezza da destra a sinistra non inferiore a quella del vetrino in uso non si da mai il caso che due lati cousecutivi del porta-oggetti (uno anteriore e l'altro laterale) non intercettiuo due ortogonali, suf- ficienti alla fissazione del punto centrale nel campo d'osservazione, raentre col metodo de Vescovi , anche con vetrini molte piccoli , la cui lunghezza superi di poco la metä di quella da destra a sinistra della piattaforma, si danno delle posizioni analoghe a quella rap- presentata nella figura 2 , nelle quali non si riesce a tracciare la terua dei punti corrispondenti a tre linee conseeutive del sistema. Per evitare errori di parallassi, bisogna guardare verticalmente sul punto in cui la retta della piattaforma viene tagliata dall'orlo del vetrino. Secoudo metodo. Si propone di evitare gli errori che potrebbero derivare nel metodo I se la lettura sulle linee tracciate suUa piattaforma non fosse fatta in senso verticale. Segno come per il metodo I le linee «, Z>, c, d^ 5. perö senza tracciarvi divisione milli metrica (tig. 6). Messo il vetrino con il lato anteriore parallelo ad una delle due rette a b faccio combaciare con esso e con uno dei due lati destro sinistro secondo che il vetrino sia spostato maggiormente a sinistra a destra, una squadrettina appositamente costruita. Essa e formata (fig. .5) da due bracci a e 6', ad angolo retto fra loro , con una piccola insenatura ni al luogo interno della loro riunione ; ogni braccio mostra la superficie superiore incliuata ad angolo acuto suUa inferiore che poggia sulla piattaforma in modo che l'orlo esterno n mostrasi quasi tagliente. La lunghezza di ogni braccio e di 3 centimetri e mezzo, la larghezza di 4 millimetri, e la massima altezza di 2 . millimetri. Sulla superficie superiore e tracciata una divisione in millimetri e mezzi millimetri, e la numera- zione del braccio n' e progressiva in ordine a quella del braccio //. Fatta adunque combaciare la suddetta squadrettina con due lati •!* 36 Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un punto. XXI, 1. consecutivi del porta-oggetti, uno anteriore e l'altro laterale, si legge sulla divisione millimetrica a che pimto due linee ortogonali della piattaforma si veggano uscir fiiori al di sotto dei due bracci, e se ne piglia nota. Cosi nel caso della figiira 6 si avrebbe da notare : ö = 50 mm c = 2^/^ mm. ^((V'/j'myyvyvmyr/yw'/mv'/'/y'/'/'/'/'' Quando si vnol ritrovare esso punto interessante del preparato, si rimette la squadra , mantenendo un braccio perpendicolare alle due linee trasversali, iu maniera da far coincidere la numerazione letta ed annotata per ciascun braccio sulle due relative ortogonali e nel uostro caso sulle rette b e c. I bracci della squadrettina siano sempre uno anteriore e l'altro laterale. Bastera quindi far coincidere XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi iiietodi per fissare e ritrovare un ijiinto. 37 l'orlo anteriore e laterale del porta-oggctti con la superficie interna della sqiiadra, perche il piinto ricercato cada sotto il campo del- l'osservazione microscopica. L'obbliquita della superficie snperiore di ogni braccio, fa vedere la linea della piattaforma in contatto della divisione millimetrica della sqnadra , di guisa che la lettnra piiö farsi anclie guardando obbliquamente senza paiira d'incorrere in errori di parallassi. Date le dimensioni della squadrettina, anclie con porta-oggetti di forraato inglese, che sono i piü lunglii tra quelli comunemente usati, basterii una larghezza di 8 centimetri e mezzo per la piattaforma perche il 2^ metodo possa comodamente venir usato. — La spesa e tenuissima. Ognnno puo anche da se tracciarsi, con qualunque mezzo, le linee da me ideate. Con poclii centesimi ci si piio far costruire suUe dimensioni citate , iina squadrettina in rame senza divisione millimetrica la quäle si fa invece a penna sopra due striscioline di carta, da incollarsi rispettivamente sopra i due bracci. Se la divi- sione e stata fatta con finezza si riesce a vahitare fino ad ^/^ di millimetro. Koristka a Milano vende , per altro, la suddetta squa- drettina con incisa la divisione millimetrica, al prezzo di lire sei. Terzo metodo. Con questo metodo, senza escludere che per microscopi di una data grandezza possano comodamente essere usati i metodi precedenti, mi son proposto di risolvere : che la marcazione di un punto interessante possa farsi anche SU microscopi di piccolo modello 5 che si possano usare vetrini di maggiori dimensioni che quelli di formato inglese ; che non ci sia la necessitsi, come nei metodi precedenti, di far girare il porta-oggetti sul centro di osservazione , per dare ad esso una determinata posizione ; che si eviti una lettura in niillimetri e parti di millimetro, la quäle puo per alcuni otfrire qualche difficolta ; che nessun segnale si faccia sul copri porta-oggetti ; che il metodo sia molto semplice ed apporti una tenuis- sima spesa. A tiitti questi intenti, senza tracciare alcuna linea sulla piatta- forma, giova un marcatore costituito da due telaietti articolati a cerniera tra loro. Ogni telaietto (fig. 7) e costituito da tre bracci Ä, B, C: Ä e C sono paralleli fra loro, B li unisce facendo angolo retto con ciascuno di essi. Le dimensioni in altezza, lunghezza e larghezza 38 San zu: Tre nnovi metodi per fissare e ritrovare un piinto. XXI, 1. convenienti per ciascun braccio sono quelle dalla figiira stessa rap- presentate. Giova tuttavia far notare, perclie servira in appresso a QO dimostrare che l'apparecchio e adattabile a vetrini di grandi dimen- sioni che le lungliezze interne dei bracci sono : XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi uietodi i)or ti.ssare e ritruvare uii piinto. 39 mn = mm 35 P7 = mm 85 np = m 50. La siiperficie superiore dei tre bracci trovasi sullo stesso piano ; pero quella inferiore del braccio C, costitnito da una moUa d'acciaio, D D per essere lo spessore di qnesta dne millimetri meno che lo spessore dei bracci A q B^ trovasi a due millimetri di altezza dal piano inferiore di qnesti dne bracci, val qnanto dire dalla snperficie della piattaforma qnando il marcatore vi g., poggi sopra. Dal braccio B si parte nn'aletta D clie si va assottigliando verso i bordi e con la snperficie inferiore sullo stesso piano della snperficie inferiore del braccio da cni si parte. Vi si nota nn foro f pel passaggio di una vite. In £", E' si ha l'articolazione col sovrastante telaietto (fig. 8, b) identico e disposto simmetricamente al prirao. Cosi la snperficie dei tre bracci, in nno stesso piano, la quäle nel telaio a viene a trovarsi superiormente, nel telaio h diviene inferiore. Fra queste dne snperficie passa il virtuale piano di simmetria due alette i), D' per il minore spessore che i bracci relativi da cni si partono, vengono a trovarsi ad una certa distanza fra loro (fig. 10), 10. Le 40 Sanzo: Tre nuovi rnetodi per fissare e ritrovare un punto. XXI, 1. e possono essere avvicinate od alloiitanate mediante una vite che si puo far girare per mezzo della rotellina g. Airavvicinarsi delle alette i due telai clie hanno rarticolazione in E^ E\ si allontauano ; e si avvicinano invece all'allontanarsi di quelle. Se cosi fatto mar- catore si fa ruotare intorno alla retta xy^ di 180 gradi , si otterra la posizione rappresentata dalla figura 9 ; il telaietto superiore {b) e divenuto inferiore e viceversa. La simmetria dei telaietti in rapporto al loro piano di combaciamento , permette appuuto l'uso del niarca- 11. tore tanto nella posizione data dalla figura 8, quanto da quella data dalla figura 9. Quando si vuol fissare un punto che interessa, girando di poco la rotellina g si aprono i due telai in modo che fra essi , poträ liberamente farsi scorrere una strisciolina di carta ; e si fanno com- baciare (fig. 11 e 12) le due facce interne ad angolo retto dei bracci Ä e B (vedi fig. 7) con l'orlo anteriore ed uno dei laterali, destro o sinistro , del porta-oggetti il quäle frattanto si tiene fisso con le dita sulla piattaforma. XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi raetodi per fissare e ritrovare un punto. 41 Se il punto da marcare si trova presso che sulla linea mediana del porta-oggetti sara indifferente adottare pel marcatore la posi- zione che ha nella figura 11 o 12; se il vetrino invece e meno spostato a siuistra dal foro deüa piattaforraa, allora al marcatore si darä la posizione della figura 1 1 ; mentre se e meno si)Ostato a destra, allora si dani ad esso la posizione della figura 12. Nel primo caso sono le facce interne del telaio a quelle che sono a contatto con il vetrino, nel secondo caso invece quelle de telaio b. 12. Nell'una e nell'altra posizione il braccio C che e, come si disse, a due millimetri di altezza dalla piattaforma, restera sul preparato senza venirne a contatto. Fatto combaciare adunque il marcatore con il vetrino, in una strisciolina di carta un po' rigida, carta cilindrata od oleata , si fa mediante un sottil ago, un piccolo foro, ed attorno a questo, merce un lapis , un cerchio oscuro per renderlo meglio rejteribile. Si fa scorrere questa strisciolina di carta orizzontalmente fra l'uno e l'altro telaietto in modo che il foro praticato si mostri , allosservazioue 42 Sanzo: Tre nuovi metodi per fissaro e ritrovare un punto. XXI, 1. microscopica al di sopra del puuto interessante e lo renda visibile perciö (fig. 13). Si fissa allora la carta in questa posizione col far conibaciare, girando la rotellina //, i due telaietti ; e, tolto il marca- tore dalla piattaforma con nn lapis a pnnta finissima si segna sulla carta , percorrendo Torlo interno dei due bracci A e B in contatto 13. con essa, due linee che riescono ad angolo retto, essendo ortogonali essi due bracci. Queste linee nel caso della posizione del marcatore secondo la tigura l.'i, riescono disposte come l-t; e nel caso della posizione figura 12, come in 15. Quando si vuol ritrovare il punto che interessa , si rimette la Striscia di ' carta fra i due telai e si fanno rispettivamente coniba- ciare le due linee a e b con i due orli delle facce interne dei XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi metoili pur tissare e ritruvare im puiito. 4;} bracci A e B. Fissata cosi la carta, meroi' la rotelliiia //, posto il marcatore suUa piattafonna in maniera che il cerchio oscuro si mostri siiUa pagina superiore della strisciolina di carta, si fa com- baciare con le facce interne dei bracci Ä e B del telaio inferiore, il porta-oggetti ; si fa combaciare cioe la faccia interna del braccio B con l'orlo anteriore del vetrino e quella del braccio Ä con il lato destro o siuistro del preparato secondo che la strisciolina a le due linee seguate come nella figiira 15, ovvero come nella figiira 14. Muovendo tutto il sistema, marcatore e preparato, si mette al centro di osservazioue il forellino in canipo oscuro. Basta allontanare il marcatore perclie, tenendo fermo colle dita il preparato sulla piatta- forma, resti al centro di osservazione il punto che si voleva ritrovare. Schematizzando quanto si e detto il periodo della marcazione Consta semplicemente di 'S tempi : a 14. 15. l*' si fa combaciare il marcatore col vetrino ; 2*^ si mette al centro di osservazione il forellino della striscia di carta interposta fra i due telai ; 3° allontauato il marcatore si segnano sulla carta , rasentando gli orli interni a contatto di essa, due linee ortogonali. II ritrovamento del punto interessante si compie anche in 3 tempi : 1^ interposta la strisciolina di carta , fra i due telai , si fanno combaciare le due linee segnate in essa con gli orli interni del con- veniente telaio ; 2^ posto il marcatore sulla piattaforma , e fatto combaciare con esso il vetrino, si mette il forellino al centro di osservazione ; 3^ tenendo fermo il vetrino si allontana il marcatore. Se si ha da marcare un punto che si osserva a forti ingrandi- menti , con lenti ad iramersione o no, basta sostituire un obbiettivo piü debole. 11 punto che a forte ingraudimeuto occupava il centro 44 Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un piinto. XXI, 1. del campo d'osservazioiie restera , anche quando non si renda piü visibile, ancora al centro di osservazione di im obbiettivo a minore ingTaiidimento. Similraente nel ritrovare il suddetto punto si fa uso prima di lenti piü lievi e poi, allontanato il marcatore , di lenti piü forti. Nel preparare la strisciolina di carta, dove si lia da praticare il forellino, giova dare ad essa ima largliezza siiperiore, cosi ad occhio, di ^j^ ad 1 cm, alla distanza che approsimativamente puö avere il piinto in osservazione dall'orlo anteriore del vetrino ; il forellino si fara vicinissimo ad uno degli orli piü lunghi della striscia di carta. In tale maniera, quando esso forellino sara al centro di osservazione, il lato posteriore del vetrino sporgerä un po' fuori sotto la carta di guisa che uel togliere il marcatore, possa il vetrino esser tennto fermo con le dita sulla piattaforma, con il sno pnnto inte- ressante ancora al centro d'osservazione , ove occorra per ulteriore esame. Sulla strisciolina di carta, nella pagina opposta a quella ove si trovano le due linee ed il cerchio con il forellino centrale, si puö anche abbozzare il punto da ritrovare, scrivere le indicazioni rela- tive al vetrino, annotare l'oculare e l'obbiettivo con cui era meglio evidente il particolare interessante ecc. ecc. — Essa strisciolina puo essere conservata o sotto il vetrino, o, cio che torna meglio e sempre fattibile, in apposita busta, dove tutte le striscioline conservate ab- biano una numerazione progressiva a cui ci si possa riferire. Negli istituti scientifici, ove annualmente si mostrano agli studenti, a scopo dimostrativo , dei preparati microscopici , una simile raccolta di stri- scioline potra grandemente agevolare il compito di chi dove in pre- cedenza preparare su diversi microscopi, i punti giä una volta trovati come piü adatti alla dimostrazione da farsi ; e tutto ciö mediante un solo esemplare del mio marcatore. II tavolino translatore invece cosi come da Zeiss e Kohistka viene costruito, a parte del suo elevato prezzo, ed anche quando non faccia corpo col microscopio, non puö giovare, nel caso suaccennato, che per il ritrovo di un sol punto. Se volessimo infatti servircene su altri microscopi, bisogne- rebbe per liberare il tavolino, togliere dalla propria posizione il punto giä messo a posto per esser osservato. E bisogua aggiuugere che anche quando il preparato potesse rimauere in sito, il tavolino translatore non e adattabile a tutti i vari modelli di cui puö disporre un istituto. II marcatore da me ideato e adattabile invece financo a modelli con piattaforma piccolissima, dalla larghezza di G cm da XXI, 1. Sanzo: Tre nuovi metodi per fissare e ritrovare un punto. 45 destra a sinistra, ed usaudo per di piü grandi porta-oggetti financo dal formato 100 X 40 mm. Queste dimensioni del vetrino sono raggiimgibili per il fatto che il marcatore e iisabile tanto nella posi- zione della figura 11, quanto in quella della figura 12. Essendo di 50 mm la lunghezza interna np del braccio B (vedi fig. 7) , cosi il marcatore sani adattabile per vetrini lunglii anche mm 50 X 2 = 100 mm. Esseudo poi la lunghezza interna m7i del braccio A^ mm 35, e potendo la strisciolina di carta uscir fuori, senza derivarne errore , anche per 5 mm , cosi la larghezza del vetrino sottostante puo arrivare fino a 40 mm. Con porta-oggetti di siffatto formato il mio marcatore puo essere adoperato, come dicevo, anche su piatta- forme piccolissime larghe anche 6 cm. Nella peggiore delle ipotesi infatti il porta-oggetti si trovera a fuoriuscire sia a destra che a siuistra di mm ^ = mm 20 ; e cio nel caso che il punto di osservazione si trovi suUa linea mediana del vetrino. Ora il mar- catore puo sporgere bene di 20 mm fuori dalla piattaforma senza cader giü , in modo che il braccio A di uno dei due telai possa Stare a combaciare con il lato destro sinistro del porta-oggetti. Ciö e reso possibile dal fatto che i due bracci i? e le due alette che insistono sulla piattaforma oflfrono una resistenza maggiore della forza con cui tenderebbe a cadere la parte del marcatore che si trova a sporger fuori. — Si capisce che se il vetrino sarä spostato maggiormente a destra, verrä a sporgere meno di 20 mm a sinistra e viceversa : in ogni caso insomma in cui il punto di osservazione non si trovi sulla linea mediana , il marcatore , da uua delle due parti , destra sinistra , non si trovera mai a sporgere per piü di 20 mm. Da tutto quanto si e detto risulta : 1*^ il marcatore da me ideato si adatta anche a modelli pic- colissimi pur usando di vetrini dal formato 100X40 mm, 2*^ esso fa parte a se dal microscopio e non lo complica quindi ; puo essere usato e tolto istantaneamente senza disturbare la posi- zioue del vetrino sulla piattaforma, ?P si applica al vetrino anche quando questo non si trovi disposto parallelamente al piano laterale del microscopista, 4° evita gli inconvenienti di quei metodi che si propongono dei segni sia sul copri che sul porta-oggetti, 5^ non da luogo a farsi alcuna lettura in millimetri e ])arti di millimetro. 4G Sanzo: Tre nuovi inetodi per fissare e ritrovare un punto. XXI, 1. 6^ da modo che inviando vetrino e striscioliua di carta si puo far ritrovare a persona loutana quel pimto sii ciii se ne vuol ricliia- mare rattenzione, 7*^ Costa rüolto poco ^ ed e basterole in nnico esemplare per servire su diversi microscopi. Tutti qiiesti vantaggi fanno sperare che il detto marcatore veuga preso in considerazione e compaia, data la temiita del prezzo, fra il corredo accessorio da microscopio di ogni microscopista. AUa fine di qnesto lavoro mi e caro rivolgere i raiei piü aiFettuosi ringra- ziamenti all' 111™*' Prof. Paul Mayer che mi fu cosi largo di consigli durante il niio soggiorno di alcuni mesi alla Stazione Zoologica di Napoli. ^) Dal Signor G. Serray alle, meccanico al Gabinetto di fisica speri- mentale dell'Universitä di Messina, il suddetto marcatore mi e stato costruito al prezzo di lire Otto. [Eingegangen am 27. April 1904.] XXI, 1. Referate. 47 Referate. 1. Mikroskop und mikroskopische Apparate. Uartniailll , J., (Potsdam): Objekti vuutersuchungeu (Zeit- schr. f. Iiistrumenteuk. 1904, H. 1, 2, 4). Diese wichtige Abhandlung beginnt mit einem Abschnitt: „Ältere Prüflingsmethoden" und zerfällt in zwei Ilauptteile : I. „Prüfung eines Fernrohrobjektives" mit den Unterabteilungen: „Die Fokussierung durch extrafokale Messungen", „Die Brennweitenbestimmung", „Die Erfüllung der Sinusbedingung", und II, „Prüfung kleinerer Objek- tive" mit der Untergliederung: „Extrafokale Messungen außerhalb der Achse", „Andere Methoden zur Prüfung kleinerer Objektive", „Eine neue Form der optischen Bank". Indem ich mir vorbe- halte, auf eine eingehende Würdigung später vielleicht noch zurück- zukommen , sehe ich mich für heute durch sie veranlaßt zu einer vorläufigen Besprechung vergleichender Art, welche in ihrer Art die Berechtigung hat, eine wesentlich astronomisch-photographische Studie in einer mikroskopischen Zeitschrift zu behandeln. Und zwar wollen wir uns im Anschluß an den Grundgedanken der oben genannten Arbeit fragen : Was sind Zonenfehler, wie entstehen sie, wie wirken sie, wie werden sie gemessen und wie beseitigt? Was sind Zonenfehler ? Von einem ins Wasser geworfenen Stein breiten sich kreisförmige , von einem explodierenden Meteor kugel- 48 Referate. XXI, 1. förmige Wellen aus. In gleicher Weise breitet sich von einem leuchtenden Punkt das Licht in Wellenflächen aus, welche in einem isotropen Medium bei Abwesenheit jeder Störung Kugelflächen sind und nach Durchgang durch brechende Medien optischer Instrumente zum Zweck der Erzeugung eines Bildpunktes Kugelflächen bleiben sollen. Zonenfehler sind nun die unvermeidlichen Verbiegungen der wirklichen Wellenfläche gegen die ideale Kugelfläche. Mithin gehört auch reine sphärische Aberration zu den Zonenfehlern ; man könnte sie den primären Zonenfehler und die Zonenfehler sekundäre sphä- rische Aberration nennen. Wenn auch die sphärische Aberration völlig gehoben ist, d. h. Achsen- und Randstrahlen streng vereinigt werden, dann können doch Zonenfehler vorkommen, ja der typische Zonenfehler hat gerade sein Maximum in der die Objektivfläche halbierenden Zone (Radius = 0*707 ; Öftnungshalbmesser = 1), wäh- rend die Abweichung in der Achse und am Rand verschwindet. Im Mittelalter wußte man nichts von Zonenfehlern; man bemühte sich bei Fernrohrobjektiven durch praktisch unausführbare theoretische Künsteleien (Ellipsen- beziehungsweise Hyperbelflächen) eine gar nicht vorhandene (wegen der aus Gründen der chromatischen Aberration langen Brennweiten verschwindend kleine) sphärische Aberration zu beseitigen. Die zu jener Zeit wohl oft bedeutenden Zonenfehler blieben ruhig stehen. Dies führt uns auf die nächste Frage : Wie entstehen Zonenfehler ? Auf ganz verschiedene Weise. Was man im Mittelalter allgemein für maßgebend hielt, daß mau nämlich mittels Kugelflächen den Strahlengang rechnerisch nicht in die rich- tige Form zwingen könne , das gilt in erster Linie für Mikroskop- objektive infolge ihrer riesigen Offnungswinkel (gleichwohl ist bei Ölimmersionen die Frontlinse für eine gewisse Wellenlänge frei von reiner sphärischer Aberration sowie von typischem Zonenfehler, auch von Koma und Astigmatismus, doch nicht von Bildwölbung; ohne diesen eigenartigen Ausnahmefall wären die wunderbaren Leistungen der modernen Mikroskope gar nicht möglich) ; es gilt auch noch für photographische Objektive, spielt jedoch bei Ferurohrobjektiven keine große Rolle mehr (wohl mehr auf dem Papier als in der Wirklich- keit). Wegen dieses Mangels der Kugelfläche (Sphäre) — der bei Ölimmersionen ein riesiger Vorzug gegenübersteht — nannte man den primären Fehler „sphärische Aberration". Seitdem begnügt man sich zu sagen , die Mikroskopobjektive seien frei von sphärischer Aberration, höchstens sie seien bis zur Randzone sehr gleichmäßig frei von sphärischer Aberration. Mit welchem Recht, stelle ich dem XXI, 1. Referate. 49 Urteil des Lesers anheim , indem ich nur noch hervorhebe , daß die reine sphärische Aberration ihren Namen ganz zu unrecht trägt, weil man mit zwei oder mehr Kugelflächen — ja in obigem Ausnahme- fall schon mit einer — stets Achsen- und Randstrahlen streng ver- einigen kann, d. h. weil sie mithin gar nicht notwendig mit der Kugelform verbunden ist — nicht mehr und nicht weniger als mit höheren Kurvenformen — , daß hingegen der typische Zonenfehler in viel schwerer zu vermeidender Weise mit der Kugelform ver- bunden ist, demnach auch besonders in Trockensystemen mehr oder minder eine Rolle spielt — eben der großen Öffaungswinkel wegen — und ihm heutigentages noch nicht in beugungstheoretisch zuver- lässiger Weise zu Leibe gegangen wird. Während man nun bei Fernrohrobjektiven auf der gleichen falschen Fährte war und bis in die neueste Zeit einen Schaden zu kurieren suchte, der gar nicht vorhanden war — denn die sphärische Aberration läßt sich ja mathematisch streng heben und der typische Zonenfehler erweist sich hier im allgemeinen beugungstheoretisch als verschwindend klein — , wiegte man sich in dem Wahn, als sei es eine untergeordnete Sache , die Berechnungen des Theoretikers praktisch auszuführen. Dem haben die Untersuchungen von Hart- mann — welche von Steinheil praktisch verwertet, von mir theore- tisch zugrunde gelegt wurden — mit einem Schlag ein Ende bereitet. Die ganze Unschuld der Kugelfläche kommt jetzt an den Tag, Wir dürften froh sein, könnten wir nur Kugelflächen mathematisch streng vollenden, auf die elliptischen und hyperbolischen wollten wir gerne verzichten. Schleifen kann man sie ja streng, allein das Polieren erweist sich als das tückische Element, welches bestrebt ist zu „hassen das Gebild der Menschenhand". Im Laufe der Jahrhunderte hat sich der Standpunkt ganz verschoben. Was einst optische Kunst war, die Anlage (Typus) und Durchführung eines Systemes, weil es ein Ding des Könnens war, ist jetzt optische Wissenschaft, weil es aus theoretischen Werken geschöpft werden kann ; was einst mehr oder minder handwerksmäßige Fertigkeit war , ist jetzt zur Kunst veredelt, nämlich die Beseitigung der beim Polieren entstehenden Zonenfehler, ja sie heischt selbst wissenschaftliche beugungstheoretische Unterstützung. Wie verkehrt war die bisherige Anschauung, wie völlig unhaltbar ist der in den meisten sogenannten Lehrbüchern ein- genommene Standpunkt ! Diese Polierfehler werfen die schönsten theoretischen Untersuchungen völlig über den Haufen und drängen sie, die ohnehin wegen der Kleinheit der untersuchten Fehler mehr Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 4 50 Referate. XXI, 1. einen papierenen Wert haben , gänzlich zurück. Auch bei photo- graphischen Objektiven spielen sie noch eine Rolle ; bei Mikroskop- objektiven treten sie hingegen zurück. Aus technischen Gründen (verschiedene Härte einzelner Stellen , Durchbiegung , Übergreifen der Polierschale , Kurvenform der Politurstriche u. a.) sind im all- gemeinen große Flächen schwerer mathematisch richtig herzustellen als kleine. Nach kompetenten Aussprüchen spielt auch der Um- stand eine Rolle, daß infolge des Abkühlungsprozesses der Brechungs- exponent von der Mitte bis zum Rande verschieden ausfällt. Ich lasse es dahingestellt, ob diese Wirkung von der gleichen Größen- ordnung ist wie die eben erörterte. Bevor wir nun von der Beseitigung der Zonenfehler sprechen, wollen wir die Frage er- örtern : Wie wirken Zonenfehler? Ganz verschieden, je nach Instrument, Methode nnd Objekt. Bei Fernrohrobjektiven und Doppelsternen können sie selbst günstig wirken. Ein Zeichen, wie völlig verkehrt es ist, Fernrohrobjektive mittels Doppelsternen prüfen zu wollen. Freilich, in Büchern steht es ja. Doppelsterne können nur ein negatives Kriterium bilden. Wird die durchschnittliche Forderung nicht erfüllt , ist das Objektiv zu beanstanden. Dies ist aber auch alles ! Bei Planetendetail wirken Zonenfehler immer schädlich ; diese und die chromatische Aberration — jedoch nicht die der Brenn- weiten, welche sich durch farbige Ränder zu erkennen gibt nnd ein- fach durch passende Okulare gehoben werden kann , vielmehr die des Brennpunktes , welche unter der Maske der Farblosigkeit wirkt — sind die Hauptfeinde der Bildschärfe. Wird es jetzt nicht auf einmal klar , warum so manches kleine Instrument Großes geleistet und so manches große versagt hat (z. B. machte Herschel seine mei- sten Beobachtungen nicht mit dem Rieseuteleskop, sondern mit mittel- großen ; doch spielen hier auch andere Dinge mit, Durchbiegung des Spiegels, Luftströmungen, Unbequemlichkeit etc.)? Ähnlich wird die Wirkung bei photographischen Objektiven sein; jedoch dürfte die- selbe bei dem geringen Anspruch an Bildschärfe — denn das Bild ist bestimmt mit dem bloßen Auge betrachtet zu werden statt mit einem Okular, d. h. Lupe — manchmal vielleicht überschätzt werden. Ganz eigentümlich tritt die Wirkung auf bei den Mikroskop- objektiven, und zwar nach der Methode verschieden. Wenn wir ein Präparat bei schiefer Beleuchtung betrachten, wobei wir annehmen wollen , daß der ungebeugte Lichtkegel gerade durch die fehler- hafte Zone gehe, dann tritt Astigmatismus ein. Der Lichtkegel XXI, 1. Referate. 51 wird deformiert so wie eine Papiertüte , welche man ferner vom EnAe in wagrecliter, näher am Ende in senkrechter Richtung quetscht , i-Punkte in mikrophotographischem Druck erscheinen in die Breite oder in die Länge verzerrt, je nach der EinsteUnng. Diese Wirkung, welche allein schon die schiefe Beleuchtung minder- wertig macht, betrifft schon das für das betreffende Objektiv ohne weiteres auflösbare, d. h. grobe Detail. Wenn wir ein Prä- parat mit feinem Detail bei gerader Beleuchtung betrachten und annehmen , daß z. B. die abgebeugten Lichtkegel die fehlerhafte Zone und die Randzone beanspruchen , dann tritt eine Verwirrung des feinen Details auf. Der Zonenfehler — an sich für verschiedene Wellenlängen von verschiedenem Betrag — kombiniert sich gern mit der chromatischen Aberration und bildet in erweitertem Sinne das, was Abbe „chromatische Differenz der sphärischen Aberration" nennt. Über einen der merkwürdigsten Fälle, wobei eine Diatomeen- felderung, ähnlich, jedoch gröber als Pleurosigma angulatum, in den meisten Objektiven rötliche Scheiben in grünlichem Feld (beziehungs- weise bei Apochromaten und sehr starker Vergrößerung hellgelbe in hellblauem) statt weiße in schwarzem (dunklemj zeigte , habe ich in dieser Zeitschrift unter dem Titel: „Studien an Mikroskopobjektiven" (1900, XVII) früher berichtet. Für mich ist dies Präparat (wenige Bruchstücke einer unbekannten Art in einem Pleurosigma-Testobjekt), welches 1 Mk. kostete, von unschätzbarem Wert-, denn es zeigt mir auf einen Blick das Vorhandensein von Zonenfehlern, beziehungsweise den ganzen Korrektionsstand der meisten starken Systeme. Dies führt mich zu der nächsten Frage : Wie werden Zonenfehler gemessen? Bei Mikroskopobjektiveu ist dies eine Sache rechnerischer Natur und es liegen erst spärliche Arbeiten vor , meist über ganz schwache Systeme , eine einzige von mir: „Zonenfehler und Wellentlächen" (Zeitschr. für Instrumentenk. 1900, XX, H. 9) über ein mittelstarkes von 4 mm Brennweite und 0*60 num. Ap. Gänzlich fehlt es m. E. noch an einem zielbewußten Vorgehen nach beugungstheoretischen Grundsätzen durch Änderung des Typus oder Verkürzung der Brennweiten, allerdings aus wohl begreiflichen Gründen; denn ersteres ist eine schwierige und frag- liche Sache, letzterem steht die Bequemlichkeit und Gewöhnung der Beobachter nicht förderlich gegenüber. Gleichzeitig sollte man der chromatischen Aberration des Brennpunktes noch mehr zu Leibe rücken, ebenfalls durch Verkürzung der Brennweiten. Denn selbst Trocken- apochromate zeigen bei sehr starker Vergrößerung noch Farben. 4* 52 Referate. XXI, 1. Mich wenigstens stört es ungemein , daß ich bei Beobachtung von Infusorien nicht augenblicklich entscheiden kann , ob die kleinen grünen Zellgranula wirklich grün — etwa Chlorophyllstoflfe — oder nur scheinbar grün — durch chromatische Aberration — sind etc. Ich würde der Konstruktion eines Trockenapochromaten von 2 mm Brennweite und 0"95 num. Ap. das Wort reden. Freilich , die Be- rufsmikroskopiker pflegen zu sagen, sie störe dies nicht, weil sie färben und durch Färben entscheiden. Der Optiker ist hier an- spruchsvoller als der Praktiker. Ganz anders liegt die Sache bei Fernrohrobjektiven und photo- graphischen Systemen ; hier sucht Hartmann mit seiner berühmten Methode der extrafokalen Bilder Wandel zu schafien. Wenn die Wellenfliiche keine Kugelfläche ist, dann gehen ihre Normalen — die „Strahlen" der geometrischen Optik — nicht durch einen Punkt. Wenn man das Objektiv mit einer Löcherblende versieht, deren kreis- förmige Öffnungen auf konzentrischen Kreisen („Zonen") von kleinerem und größerem Radius liegen, und auf einen näheren oder ferneren Lichtpunkt auf der optischen Hauptachse einstellt , dann Averden photographisch aufgenommene oder mit dem Auge beobachtete Quer- schnitte durch das Bündel der aus den Löchern kommenden und zum Bildpunkt gehenden Lichtkegel zur Lochblende nicht mehr ähn- lich sein, vielmehr verzerrt, sowie wir Zonenfehler voraussetzen. Nimmt man je eine Aufnahme vor und eine nach dem Brennpunkt in bestimmtem Abstand , kann man den Schnittpunkt der den ein- zelnen Stelleu der ( )flnung entsprechenden Strahlen mit der optischen Hauptachse — imter Umständen kreuzen sie sich selbst — , mithin die Längenabweichungen sowie überhaupt die ganze Konstitution des Strahlenbündels — für mich die experimentelle Grundlage zu weiterer beugungstheoretischer Behandlung — durch Messung exakt feststellen. Auf diese Weise untersucht Hartmann nicht nur die eigentlichen „Zonenfehler", sondern auch in weiterem Sinn die chromatische Aberration, Astigmatismus, Koma, Bildwölbung, Verzeichnung. Zur Untersuchung bedarf er sogenannter Farbenfilter. Solche bekommt er z. B. durch Verwendung der Quecksilberlampe und (in fx/x aus- gedrückt) für X = .365 (Methylviolett -|- Nitrosodimethylanilin), 405 (Methylviolett -[- Chiniusulfat), 436 (Kobaltglas -(-Äskulinlösuug), 492 (Guineagrün -|- Chininsulfat), 546 (Echtgrün -f- Chrysoidin), 579(P]osin -j- Chrysoidin). Ein weiteres — mehr mathematisches — Eingehen auf seine Arbeit würde jetzt zu weit führen. Wir schließen endlich mit der Frage : XXI, 1. Referate. 53 Wie werden Zonenfehler beseitigt? Bei Mikroskopsystemen gründ- lich durch Änderung des Typus , beziehungsweise Verkürzung der Brennweite ; annähernd durch kombinierte Änderung der Deckglas- dicke, Korrektionsschraube, Tubuslänge und Einstellung. Bei photo- graphischen Systemen durch Änderung des Typus und sorgfältige Herstellung (schon vermieden , nicht erst beseitigt). Bei Fernrohr- objektiven durch zonenweises Nachpolieren, verbunden mit Nachmessen, ein mühsames Verfahren , welches ebenso theoretisches Wissen wie praktische Erfahrung fordert, Zeit und Geld kostet, eine Kunst im wahren Sinn des Wortes ist, im Interesse der Forschung unum- gänglich. Karl Strehl {Erlangen). 2. Mikrophotographie und Projektion. König , E., Die Farbenphotographie (Photogr. Bibliothek Bd. XIX, 88 pp. m. 2 Figg. u. 1 Tfl. 2-50 M. Berlin 1904, Verlag von Gustav Schmidt). Verf. erledigt sich in recht befriedigender Weise der Aufgabe, eine kurze den Bedürfnissen der Praxis angepaßte Anleitung zur Herstellung farbiger Photographien zu geben , die vor allen dem Berufs- und Amateurphotographen in den Stand setzen soll, auf die sicherste Weise brauchbare Resultate zu erzielen, wobei aber auch die Theorie, soweit sie für das Verständnis unbedingt notwendig ist, in allgemein verständlicher Weise Berücksichtigung findet. Nach kurzer Charakterisierung der zwar einfacheren , für die Praxis bis jetzt aber noch ungeeigneten direkten Methoden werden die indirekten, die auf Zerlegung des Bildes in 3 Grundfarben und in der Synthese des farbigen Bildes aus diesen beruhen, besprochen. Im 1. Ab- schnitt, der sich mit dem Dreifarbendruck oder der subtraktiven Methode der Dreifarbenphotographie beschäftigt, wird der Reihe nach der Aufnahmeapparat, die Lichtfilter, ferner das Plattenmaterial und die Sensibilatoren , Exposition und Entwicklung und scldießlich die Anfertigung der Kopien nach den verschiedenen Verfahren behandelt, wobei anhangsweise das einfachere Zweifarbenverfahren von Gurtnee, das natürlich nur beschränkte Brauchbarkeit haben kann , ebenfalls Erwähnung findet. Im 2. Abschnitt wird die additive Methode 54 Referate. XXI, 1. der Dreifarbenphotographie durch optische Synthese ausführlich dar- gelegt und Anleitung zur Herstellung der Teilbilder und des Be- trachtungsapparates (Chromoskop) gegeben. Da die Herstellung der Chromoskopbilder verhältnismäßig wenig Zeit erfordert und ent- sprechend einfach ist , dabei aber die Wiedergabe der Farben viel besser als beim Dreifarbendruck ist, empfiehlt Verf. die Chromoskop- photographie für alle diejenigen, die die Dreifarbenphotographie aus Liebhaberei betreiben wollen , ohne viel Zeit opfern zu können. E. Schoebel (Neapel). Hanneke, P., Die Herstellung von Diapositiven (Photogr. Bibliothek Bd. XX, 128 pp. m. 23 Figg. 2-50 M. Berlin 1904, Verlag von Gustav Schmidt). Das Buch gibt neben einer genügend ausführlichen Behandlung des gegenwärtig am häufigsten verwendeten Diapositivverfahrens mit Chlorbromsilberplatten auch Anleitung zur Herstellung von Brom- silber- und der oft recht empfehlenswerten Kollodium- und Pigment- diapositive und gedenkt der Anfertigung jener mehr für Staffelei- und Fensterschmuck geeigneten, auf auskopierbaren Chlorsilberbild- schichten herzustellenden Bilder. Hervorzuheben ist noch, daß auch die Stereoskopdiapositive die wohlverdiente Berücksichtigung finden. Die kurzen Angaben über Herstellung von farbigen Bildern durch das Dreifarbenverfahren oder durch Kolorieren können natürlich nur zur Anregung dienen , sich dem Studium ausfülirlicherer Werke zu widmen. Die Darstellung ist durchweg gemeinverständlich gehalten, so daß sich auch der Anfänger in allem zurechtfinden dürfte. 'ö E. Schoebel [Neapel). XXI, 1. Referate. 55 3. Präparationsmethoden im allgemeinen. Spalteliolz, W., Mikroskopie u n d M i k r o c h e m i e. Betrach- tungen über die Grundlagen der mikroskopi- schen U n t e r s u c h u n g s ra e t h o d e n. Leipzig (S. Hirzel) 1904. 38 pp. 1-50 M. Die Broschüre gibt den Inhalt eines Vortrags in erweiterter Form wieder und berichtet über die wichtigsten Methoden des Mikro- skopikers, über Untersuchung lebender und „überlebender" Gewebe, über Fixieren , Einbetten , Färben und mikrochemische Methoden. Dabei kommen stets nur diejenigen Punkte , welche allgemeines Interesse haben und zum wissenschaftlichen Verständnis der mikro- technischen Methoden und ihrer Ergebnisse erforderlich sind , zur Sprache. — Die Broschüre ist in sehr ansprechendem Ton gehalten und ihre Lektüre zum Verständnis der „Grundlagen der mikro- skopischen Untersuchungsmethoden" zu empfehlen. Küster {Halle a. S.). Gutilianu, C. , Ueber Schnellhärtung und Schnellein- bettung (Deutsche med. Wochenschr. Jahrg. XXIX, 1903, No. 41, p. 740 — 741). Verf. macht auf eine Methode der Schnellhärtung und Schnell- einbettung aufmerksam, welche, obwohl schon 1895 von Lubaksch und später von Schmorl empfohlen , doch noch nicht genügend be- kannt geworden zu sein scheint, und welche er noch etwas ver- bessert hat. Die Methode ist die folgende. Die Präparate dürfen nicht zu groß, müssen aber besonders dünn sein (1 bis 3 mm). Sie kommen auf 30 bis 45 Minuten in absoluten Alkohol (auf Watte legen, den Alkohol zweimal wechseln), dann in ein gut verschließ- bares Schälchen mit Anilinöl (30 bis 60 Minuten bei 50 bis 55^0. im Paraffinofen) , dann auf 30 bis 60 Minuten in Xylol (zwei- bis dreimal wechseln, bis keine Gelbfärbung mehr eintritt). Dann über- tragen in geschiuolzenes Paraffin, das einmal gewechselt wird. Nach 30 bis 90 Minuten können die Präparate eingeschmolzen werden. Natürlich richtet sich die Länge der Zeit für das Verbleiben in den einzelnen Flüssigkeiten nach der Größe der Stücke. Verf. verwendet nun statt des Anilinöles gleich Xylol im Paraffinofen, um die Präpa- rate nicht den großen Temperaturschw^ankungen beim t'bertragen von 56 Referate. XXI, 1. Anilinöl in Xylol und dann wieder aus dem Xylol in das geschmolzene Paraffin auszusetzen. Bei den mit dieser Methode hergestellten Prä- paraten gelingen alle Färbungen. Die Methode ist natürlich zum Studium von Zellstrukturen nicht geeignet. Ein weiterer Übelstand ist der, daß Objekte, die sehr viel Blut enthalten, z.B. Thromben, sich sehr schlecht schneiden, und daß das Blut im allgemeinen sich schlecht färbt. Dem ersteren Übelstande kann nicht abgeholfen werden , der schlechten Färbung der roten Blutkörperchen dagegen dadurch , daß man die Objekte zunächst auf eine bis 2 Stunden in lOprozentige Formollösung einlegt (längeres Verweilen in Formol schadet nicht , ist im Gegenteile nur vorteilhaft) , von dieser sofort, ohne abzuspülen, in absoluten Alkohol überträgt und dann, wie oben angegeben, weiter behandelt. In so vorbehandelten Präparaten färben sich die roten Blutkörperchen mit Eosin leuchtend rot, auch schien es dem Verf. , daß die Zellstrukturen schärfer zutage träten. Der durch das Einlegen in Formol bedingte Zeitverlust ist unwichtig. Schieferdecker (Bomi). Stein , A. , Über S c h n e 1 1 h ä r t u n g und S c h u e 1 1 e i n b e t - tung (Deutsche med. Wochenschr. Jahrg. XXIX, 1903, No. 44, p. 806). Die oben referierte Mitteilung von Gutmann veranlaßt Verf., der die von Gutmann erwähnte Methode seit 1^/., Jahren benutzt, ebenfalls zu einer Mitteilung über diese. Verf. bringt nicht wie Gutmann die Präparate zuerst in absoluten Alkohol, da sie in diesem zu leicht schrumpfen. Er nimmt ferner die ganze Proze- dur der Schnellhärtung und Schnelleinbettung in der Wärme, d. h. im Brutschränke vor. Kurz zusammengefaßt würde sich also die „LuBARSCHSche Sclinellhärtungs- und Schnelleinbettungsmethode" folgendermaßen gestalten: 1) Einlegen in lOprozentige Formollösung (5 Minuten). 2) fbertragen in Oöprozentigen Alkohol (5 Minuten). 3) Übertragen in absoluten Alkohol (10 Minuten, einmal wechseln). 4) tl)ertragen in Anilinöl bis zur vollkommenen Durchsichtigkeit (Anilinum purissimum, wasserhell, 15 bis 20 Minuten). Von 1 bis 4 im Brutsehranke bei 50 bis 52*^. 5) Xylol (zwei- bis dreimal wech- seln, etwa 15 Minuten). 6) Paraffin (10 bis 30 Minuten, je nach der Größe der Stücke); die beiden letzten Nummern 5 und 6 im Brutschranke bei 58 bis 60". Das ganze Verfahren nimmt also nicht mehr wie eine viertel bis eine halbe Stunde in Anspruch. Schiefferdecker {Bon7i). XXI, 1. Referate. 57 Behr, M. , Über S c Im e 1 1 h ä r t u u g und S c h n e 1 1 e i n b e 1 1 u n g (Müuchener med, Wocbensclir. Jabrg. L, 1903, No. 51, p. 2256—2257). Im Anschlüsse an die mehrfnclien Mitteilungen über Scbnell- liärtung und Schnelleinbettung macht Verf. auf ein von L. Pick^ vor wenigen Jahren angegebenes Verfahren aufmerksam , bei dem man schon nach etwa '^j^ Stunden ein fertig gefärbtes Präparat erhalten kann. Die Schnitte werden mit einem Gefriermikrotom angefertigt, werden ungefähr 10 Minuten in eine lOprozentige Formollösung ge- bracht und dann für etwa eine Viertelstunde in TOprozentigen Alkohol. Jetzt können sie gefärbt werden, so mit Hämalaun-Eosin. Schiefferdecker {Bo?tn). Herxheinier , G. , Zur Fettfärbung. Bemerkung zu der gleichnamigen Erwiderung des Herrn Dr. Fi- scher in No. 15 dieses Zentralblattes (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIV, 1903, No. 20, p. 841—842). Verf. hält die alkalisch -alkoholische Lösung von Fettponceau (beziehungsweise Sudan III) nicht nur für die schneller wirkende, sondern aucli für die sicherere Färbung. Die Nachteile, welche Fischer dieser Lösung zuschreibt, kann Verf. nicht anerkennen. Wegen ihrer starken Konzentration überfärbt die Lösung allerdings und man muß daher, da sich oft das übrige Gewebe mitfärbt, in TOprozentigem Alkohol differenzieren. Doch bleibt hierbei das Fett durchaus spezi- fisch gefärbt. Niederschläge lassen sich vermeiden. Trugbilder hat Verf. durch sie nie bekommen. Das Alkali der Lösung schädigt, wie Fischer zugibt, weit weniger als er erwartete. Nach Formol- härtung hat Verf. in Schnittpräparaten irgendwelche störende Ver- änderung des Gewebes durch das Alkali nie gesehen. Man kann besonders konzentrierte Lösungen herstellen, indem man heiß in der alkalisch-alkoholischen Flüssigkeit sättigt; es wäre dieses gewisser- maßen eine Kombination der Lösung von Fischer und der des Verf. Natürlich muß man dann auch differenzieren. — Zum Schlüsse be- merkt Verf. , daß er neuerdings noch eine neue Lösung gefunden habe, welche die bisher angegebenen übertrifft: eine gesättigte Lösung des Fettponceau in Azeton und TOprozentigem Alkohol zu gleichen Teilen. Ein Differenzieren in TOprozentigem Alkohol ist auch hier- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 73. 58 Referate. XXI, 1, bei erwünscht. In reinem Zustande ist Azeton nicht anwendbar, da es dann das Fett löst. Schieff'erdecker {Bonn). Klingraüller , V., u. Yeiel, F., Sublamin als Fixierungs- mittel (Zentralbl, f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIV, 1903, No. 20, p. 842—844). Die Fixierung in Sublimatlösungen weist eine Reihe von Übel- ständen auf: es dauert lange, bis die Präparate schnittfertig sind: es bilden sich Niederschläge , die selbst durch sehr langes Aus- wässern sich oft nicht vermeiden lassen und auch durch Nachbehand- lung mit Jodlösungen manchmal nicht zu beseitigen sind. Verf. hat Versuche mit Sublamin, dem neuerdings als Desinfektionsmittel emp- fohlenen Quecksilbersulfat-Äthylendiamin angestellt. Als das beste ergab es sich , die Gewebsstücke in etwa öprozentigen Sublamin- lösungen, welche mit destilliertem Wasser hergestellt werden müssen, etwa eine halbe bis ^eine Stunde liegen zu lassen. Man kann dann sofort Gefrierschnitte herstellen , oder weiter in steigendem Alkohol härten. Als Vorteile geg'enüber den Sublimatlösungen stellten sich heraus: 1) Niederschläge lassen sich fast ganz vermeiden; 2) die Färbbarkeit des Gewebes wird ganz außerordentlich erhöht ; 3) die natürliche Farbe und Beschaffenheit der Organe wird kaum ver- ändert. — Was die Anfertigung von Gefrierschnitten anlangt , so wird hervorgehoben , daß die Gewebe relativ weich bleiben. Als Gefrierapparat ist ein Kohlensäureapparat vorzuziehen. Muß eine Diagnose schnell gestellt werden, so genügt es, die Stücke nur etwa 30 Minuten in der öprozentigen Lösung zu lassen. Die Zeit läßt sich noch mehr abkürzen, wenn man kleinere Stücke und stärkere Lösungen nimmt, z. B. Stücke von ^/^ cm im Quadrat 15 Minuten in einer 1 Öprozentigen Sublaminlösuug läßt. Zum Färben für Ge- frierschnitte waren brauchbar: Häraatoxylin, Hämalaun, Hämalaun- Eosin, Färbung nach van Gieson, nach Hansen, Alaunkarmin, elastische Faserfärbung nach Pranter, Weigert und Unna -Tänzer, Plasma- zellenfärbung mit polychromem Methylenblau nach Unna , Färbung nach Gram, Gram-Weigert, Ziehl-Neelsen. Nach Sublaminhärtung erhält man nicht nur ausgezeichnete Gewebs- und Kernfärbungen, sondern vor allem auch Bakterienfärbungen. In beiden Punkten stehen dem Sublamin alle anderen Fixierungsmittel nach, selbst Formol oder Formol-MüLLER. Für die Färbung auf Tuberkelbazillen genügt es, die Gefrierschnitte etwa eine halbe bis eine Stunde bei gewöhn- licher Temperatur in der Karbol-Fuchsinlösung zu lassen. Für Lepra- XXI, 1. Referate. 59 bazillen kann dieses Verfahren noch mehr abgekürzt werden. Färbung- im Brutofen bewirkt keine Beschleunigung. — Die in Sublamin fixierten Stücke werden in steigendem Alkohol gehärtet. Sublamin löst sich aber sehr schwer in Alkohol und es tritt daher beim l'ber- tragen der Präparate in TOprozentigen Alkohol eine Trübung ein. Man muß daher den Alkohol kurz nacheinander , etwa nach einer Stunde, ein- bis zweimal wechseln. Der benutzte Alkohol läßt sich durch wiederholtes Filtrieren mit Filtrierpapier wieder gebrauchs- fähig machen. Einbettung in Paraffin oder Celloidin. Nimmt man die Härtung in Alkohol einigermaßen schonend vor, so werden die Gewebe nicht so hart wie nach Formol. Die Stücke konnten daher auch mit dem Minot sehen Mikrotom geschnitten werden. Die Färbe- zeit muß wieder abgekürzt werden , für Kernfärbung etwa auf die Hälfte. Außer den oben genannten Färbungen waren brauchbar : die Pappenheim sehe Plasmazellenfärbnng, die Färbung nach Biondi- Heidenhain, die WEiGERTSche Fibrinfärbung. Auch bei diesen Schnitten treten die oben genannten Vorzüge deutlich hervor: Zur Tuberkel- bazillenfärbung brauchen die Schnitte nur eine halbe bis eine Stunde in der Farblösung zu bleiben. Für Leprabazillen noch kürzere Zeit. — Die Methode eignet sich nicht nur für klinische Zwecke, sondern auch für feinere histologische Untersuchungen. Schiefferdecker {Bonn). Krause, ß. , Gibt es eine „vitale" Färbung (Anat. Anz. Bd. XXIV, 1904, No. 15, p. 400—403). Seitdem durch die Entdeckung von Ehrlich das Methylenblau in die Technik der sogenannten vitalen Färbung eingeführt worden ist , hat man vielfach darüber gestritten , ob es überhaupt eine „vi- tale" Färbung, d. h. eine Färbung lebender Zellsubstanz gibt. Es hat sich gezeigt, daß bei den höheren Tieren sich nach Einführung von Farbstoften der Kern der lebenden Zelle fast niemals färbt, dagegen treten konstant im Zellleibe gefärbte Granulationen auf. Da man diese Färbungsresultate nicht einwandfrei als eine Vitalfärbung im strengen Sinne des Wortes bezeichnen kann , so hat man auch vorgeschlagen , an Stelle von Vital färbung von einer Färbung intra vitam zu sprechen. Einwandfrei wäre eine Färbung nur dann, wenn man nachweisen kann, daß die Zellen ihre gewohnte Funktion ohne Einbuße weiter fortsetzen , während gleichzeitig die dieser Funktion dienenden Zellorgane sich gefärbt erweisen. Ein sehr günstiges Objekt hierfür wäre eine Flimmerzelle. Eins der schönsten Objekte 60 Referate. XXI, 1. für das Studium der Flimmerbewegung bilden die das Vestibulum des Petromyzontenlabyrinthes auskleidenden , von Ecker entdeckten Geißelzellen. Die Haare sind hier an der Basis dünner und deutlich voneinander getrennt. Jedes Haar sitzt auf einem Basalkörperchen auf. Diese sind deutlich voneinander getrennt und liegen im Niveau der Zelloberfläche. Die Bewegung der Geißeln ist eine ziemlich langsame. Verf. injiziert nun dem lebenden Tiere wenige Kubik- zentimeter einer 2prozeutigen Lösung von kristallisiertem , chemisch reinem Methylenblau (Höchst) in physiologischer Kochsalzlösung vom Herzen oder der hinteren Kardinalvene aus. Nach Beendigung der Injektion wird die Gehörkapsel freigelegt und mittels eines guten Rasiermessers in dünne Horizontal- oder Frontalschnitte zerlegt. Die Schnitte werden in physiologischer Kochsalzlösung untersucht. Das Präparat erscheint zunächst ganz ungefärbt, aber schon nach wenigen Minuten stellt sich die Färbung ein , und zwar färbt sich zunächst ein konischer Körper im Innern der Zelle, der von der freien Ober- fläche her mit seiner Spitze bis ungefähr zur Zellenmitte reicht, dann folgt die Färbung der Basalkörperchen : jedes einzelne Körper- chen erscheint zunächst scharf und isoliert blau gefärbt. Dieses Stadium verschwindet jedoch sehr rasch, und es erscheint auf jeder Zelle eine in der Aufsicht ovale , blaugefärbte Platte , indem sich offenbar der zwischen den Basalkörperchen gelegene Teil der Cuticula mitfärbt. Die peripheren Teile der letzteren färben sich nicht , so daß jede Platte mit dem ins Zellinnere vorspringenden Konus von dem nächstliegenden durch ungefärbte Zellsubstanz getrennt wird. Endlich folgt dann die Färbung der Geißeln selbst, von der Zell- oberfläche nach der Spitze zu allmählich fortschreitend. Während dieser ganzen Zeit schlagen die Geißeln absolut unverändert weiter, bei den nötigen Vorsichtsmaßregeln stundenlang. Der Zellkörper bleibt zunächst gänzlich ungefärbt, nimmt jedoch nach und nach auch eine leichte Blaufärbung an, die jedoch niemals der intensiven Bläuung der Wimperwurzeln und Basalkörperchen gleichkommt. Die Färbung der Fasern und Zellen des Hörnerven tritt wesentlich später ein als die Geißelfärbung, ungefähr eine halbe bis eine Stunde nach der Injektion. Verf. hat versucht, die gebläuten und in Bewegung be- findlichen Geißelzellen zu isolieren, aber vergebens. Wenn man in den Basalkörperchen der Flimmer- und Geißelzellen wirklich den Motor für die Flimmerbewegung sehen muß, so hat man nach Verf. in diesem Falle eine absolut echte „vitale" Methylenblaufärbung vor sich. Schiefferdecker {Bonn). XXI, 1. Referate. 61 Heidenliaiu , M. , Über die N i 1 b hi u b a s e als Reagens auf die Kohlensäure der Luft und über die Ein- wirkung- V n F a r b s ä u r e n a u f C e 1 1 u 1 o s e , Alkohol und Azeton mit Beiträgen zur Theorie der histologischen Färbung (Arch. f. d. ges. Physiol. Bd. C, 1903, H. 5, 6, p. 217—241). Verf. wendet sich gegen den Aufsatz „Beitrag zur Theorie des Färbeprozeßes" von L. Michaelis/ in welchem dieser die Deutung der von Heidenhain beobachteten Erscheinungen in Zweifel gezogen hat. Verf. bespricht in der vorliegenden Arbeit verschiedene Theo- rien über die Färbung , so die von Witt und Michaelis vertretene Theorie der festen Lösung, ferner die Theorie der Absorption, end- lich die chemische Theorie. Wegen alles Näheren muß auf das Original verwiesen werden. Schiefferdecker {Bonn). Haemers, A., Modification de la methode de colora- tiou par l'hematoxyline a l'alun de fer (Heiden- hain) (Bibliographie Anat. t. IX, fasc. 1, 1901, p. 1 — 3). Um die verschiedenen Schwierigkeiten der gewöhnlichen Färbe- methode für das HEioENHAiN'sche Hämatoxylin zu vermeiden, hat Verf. die folgende Methode angegeben. Er beizt im Stück in der öprozentigen Eisenalaunlösuug (2 bis 8 Tage). Nach schnellem Ab- waschen in destilliertem Wasser kommt das Stück in die gealterte einprozentige Hämatoxylinlösung (4 bis 8 Tage). Während dieser Zeit bildet der Farbstoff bisweilen einen reichlichen Niederschlag auf dem Stück und auf dem Boden des Gefäßes. Es ist gut, den Farbstoff nach vorherigem Abwaschen mit destilliertem Wasser 2- oder 3mal zu erneuern. Die Stücke werden bei der Imprägnation voll- kommen schwarz. Nachdem man die Farblösiing abgegossen hat, wäscht man mit destillirtem Wasser und härtet in steigendem Alkohol. Während dieser Zeit kommen aus dem Stück schwarzbraune Farb- wolken. Bilden sich diese nicht mehr, so bettet man in Paraffin oder Celloidin ein. Zur Doppelfärbung kann man Lichtgrün oder Fuchsin verwenden. Die Methode gelingt auch nach Fixierung in Flemming' scher oder HERMANN'scher Lösung und MtJLLER'scher Flüssig- keit. Schiefferdecker {Bonn). 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 297. 62 Referate. XXI, 1. 4. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A, Niedere Tiere, Zugmayer, E. , Über Sinnesorgaue au den Tentakeln des Genus Cardium (Zeitscbr. f. wiss. Zool. Bd. LXXVI, 1904, p. 478—508 ra. 2 Figg. u. 1 TU.)- Zur Fixierung des üntersuchsmaterials war Pikrinsalpetersäure oder Sublimat-Essigsäure verwendet worden. Gescbnitten wurde in Paraffin. Mit der Eisenhämatoxylinfärbuug nach Heidenhain konnte Verf. keine guten Resultate erzielen ; recht brauchbar erwies sich dagegen die F'ärbung mit Boraxkarmin-Hämatoxylin-chromsaurem Kali nach Schuberg. Die Tentakel wurden dabei in toto auf 12 bis 24 Stunden in Boraxkarmin gelegt und darauf mit ^/^ Prozent Salzsäure enthaltendem TOprozentigem Alkohol ausgezogen. Auf dem Objektträger wurden die Schnitte dann für 10 bis 15 Minuten, je nach der Dicke , in ein Gemisch von 3 Teilen Wasser und 1 Teil einprozeutiger Hämatoxylinlösuug gebracht, darauf gut ausgewaschen und für 5 bis 8 Minuten in eine einprozentige wässerige Lösung von chromsaurem Kali gelegt und dann wieder gut in fließendem Wasser gewaschen. Zur Difl'erenzierung von Bindegewebe und Musku- latur ist die BLOCHMANNSche Modifikation der van Gieson sehen Binde- gewebsfärbung zu empfehlen. Die mit Boraxkarmin vorgefärbteu Schnitte erhielten in der ungefähr O'Olprozentigen Lösung von triphenyl- rosanilin-trisulfosaurem Natrium in gesättigter wässeriger Pikriusäure- lösung, aus der sie rasch in absoluten Alkohol übergeführt werden müssen, schon in 2 bis 2^/., Minuten die gewünschte Färbung: Binde- gewebe tiefblau, Epidermis gelbbraun, Muskulatur orangegelb, alles übrige mattblau. Mit recht gutem Erfolg kam ferner die Borax- karmin-Osmium-Holzessig-Färbung nach ScHUBERCi zur Verwendung. Die zunächst in toto mit Boraxkarmin tingierten und differenzierten Tentakel Avurden für 6 Stunden in eine ^/^^prozentige Osmiumsäure- lösuug gebracht, dann nach kurzem Abspülen in Wasser bis zur vollständigen Schwärzung mit unverdünntem Holzessig behandelt (einige Stunden) und dann in gewöhnlicher Weise eingebettet und weiter behandelt. Man kann auch ohne Holzessigbehandlung brauch- XXI, 1. Keferate. 63 bare Präparate erhalten , muß dann aber 24 bis 36 Stunden mit einprozentig'er Osniiumsäure behandeln. E. Schoebel {Neapel). ßössig , H. , Von welchen Organen der Gallwespen- larven geht d e r R e i z zur Bildung der Pflanzen- g a 1 1 e aus? Untersuchung der D r ü s e n o r g a n e der Gallwespenlarven, zugleich ein Beitrag zur p s t e m b r y n a 1 e n Entwicklung- derselben (Zool. Jahrb., Abteil, f. Syst., Bd. XX, 1904, p. 19—90 ra. 4 Tfln.). Als Fixieruugsflüssigkeit diente zumeist Sublimat nach dem von Petrunkewitsch modifizierten Rezept von Gilson. Man verwendet das Gemisch vorteilhafterweise heiß. Nach Einwirkung während einiger Sekunden kühlt man durch Zusatz von kaltem Gemisch und läßt dann die Larven 2 bis 12 Stunden darin. Ein Anstechen mit der Nadel ist empfehlenswert, vor allem bei größeren Larven. Nach der üblichen Alkoholbehandlung wurde durch Xylol in Paraffin ein- gebettet. Für junge I^arven genügt ein Belassen von ^/.^ bis einer Stunde im Paraffin, für größere sind aber wegen des umfangreichen Fettkörpers mehrere Stunden erforderlich. Zur Färbung kam in den meisten Fällen Böhmers Hämatoxylin, kombiniert mit Pikrokarmin, zur Verwendung. Für Spezialzwecke wurde noch Hämalaun , Much- hämatein , Mucikarmin , Fuchsin , Bismarckbraun , Berlinerblau etc. benutzt. Fixierungen mit den Osmiumgemischen nach Flemming und VOM Rath ergaben keine genügend befriedigeudeu Resultate. E. Schoebel {Neapel). :Schul)erg, A., u. Schröder, 0., Myenchus bothryophorus, ein in den M u s k e 1 z e 1 1 e n von N e p h e 1 i s schma- rotzender neuer Nematode (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXVI, 1904, p. 509 — 521 m. 1 Tfl.). Die ausgebildeten , geschlechtsreifen Tiere erhält man am ein- fachsten dadurch , daß man die lebenden Exemplare von Nephelis in einem Uhrschälchen mit physiologischer Kochsalzlösung in kleine Stücke zerschneidet. Die hierbei freiwerdenden Parasiten besitzen die typische Nematodenform und sind im Durchschnitt etwa 0*4 mm lang. Im Wirtstier liegen die Parasiten vorübergehend frei im Bindegewebe , ohne Cyste , und zwar sowohl in dem zwischen den inneren Orgauen sich ausbreitenden Gewebe, wie unmittelbar unter ■der Epidermis; den eigentlichen Wohnsitz bilden aber die Muskel- 64 Referate. XXI, 1. zelleD. Am besten überzeugt man sich hiervon an Mazerationsprä- paraten. Die Isolierung der Muskelfasern geschieht am besten durch Mazeration in etwa öprozentiger Salzsäure bei einer Temperatur von 40*^ C. während 12 bis 24 Stunden, oder durch Kochen von in Sublimat fixierten Tieren in Wasser. Salzsäurebehandlung hat den Nachteil, daß die Färbbarkeit der Kerne leidet, was bei der Koch- methode nicht geschieht. Das Kochen des Sublimatmaterials , das keinerlei Schädigung der guten F^'ixierung mit sich zu bringen scheint, nimmt man am besten so vor, daß man die kleinen Tiere — hier also Nephelis — in destilliertem Wasser in ein Reagenzglas bringt, welches man in ein mit Wasser gefülltes Becherglas (als Wasser- bad} einhängt und dann eine bis mehrere Stunden kocht. Bei sehr vielen Objekten gelingt es dann, durch kräftiges Schütteln die Muskel- fasern zu isolieren. Sowohl die in Salzsäure, wie in kochendem Wasser isolierten histologischen Elemente werden am besten im Reagensröhrchen weiterbehandelt, gefärbt und in Xylol übergeführt, wobei die CoRische Laboratoriumszentrifuge ^ gute Dienste leistet. Zur Färbung eignet sich gut DelafieldscIics Hämatoxylin (verdünnt und mit Essigsäure angesäuert) und Eosin (^/oprozentige wässerige Lösung). Da durch das Zentrifugieren die isolierten Elemente wieder etwas zusammengeballt werden, so muß man sie im Kanadabalsam etwas auseinander wirren. Noch schonender und einfacher als mit Nadeln geschieht dies dadurch , daß man eine kleine Probe des isolierten Materials auf ein Tröpfchen Kanadabalsam auf den Objekt- träger bringt, also das Xylolmaterial dem Balsam zusetzt, nicht um- gekehrt. Es breitet sich dann das Xylol so rasch auf dem Balsam aus , daß dadurch die Muskelzellen etc. auseinandergewirrt werden. E. Schoebel {Neapel). Scliweikart , A. , Beiträge zur Morphologie und Genese der Ei hüllen der Cephalopoden und Chitonen (Zool. Jahrb. Suppl. Bd. VI, 1904, p. 353—406 m. 2 Figg. u. 4 Tfln.). Die Einbettung der herauspräparierten Oocyten geschah nach leichter Vorfärbung in verdünntem Hämatoxylin nach dem Hoff- mann sehen Nelkenöl-Collodium- Verfahren. Bei älteren Stadien konnte die gewöhnliche Paraffin - Einbettungsmethode angewendet werden. Von allen den Stadien, in welchen die Dotter- und Chorionbildung 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XII, 1895, p. 303. XXI, 1. Referate. 65 im Gange ist, lassen sich aber gute Schnitte nur erhalten, wenn man den Paraftinblock vor jedem Schnitt mit Mastixlösuug bepinselt. Außerdem ist es zu empfehlen das Dotter nach Möglichkeit aus der abgeschnittenen animalen Eikappe herauszupinseln. Die Färbung junger Stadien geschah mit Hämatoxylin oder Heidenhains Eisen- hämatoxylin. Oft lieferte auch Doppelfärbung mit Hämatoxylin (in alkoholischer Lösung) und Eosin (in Xylolalkohol) recht gute Bilder, vor allen für die Darstellung der Chorionausscheidung. E. Schocbel (Neapel). Kostauecki, K., Cytologische Studien an künstlich parthenogenetisch sich entwickelnden Eiern von Mactra (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXIV , 1904, p. 1—98 m. 10 Figg. u. 5 Tfln.). Sowohl die künstlich befruchteten , als auch die in künstlicher parthenogenetischer Entwicklung begriffenen Eier wurden in den gewünschten Zeitabständen in PEi.'ENYischer Flüssigkeit fixiert, sodann durch Alkohol von 70, 80, 90, 96 Prozent absoluten Alkohol (ein- mal erneuert) , Chloroform mit Alkohol zu gleichen Teilen , reines Chloroform , mit Paraffin gesättigtes Chloroform hindurchgeführt und in Paraffiu vorsichtig eingebettet; darauf in Serienschnitte von 5 ju Dicke zerlegt mit Eisenhämatoxyliu nach Vorfärbung in Bordeaux R gefärbt. E. Sckoebel (Neapel). Görich, W., Zur Kenntnis der Spermatogenese bei den Poriferen und Coelenteraten nebst Bemer- kungen über die Oogenese der ersteren (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXVI, 1904, p. 522—543 m. 4 Figg. u. 1 Tfl.). Die Fixierung der Schwämme (Sycandra, Spongilla) erfolgte zum Teil mit Sublimat, oder Hermann scher Flüssigkeit, zum Teil einfach mit absolutem Alkohol. Sycandra mußte vor dem Einbetten entkalkt werden. Zur P^ärbung diente fast durchweg Heidenhains Eisen- hämatoxyliu, zum Teil kombiniert mit Bordeaux- oder Magenta-Ptot. E. Sclioebel (Neapel). Hamlyu- Harris, K., Die Statocysten der Cephalopoden (Zool. Jahrb., Morph. Abth. Bd. XVHI, 1903, p. 327—358 m. 10 Figg. u. 5 Tfln.). Die besten Resultate ergab Material, das mit Sublimat-Essigsäure Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 5 66 Referat.e. XXI, 1. oder Kaliumbichromat- Essigsäure fixiert war. Da es sich zeigte, daß in der iineröffnet fixierten Statocyste die Erhaltung der histologischen Elemente zu wünschen übrig ließ , wurden die Statocysten später vor der Fixierung meist aufgeschnitten. Die Färbung nach Heiden- hain ist für vorliegenden Zweck sehr zu empfehlen. Außer ihr kam aber noch gewöhnliche Hämatoxylinfärbung, kombiniert mit Eosin oder Orange G , und Karminfärbungen zur Verwendung. Zur Ent- kalkung der StatoUthen genügt nicht immer die einfache Behandlung mit den genannten sauren Fixierungsmitteln. Wo eine weitere Ent- kalkung notwendig war, wurde dieselbe mit ein- bis 2prozentiger Salzsäure nach Einbettung der Statocysten in Celloidin vorgenommen. Nach Weglösung des Celloidins nach beendeter Entkalkung konnte dann in gewöhnlicher Weise in Paraffin eingebettet und geschnitten werden. -E". Schoebel {Neapel). May, A. J., A Contribution to the Morphology and De- velopment of Corymorpha pendula (Americ. Na- turalist, vol. XXXVII, 1903, p. 579—599 w. 12 Figg.). Zur Fixierung eignet sich Sublimat am besten; Formol und FLEMMiNG'sche Flüssigkeit gaben weniger befriedigende Resultate. Zur Feststellung der allgemeinen histologischen Verhältnisse ist Fär- bung in toto mit Boraxkarmin und für die entwicklungsgeschichtlichen Fragen Hämatoxylin kombiniert mit Eosin, oder Eisenhämatoxylin kombiniert mit Bordeaux recht empfehlenswert. E. Schoebel (Neapel). Herbig, C, Anatomie und Histologie des tibialen Ge- hör apparates von Gryllus domesticus (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LXI, 1903, p. 697 — 729 m. 6 Figg. u. 2 Tfln.). Zur Fixierung wurde meist Alkohol, Sublimat, FLEMMiNG'sche Lösung oder einprozentige Osmiumsäure gebraucht. Als Farbstoffe dienten Alauncarmin, Hämalaun, Hämatoxylin. Behufs guter Durch- tränkung bei der Paraffineinbettung ist das Einlegen der Tibien in toto nicht angängig. Man trägt am besten die ganze hintere Hälfte, also großes Trommelfell und den größten Teil der zugehörigen Trachee mit dem Rasiermesser ab und bettet nur das übrige Stück, das den Sinnesapparat, kleines Trommelfell, kleine Trachee und Nerven enthält, nach Durchfärbung mit Alaunkarmin oder Hämalaun ein. Beim Schneiden muß man, um ein Zerreißen zu vermeiden, XXI, 1. Referate. 67 darauf achten, daß das Messer der Chitinseite , d. i. der vorderen Fläche der Tibia zugewendet ist. Die Schnitte, welche sich immer stark krümmen, müssen auf viel Wasser schwimmend über der Flamme gut gestreckt werden. Nach dem Aufkleben ist es unbedingt er- forderlich die Paraffinschnitte mit Celloidinlösung dünn zu über- streichen, um Abbröckeln und Abfallen von Schnitttheilchen bei den folgenden Prozeduren zu vermeiden. Das Paraffin läßt sich trotz des Celloidinüberzuges gut in ein bis l^/.^ Tagen auflösen. In Kanada- balsam eingeschlossen , stört die Celloidinschicht nicht. Situspräpa- rate der Trommelfelle und der Tracheenverzweigungen dieser Bein- region stellt man am besten so her, daß man die ausgeschnittenen Tibieu in Eau de Labarraque bis zur vollständigen Durchsichtigkeit mazeriert, mit destilliertem Wasser gut auswäscht, leicht mit Alaun- karmin färbt und in Glyzerin einschließt. Zu Situspräparaten für Tracheenstudien wurden die in Alkohol gehärteten Tibien mit einer dicken Celloidinlösung auf Kork so aufgeklebt , daß das gewünschte Tympanum mit Trachee der Fläche des Korkes auflag. Die ent- sprechende andere Hälfte wurde dann mit dem Rasiermesser abge- tragen. Hierbei kommt es darauf an , durch einen einzigen in der richtigen Höhe geführten Schnitt, das Gewünschte frei zu legen , da beim Weiterschneiden stets Zerreißungen und Verschiebungen vor- kommen. Zur Veranschaulichung der gegenseitigen Verbindung ist zunächst die äußere Beinseite abzutragen. Die Tibia wird hier- auf schnell umgedreht und die abgetragene Fläche , der Fläche des Korkes zugewendet, wieder aufgeklebt, darauf die innere Beinseite entfernt. Bei der Anfertigung eines solchen Präparates ist es rat- sam, gleich eine ganze Anzahl von Tibieu aufzukleben, da man erst durch vieles Schneiden und gleichzeitiges Besehen unter dem Mikro- skop erfährt, wie weit das Chitin entfernt werden darf und es außer- dem sehr selten gelingt, sowohl äußere wie innere Chitiuschicht an ein und derselben Tibia richtig abzutragen. Zum Studium der Gehör- stifte ist eine Isolierung derselben anzuempfehlen. Die äußerst müh- same Arbeit machte Verf. in folgender Weise : Nach Entfernung des Chitins der inneren Beinseite wurde das ganze, das Beinlumen ein- füllende Gewebe mit einer feinen Pinzette herausgenommen, dann alle anderen Teile , natürlich unter dem Mikroskop bis auf das Hämal-, beziehungsweise endolymphatische Organ entfernt. Diese wurden dann auf dem Objektträger mit einprozentiger Osmiumsäure ziemlich stark gebräunt, in Wasser ausgewaschen und mit Holzessig unter steter Beobachtung weiterbehaudelt. Nach möglichster Zer- 68 Referate. XXI, 1. kleinerung der betreffenden Organe mittels Präpariernadeln folgte Einschliessung in verdünntem Glyzerin. Die Isolierung wurde dann durch Druck oder Klopfen auf das Deckglas noch nach Möglichkeit vervollständigt. Um Querschnitte durch die Stifte des endolympha- tischen Organs zu erhalten, wurde die Tibia mit dem Rasiermesser in dicke Längsstreifen zerlegt und diejenigen Streifen, die das endo- lymphatische Organ im Zusammenhange mit der Hypodermis und Cuticula der äußeren Beinseite enthielten, wurden nach Abpräparieren der noch anhaftenden Teile der vorderen Trachee in Paraffin ein- gebettet und parallel zur Cuticula geschnitten. E. Sdioebel (Neapel). B. Wirbeltiere. Unna, P. G. , Eine neue Darstellung der Epithelfasern und die Membran der S t a c h e 1 z e 1 1 e n (Monatsh. f. prakt. Dermatol. Bd. XXXVII, 1903, p. 1 — 18 m. 1 Tfl.). Unna gibt eine neue Methode zur B'ärbung der Epithelfaseru an, Sie ist die folgende : Als Material wird das spitze Kondylom empfohlen , am besten größere Wucherungen , teils in absolutem Alkohol, teils in Formol fixiert, in Alkohol gehärtet, in Celloidin ein- gebettet, und in Schnitte von 5 bis 7*5 ^i zerlegt. Zur Färbung verwendet man 1) die folgende Mischung: Wasserblau l'O g Orcein l'O „ Eisessig 5'0 „ Glyzerin 20-0 „ Spiritus 50"0 „ Wasser ad lOQ-O „ Von dieser vorrätig zu haltenden Mischung werden in einem Reagenz- glase 1 g zuerst mit 0'3 g (gleich O'OOo Eosin) einer einprozentigen Lösung von spirituslöslichem Eosin in Alkohol von 80 Prozent und sodann mit 0*3 g (gleich O'OOS Hydrochinon) einer einprozentigen wässerigen Hydrochinonlösung gut gemischt. Man färbt , um Ver- dunstung zu verhindern, im Reageuzglase 10 Minuten in der Kälte. 2) In destilliertem Wasser abspülen. 3)» Safranin 0. GutiBLER (ein- prozentige wässerige Lösung) 10 Minuten. 4) In destilliertem Wasser gut abspülen. 5) Kalium bichromicum (Ygprozentige wässerige Lö- XXI, 1. Referate. 69 sung) 10 bis 30 Minuten. 6) In destilliertem Wasser abspülen. 7) Absoluter Alkohol, Öl, Balsam. Falls der Schnitt, der violett aussehen soll, nach obertlächlicher Besichtigung- im Alkohol (7) zu rot (zu reich an Safranin) erscheint , bringt man denselben wohl in öl , dann aber noch einmal in absoluten Alkohol , wo er sofort ge- nügend Safranin abgibt, und dann erst weiter in Öl und Balsam. Schiefferdecker {Bonn). Laguesse, E. , Sur l'histogenese de la fibre co Ilagene et de la substauce foudamentale dans la cap- sule de la rate chez les Selaciens (Arch. d'Anat. microsc. t. VI, 1903, fasc. 2, 3, p. 99 — 169 av. 1 pL). Verf. hat die Milz gewählt, weil er dieselbe aus früheren Unter- suchungen über ihre Entwicklung schon genauer kannte und weil sie auch sonst günstig für die Untersuchung erschien. Für die Unter- suchung war vor allem eine Methode nötig, welche die Bindegewebs- fasern möglichst elektiv färbte. Verf. hat die verschiedenen von Unna angegebenen Methoden untersucht und einige weitere. Die besten Resultate ergab die Methode von van Gieson in der Modi- fikation von Hansen. Verf. hat auch diese wieder vereinfacht und sie in folgender Weise angewendet. Zu 100 cc einer in der Kälte gesättigten wässerigen Lösung von Pikrinsäure setze man 5 cc einer 2prozentigen wässerigen Säurefuchsinlösung. Man bewahre die Flüssig- keit unter Lichtabschluß auf. Im Augenblicke des Gebrauches nehme man zwei Uhrschälchen von etwa 3 cc Inhalt, fülle das eine mit der Lösung und füge einen bis 2 Tropfen einer 2prozentigen Essigsäure zu, das zweite mit destilliertem Wasser, dem man 2 Tropfen der angesäuerten Färbelösung zugesetzt hat; färbe 5 Minuten mit dem Inhalte des ersten Uhrschälchens , wasche sehr rasch aus (2 bis 4 Sekunden) mit dem Inhalte des zweiten; übertrage in 95prozen- tigen Alkohol, dann in absoluten Alkohol (im ganzen höchstens eine bis 2 Minuten), dann Xylol, Kanadabalsam. Die Bindegewebsfasern treten dunkelrosa oder lebhaft rot hervor. Kerne und Zellplasma bleiben gelb. Verf. verwendet die Färbung ohne Gegenfärbung mit Hämatoxylin. Bei vielen Objekten ist diese Färbung ausreichend, bei anderen sind die feinen Fasern etwas zu blaß, Verf. hat daher sehr häufig eine Lösung benutzt, die reicher an Säurefuchsin war. An Stelle einer 2prozeutigen Lösung hat er eine 4prozentige ge- nommen; die Elektivität der Färbung ist ebensogut, die Färbung selbst lebhafter. Man soll sich beide Lösungen vorrätig halten. 70 Referate. XXI, 1. Man kann diese Färbung benutzen nach Fixierung in Sublimat oder Alkohol oder Pikrinsäure. Die besten Resultate bat Verf. erhalten nach Fixierung in gesättigter wässeriger Pikrinsäurelösung (wie sie Ranvier zuerst in die Technik des Bindegewebes eingeführt hat), oder in der Form der Kleinenberg sehen Flüssigkeit (so besonders bei Embryonen). Das Pikro-Indigo-Karmin ist zu empfehlen nach Fixierung in Fi.emming scher Flüssigkeit und Färbung mit Safranin; hier wirkt das Pikro- Fuchsin mitunter nicht. Die Fasern treten blau hervor, aber weniger scharf als bei der vorigen Färbung. Verf. hat auch das saure Methylblau benutzt (Zachariades und Renaut), ist aber nicht zu einer guten elektiveu Färbung gelangt. Die WEiGERTSche Methode für elastische Fasern läßt in gewissen Fällen die junge Bindegewebsfaser vorzüglich hervortreten. Schieferdecker {Bonn). Blallory, F. B. , A hitherto undescribed fibrillar sub- stance produced by connective tissue-cells (Journ. med. research. vol. X, 1903, no. 3, p. 334 — 341 w. 1 pl.). Verf. hat im Bindegewebe eine bisher unbekannte Art von Fasern aufgefunden. Bei der Bindegewebsfärbung mit Anilinblau färben sich die gewöhnlichen Bindegewebsfibrillen tiefblau, während die elastischen Fasern, falls sie nicht degeneriert sind , farblos oder ganz blaßrot erscheinen. Die neuen Fasern färben sich bei dieser Methode rot , sie werden aber leicht übersehen bei der sonstigen tiefblauen Färbung. Die einfachste und beste Methode, um sie sicht- bar zu machen, ist die folgende: 1) Fixirung in ZENKERScher Flüssig- keit. Das Gewebe muß möglichst frisch sein und in Stücke von 2 bis 4 mm Dicke zerlegt werden. 2) Celloi'din- oder Paraffinschnitte werden nachtsüber bei Zimmertemperatur in einer einprozentigen wässerigen Lösung von Säurefuchsin gefärbt oder noch besser 20 bis 30 Minuten lang im Paraffinofen bei 56*^. 3) Schnelles Auswaschen in Wasser, nicht länger als 2 bis 5 Sekunden , da das Wasser das Säurefuchsin sehr schnell auszieht. 4) Differenzierung in einer ^Z^- prozentigen wässerigen Lösung von übermangansaurem Kalium 20 bis 40 Sekunden. Man darf nur die gerade nötige Zeit ditferen- zieren , sonst wird der Schnitt entfärbt. 5) Schnelles Auswaschen in Wasser, nicht länger als 2 bis 5 Sekunden. 6) Entwässerung in Alkohol. 7) Ol. Origani cretici oder Xylol. 8) Xylolbalsam. P'ast ebenso gute Resultate kann man erhalten , wenn man die Schnitte XXI, 1. Referate. 71 bei Stubentemperatur in einer einprozentigen Lösung von Säurefuchsin 5 bis 20 Minuten lang färbt und in einer sehr verdünnten Lösung von übermangansaurem Kalium etwa 30 Sekunden entfärbt. Bei der beschriebenen Färbung werden die neuen Fasern rot gefärbt und ebenso die Zellkerne , ferner Fibrin , die kontraktilen Elemente der quergestreiften Muskeln , die groben Fibrillen der glatten Muskeln, Neurogliafasern und die Cuticulargebilde auf der Oberfläche der Epithelzellen. Gewöhnliche Bindegewebsfibrillen erscheinen gelb- bräunlich oder farblos , elastische Fibrillen , wenn nicht degeneriert, hellgelb. Mitunter kann man die neuen Fasern auch mit der Eosin-Methylenblau-Methode nach Fixierung in ZENKEuscher Flüssig- keit sehr deutlich tiefrosa auf fast farblosem Grunde erhalten. Sie lassen sich auch leicht färben nach derselben Fixierung mit der Phosphor- Wolframsäure -Hämateinmethode. Auch mit der Anilin- blaubindegewebsfärbung gelingt die Darstellung, wenn man diese Methode in der folgenden Weise modifiziert. 1) Fixierung in Zen- KERScher Flüssigkeit. 2) Färbung von Paraffinschnitten in einer ein- prozentigen wässerigen Lösung von Säurefuchsin 5 bis 20 Minuten lang. ;5) Schnelles Auswaschen in Wasser, nicht länger als 5 Se- kunden. 4) Übertragen in eine einprozentige wässerige Lösung von Phosphor-Molybdänsäure für 5 Älinuten oder länger. Schnelles Aus- waschen in Wasser, nicht länger als .5 Sekunden. 6) Färbung in der folgenden Anilinblaumischung für eine bis 5 Minuten : Anilinblau, wasserlöslich (GRtJBLER) 0'5 g Orange G (Gritbler) 2-0 „ Oxalsäure 2*0 „ Wasser 100-0 „ 7) Schnelles Auswaschen in Wasser, nicht länger als 5 Sekunden. 8) Gründliches Auswaschen und Entwässern in mehrfach gewech- seltem Alkohol. 9) Xylol. 10) Xylolbalsam. Für gewöhnliche Hille, wenn man nicht gerade diese rotgefärbten Fibrillen besonders her- vortreten lassen will, erhält man eine bessere allgemeine Gewebs- färbung, wenn man die Schnitte in eine •'^/^prozentige wässerige Lö- sung von Säurefuchsin für nur 5 Minuten einlegt. Für manche Organe, z. B. die Leber oder die Lymphknoten, ist es ratsam, das Säurefuchsin noch mehr zu verdünnen. Der Hauptnachteil der an- gegebenen Methoden ist der, dass sie keine Differenzierung erlauben zwischen diesen neuen Fasern und den sich besonders färbenden Fibrillen des glatten Muskelgewebes. In der Tat können auch diese 72 Referate. XXI, 1. neuen Bindegewebsfasern gut gefärbt werden mit den beiden ge- wöhnlich zur Darstellung der Myogliafibrillen angewendeten Methoden : der Heidenhain sehen Eisenhämatoxylinfärbung und der Benda sehen Fixirungsmethode. Weiter können diese Fasern auch gefärbt werden, wenigstens bis zu einem gewissen Grade , durch verschiedene diffe- renzierende Färbungen (Mallory, Benda, Huber) für Neurogliafasern mit Ausnahme der Weigert sehen Neurogliafärbung. Diese neuen Bindegewebsfasern finden sich hauptsächlich in dem dichten fibrösen Gewebe der Mamma , in dem Corium und in der Pia mater des Rückenmarkes. Sie finden sich entweder einzeln oder in kleinen Haufen. Beim Embryo treten sie an bestimmten Stellen auf, an denen sich dichtes Bindegewebe findet, so rings um den Knorpel, und zwar zu einer verhältnismäßig frühen Zeit, zu derselben, wenn die glatten Muskeln ihre spezifisch sich färbenden Fibrillen erhalten. Das interessanteste Gebiet für die Fibrillen ist entzündetes Gewebe aller Art, besonders wenn es stark wächst, z. B. Granulationsgewebe, Carcinom (besonders das Markcarcinom der Mamma) und die anderen Geschwülste , in denen Bindegewebe eine wesentliche Rolle spielt. Mit anderen Worten, diese Fibrillen schließen sich eng an die Binde- gewebszellen an : sie sind zahlreich, wenn die Zellen zahlreich, tätig und in Vermehrung begriften sind , sie sind kaum aufzufinden, wenn die Zellen nur in geringer Zahl vorhanden sind und im Ruhezustande verharren. Schiefferdecker {Bonn). Bodon, li. , Die morphologischen und tinktoriellen Veränderungen n e k r o b i o t i s c h e r B 1 u t z e 1 1 e n (ViRCHOws Arch. Bd. CLXXHI, H. 3, 1903, p. 485—511). Das zu untersuchende Blut wurde zuerst in der allgemein ge- bräuchlichen Weise auf sehr dünne Deckgläschen gebracht. Es wurde sowohl frisch untersucht wie auf gefärbten Deckglastrocken- präparaten. Das lufttrockene Präparat wurde entweder durch Er- hitzen oder durch möglichst wasserfreien absoluten Alkohol fixiert, je nachdem es die angewendete Färbemethode erforderte. Zur Zeit der Blutentnahme wurden auch mehrere GRAWiTzsche Kapillaren mit Blut beschickt und darauf ihre Enden mit Wachskügelchen ver- schlossen. In einige dieser Kapillaren wurde vorher Natriumoxalat gebracht, um der Gerinnung des Blutes vorzubeugen (Biernackis Sedimentierungsverfahren , modifiziert von E. Grawitz). Die so be- schickten Kapillaren werden senkrecht aufgestellt und bei Zimmer- temperatur verschieden lange (l^j Stunden bis 100 Tage) auf- XXI, 1. Referate. 73 bewahrt. So war in den Deckglastrockenpräparten der Zustand des frischen Bhites fixiert, mit dem dann der Zustand des in den Kapillaren bei Luftabschluß verschieden lange aufbewahrten Blutcoaguluras und Blutsedimentes verglichen werden konnte. Aus den Kapillaren wurde das Blut auf folgende Weise entnommen : Nach Entfernung der Wachs- kügelchen wurden die Kapillarenden, soweit sie mit den Wachs- kügelchen in Kontakt gewesen waren , abgebrochen. Das faden- förmige , aus der Kapillare heraushängende Coagulum wurde sehr zart über das vorher sorgfältig gereinigte Deckgläschen gestrichen, ein anderes Deckgläschen schnell darübergelegt und rasch abgezogen, hierauf an der Luft getrocknet , fixiert und gefärbt. Auf ähnliche Weise wurden die Sedimente behandelt, natürlich mit dem Unter- schiede , daß hier der Tropfen direkt durch leises Schütteln der Kapillare auf das Deckgläschen gebracht werden konnte. Das Ab- ziehen, Trocknen, Fixieren und Färben der Präparate geschah natür- lich ebenso schonend, wie bei den gewöhnlichen Blutuntersuchungen, um die Möglichkeit einer mechanischen Verletzung der Formelemente auf ein Minimum zu reduzieren. Trotzdem wurde eine große Zahl von Präparaten unbrauchbar und erst nach Erlangung einer gewissen speziellen Fingerfertigkeit gelang es dem Verf., brauchbare Präparate von alten Coagula und Sedimenten anzufertigen. Abgesehen von der Untersuchung des ungefärbten Präparates kamen die folgenden Färbungsmethoden in Anwendung: Ehrlich s Triacidlösung, Ehrlichs Eosin-Hämatoxylin (beide von GRtJBLER u. Co. , Leipzig , bezogen), Eosin-Methylenblau, imd zwar so, daß zuerst in einer O'lprozentigen wässerigen Eosinlösung (Marke A. G.) und hierauf in Löfflers Methylenblau gefärbt wurde, nach Romanowsky-Ziemann, nach Chen- ziNSKY, in saurem Eosin-Hämatoxylin, in reiner wässeriger, O'lpro- zentiger Eosinlösung, in reiner LöFFLERScher Methylenblaulösung, in Thioninlösung nach den Angaben von Futcher und Lazear, in poly- chromem Methylenblau (Grübler) entweder rein oder mit 10 bis 15 Sekunden langer Vorfärbung in O'lprozentiger wässeriger Eosin- lösung , in Jod-Jodkalium nach dem folgenden Rezepte : Jod 1 g, Jodkalium ,3 g, destilliertes Wasser 100 g. Zu dieser Lösung wird nach GoLDBERGER und Welss ^ so viel Gummiarabicum hinzugefügt, bis die Lösung eine sirupartige Konsistenz erhält. Das so zube- reitete Reagenz wurde auf das lufttrockene, aber unfixierte Präparat gebracht, der Überschuß nach 5 Minuten weggeblasen, das Präparat ') Wiener klin. Wochenschr. 1897. 74 Referate. XXI, 1. mit feinem, nicht faserndem Löschpapier abgetrocknet und in Kanada- balsam untersucht, endlich noch Färbung in Sudan III. Die Azur- reaktion und die von Pappenheim eingeführte Methylgrün -Pyronin- färbung , mit deren Hilfe es wohl besser gelungen wäre , einzelne zweifelhafte Zellformen zu differenzieren, standen dem Verf. zu Be- ginne seiner Untersuchungen nicht zur Verfügung. Später mußte er dann im Interesse der Gleichartigkeit der angewandten Färbungs- verfahren von der Benutzung dieser Methoden Abstand nehmen. Schiefferdecker {Bonn). Bloch, C. E., Die Säuglings-Atropli ie und die Paneth- schen Zellen (Jahrb. f. Kinderheilk. Bd. LIX, 1904, H. 1, p. 1 — 29). Die Unterleibsorgane wurden, um Leichenveränderungen zu ver- meiden, durch Injektion einer lOprozentigen Formalinlösung in den Unterleib fixiert, in den meisten Fällen unmittelbar nach dem Tode. Bei der Sektion wurden Magen und Darm , nachdem sie heraus- genommen worden waren, geraessen. Die Organe wurden in fließen- dem Wasser abgespült und in 60prozentigem Alkohol aufbewahrt. Zur mikroskopischen Untersuchung wurden Stücke aus den verschie- denen Teilen des Darmkanales entnommen. Teils waren es kleinere Stücke, die in Paraffin eingebettet wurden, teils bis zu 15 cm lange Streifen, die spiralig aufgerollt in Celloidin eingebettet und als Über- sichtspräparate benutzt wurden. Von den Paraffinblöcken wurden Serien mit einer Schnittdicke von 5 /t angefertigt. Zur Färbung wurde besonders die HANSExsche Bindegewebsfärbung benutzt, die oft zwecks Kernfärbuug mit Methylenblau und Hämatoxylin kombiniert wurde. Hauptsächlich wurde die Dreifarbenmischung von Ehrlich-, Biondi-Heidenhain (Methylgrün, Säurefuchsin und Orange), verwendet, die fast stets eine konstante und ausgezeichnete Färbung ergab. Der Farblösung, welche um so schneller färbt, je älter sie ist, wurde Essigsäure zugesetzt, so daß die Lösung einen deutlich rötlichen Ton erhielt (2 bis 3 Tropfen einer 2prozentigen Essigsäurelösung zu ca. 50 cc der Farblösung). Schiefferdecker {Bonn). Schittmaun, J., Die Histogenese der elastischen Fasern bei der Organisation des Aleuronatexsudates (Zentralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIV, 1903, No. 20, p. 833—841). Verf. hat die Genese der elastischen Fasern an pleuritischen XXI, 1. Referate. 75 Scliwarten studiert. In diesen ist das elastische Fasernetz so reich- lich entwickelt, daß sich die jungen, neugebildeten Fasern nicht mit Sicherheit als solche erkennen lassen. Verf. verwandte daher Injek- tion von Aleuronatbrei zur experimentellen Erzeugung von pleuri- tischer Reizung. Wertvoller sind hierbei die Stellen, an denen sich nur durch den chemischen Reiz gebildete Exsudate zeigen , da hier die mitunter störend wirkenden Aleuronatkörnchen fehlen. Die besten Bilder liefert Alkoholfixierung, doch wurde mitunter auch ZENKERSche Flüssigkeit und MüLLER-Formol benutzt. Zur Färbung der elastischen Fasern wurde die länger dauernde Färbung mit Resorzin-Fuchsin von Pranter verwendet. Einbettung in Paraffin, Färbung 24 Stunden, dann kurze Differenzierung in absolutem Alkohol. Nachfärbung mit Aniliuwassersafranin nach Babes. Differenzierung in 95prozentigem Alkohol, dann Origanumöl, das noch einen Teil des Safranins aus- zieht. Auch Nachfärbungen mit Hämalaun-Eosin , mit der Färbung nach VAN Gieson und mit polychromem Methylenblau wurden ge- macht. Als Kontrollfärbungen dienten die mit Orcein nach Unna- Tänzer und die Weigert sehe Methode. Diese letztere ergab stets gleiche Resultate wie die Pranter sehe, während das Orcein die feinsten Fasern nicht so scharf hervortreten läßt. Die von Krzyszta- Lowicz angegebene Methode zur Differenzierung von Elastin und Elaciu war nicht so brauchbar, weil die oft verzweigten, vielfach geschlängelten Protoplasmaausläufer mancher Zellen durch ihre Blau- färbung Elacinfasern vortäuschen können. Verf. bemerkt , daß er bei dieser Methode die aufgefaserte Elastika stets in braunem Farben- tone, nur selten einzelne Partien etwas grünlich gefärbt fand. Scliiefferdecker [Bonri). Yialletoii, L., Etüde sur le cceur des Lamproies Petro- m y z n m a r i n u s L. , P. p 1 a n e r i Bloch, A m m o - coetes branchialis L. avec quelques remarques sur l'anatomie comparee du cceur des Cyclo- stomes (Arch. d'Anat. microsc. t. VI, 1903, fasc. 2, 3, p. 283—384 av. 2 pL). Petromyzon marinus wurde einfach anatomisch zergliedert mit Ausnahme einiger zur mikroskopischen Untersuchung benutzter Stück- chen. Es ist zu diesem Zwecke am besten , die Tiere etwa einen Monat in Mltller scher Flüssigkeit zu lassen. Diese Behandlungsweise erwies sich als weit vorteilhafter wie ein Einlegen in Alkohol oder Formol. Petromyzon planeri und Ammocoetes wurden mit Hilfe von 76 Referate. XXI, 1. Serienschnitten nach Paraffineinbettung untersucht, die Schnitte wurden quer, sagittal und frontal gelegt. Auch hier erwies sich Müller sehe Flüssigkeit als günstig, wieder besser als Alkohol und Formol. Die Einbettung muß mit größter Vorsicht ausgeführt werden , damit die Chorda dorsalis von Paraffin durchdrungen wird. Die Sache ge- lingt , wenn man die Stücke sorgfältig entwässert und dann längere Zeit in einer Mischung von Xylol und Paraffin bei gewöhnlicher Temperatur liegen läßt. Schiefferdecker {Borm). Deflaiidre , C. , La fonction adipogenique du foie dans 1 a Serie a n i m a 1 e (Journ. de 1' Anat. et de la Physiol. Annee XL, 1904, no. 1, p. 73—110 av. 10 figg.). Man hat verschiedene Methoden um Fett nachzuweisen, die beste ist nach Verf. Fixierung in Osmiumsäure. Gewöhnlich wurde in der folgenden Weise verfahren : Gleich nach dem Tode des Tieres entnimmt man der Leber möglichst dünne Schnitte , und zwar aus verschiedenen Teilen derselben. Die Schnitte kommen in die starke FLEMMiNGSche Lösung (24 Stunden), dann 24stündiges Auswaschen in fließendem Wasser. Die eingelegten Stücke müssen sehr klein sein und müssen sehr gründlich ausgewaschen werden. Verf. emp- fiehlt hierfür eine Vorrichtung , derentwegen auf das Original ver- wiesen wird ; dann Entwässerung in absolutem Alkohol , Xylol (2 Stunden), Paraffinbad (48*^) 4 bis ,5 Stunden. Die Schnitte wurden entweder ungefärbt in Glyzerin aufgehoben oder in Safranin gefärbt (24 Stunden). Verf. empfiehlt die folgende Mischung: Man macht sich eine Lösung von Safranin (1 Prozent) in absolutem Alkohol, die sich sehr lange hält. Mit dieser Mutterlösung stellt man sich die folgende Mischung her: Safranin, alkoholische Lösung 10 cc Destilliertes Wasser 10 „ Anilinwasser 10 „ Die hiermit gefärbten Stücke werden mit absolutem Alkohol, in dem etwas Pikrinsäure gelöst ist, ausgewaschen und dann in gewöhnlicher Weise aufgehoben , doch ist es empfehlenswert , die Stücke nicht in Xylolbalsam, sondern in Glyzerin aufzuheben oder in der Flüssigkeit von ArATHY (Wasser, Gummi und Zucker). Das Protoplasma ist blaßgelb, die Kerne rot, die Fetttropfen schwarz. Ferner wurde oft eine Färbung mit Magentarot und Pikrinsäure verwendet. Färbung während 10 bis 15 Minuten in der Wärme mit Magentarot, Aus- XXI, 1. Referate. 77 waschen in Pikrinalkoliol , Aufheben wie oben. Diese Färbung ist weniger fein , als die mit Safranin , läßt sich aber in wenigen Mi- nuten ausführen, während die andere 24 Stunden verlangt. — Die histochemische Unterscheidung zwischen Fetten und Seifen wurde mittels der folgenden neuen Methode vorgenommen. Ein Teil des Organstückchens , gleich nach dem Tode dem Tiere entnommen, wird in 4prozentiger Formollösung fixiert. Nach 24 Stun- den wird es längere Zeit in fließendem Wasser ausgewaschen. Die in Wasser löslichen Seifen werden auf diese Weise entfernt und das Fett allein bleibt zurück. Die so ausgewaschenen Stücke werden mit Flemming scher Flüssigkeit fixiert. Man vergleicht dann Schnitte von den ausgewaschenen Stücken mit solchen , welche direkt in Osmiumsäure fixiert worden sind : In den letzteren entsprechen die schwarzgefärbten Körnchen den Seifen und den Fetten , in den ersteren nur den Fetten. So kann man einen Schluß auf die Menge der Seifen machen. Um histochemisch die Fette von den Lecithinen zu unterscheiden, wurde die folgende neue Methode angewendet. Man behandelt die Stücke mit Formol (4 Prozent in physiologischer Kochsalzlösung), sodann mit Azeton, welches die Fette löst, aber nicht die Lecithine. Darauf läßt man Osmiumsäuredämpfe oder Flemming sehe Lösung einwirken: Die Lecithine allein färben sich schwarz. Der Vergleich von Schnitten , welche nach der Ein- wirkung von Azeton mit Osmiumsäure behandelt worden sind , mit solchen , welche direkt mit Osmiumsäure behandelt wurden , ergibt die Menge der Lecithine und der Fette. Verf. bespricht sodann weiter die anderen Methoden, um Fett und Farbstoffe herzustellen, bemerkt aber, daß von diesen wenig Gebrauch gemacht wurde, da wegen der leichten Ausziehbarkeit der Fette es schwierig ist, solche Präparate zu schneiden und aufzuheben. Die Methode der Färbung des Fettes mit dem Kupfer-Hämatoxylin von Weigert, modifiziert von Regaud, welche von Mulon, von Bonnamour und Policard be- nutzt worden ist, gibt keine scharfen Resultate und das Fett löst sich teilweise, — Diejenigen Organstücke , welche nicht zur Unter- suchung auf Fett dienten, wurden zum Teile in einer 4prozeutigen Formollösung, meist in einer solchen in physiologischer Kochsalz- lösung (Regaud), teilweise in gesättigter Sublimatlösung, teilweise in der Flüssigkeit von van Gehuchten- Sauer fixiert, welch letztere sehr gute Resultate ergab. Die Schnitte wurden meist mit Thionin oder mit Hämatoxylin-Eosiu gefärbt. — Zur Untersuchung auf Glykogen wurden die Stücke in der Flüssigkeit von Sauer fixiert 78 Referate. XXI, 1. (absoluter Alkohol 60 Teile, Chloroform 30 Teile, Eisessig 10 Teile). Das in Wasser lösliche Glykogen ist in Alkohol unlöslich und wird so in den Stücken erhalten. Die Schnitte wurden mit Jod-Gummi nach Brault behandelt: Man macht eine wässerige Lösung von Gummiarabikum von Sirupskonsistenz , setzt einige Jodkristalle zu und einige Kristalle von Jodkalium. Der Schnitt wird von Paraffin befreit in Wasser gebracht und dann mit einigen Tropfen dieser Lösung bedeckt, die man nachtsüber verdunsten läßt. Am folgen- den Tage bedeckt man die getrocknete Oberfläche mit einem neuen Tropfen von Jodgummi und legt dann das Deckglas auf. Man er- hält so sehr schöne Präparate , die sich nicht so leicht entfärben, als wenn man das Deckgläschen sofort auflegen würde. Das Gly- kogen bekommt eine charakteristische Nußbaumbraunfarbe. Scliiefferdecker {Bomi). Owsjaiinikow, Pli,, Das Rückenmark und das verlängerte Mark des Neunauges (Mem. Acad. imp. Sc. St. Peters- bourg. Gl. phys.-math. , vol. XIV, no. 4, 1903, 32 pp. m. 1 Tfl.). Verf. hat bei seinen schwierigen Untersuchungen alle neueren Methoden zu Hilfe gezogen. Besonders gute Dienste bei der Unter- suchung des frischen Nervengewebes hat ihm die Ehrlich sehe Methode geleistet in folgender Form : Ein kleines Stück Ptückenmark wird auf einen Objektträger gelegt und mit einigen Tropfen einer ^j^^- bis ^/goprozentigeu Methylenblaulösung benetzt. Die Befeuchtung wird einigemal wiederholt, bis das Präparat zu trocknen anfängt und die Zellen , ihre Fortsätze und auch die Nerven blau gefärbt werden. Dann wird das Präparat kurze Zeit (einige Minuten bis zu einer halben Stunde) mit einer konzentrierten Lösung von pikrinsaurem Ammoniak behandelt und schließlich in Glyzerin, das der eben ge- nainiten Lösung zugefügt wird, nach Auflegen eines Deckglases auf- bewahrt. Man kann das Präparat auch nach Färbung mit Methylen- blau direkt mit pikrinsaurem Ammoniak - Glyzerin behandeln ; das Präparat wird allmählich nach einigen Stunden durchsichtig. Das Bild wird viel deutlicher , wenn man Kompression anwendet : es treten dann die von den Zellen abgehenden Fortsätze, von denen man eine große Anzahl ganz bis zur Peripherie verfolgen kann, weit schöner hervor. Statt des pikrinsauren Ammoniaks kann man auch das molybdänsaure Ammoniak (Bethe) verwenden. Das Präparat muß aber nach der Härtung in doppeltchromsaurem Kalium oder XXI, 1. Referate. 79 aucli in frischem Zustande mit starker, etwa einprozentiger Methylen- blaulösung wenigstens 24 Stunden lang behandelt werden. Solche Präparate können in Paraffin geschnitten und in Kanadabalsam auf- bewahrt werden, ohne sich zu entfärben. Verf. hat zu seinen Unter- suchungen immer das Rückenmark von lebenden Exemplaren benutzt. Das Neunauge wurde in Stücke von 4 bis 6 cm zerschnitten. Am Rücken wurde die Haut samt einem Teile der Muskeln mit einem scharfen Rasiermesser so abgetragen , daß das Rückenmark entblößt wurde. Von beiden Seiten des Körpers und von der Bauchseite wurde ein beträchtlicher Teil der Muskeln ebenfalls entfernt. In einigen Fällen wurde das Rückenmark herauspräpariert. Dieses ist aber nur dann ratsam , wenn das Präparat frisch mit schwacher Methylenblaulösung untersucht werden soll ; sollen die Präparate ge- schnitten werden, so ist es besser, das Rückenmark nur zu entblößen und die Härtung der ganzen Stücke vorzunehmen ; das Rückenmark bewahrt dann seine natürliche Form. Ist dasselbe erhärtet, so kann es herausgenommen und der weiteren Behandlung unterworfen werden, ohne daß es sich krümmt oder schlängelt. Bei Anwendung der GoLGi sehen Methode ist es ratsam, die Stücke von 1 bis 2 cm Länge, die in doppeltchromsaurem Kalium gelegen haben, ebenfalls in Stücken in die einprozentige Silberlösung zu legen. Will man sich mit Ma- terial auf längere Zeit versorgen , so verfährt man auf folgende Weise. Es wird eine Mischung aus einer 2prozentigen Lösung von doppeltchromsaurem Kalium und einer lOprozentigen Lösung von Formol zu gleichen Teilen genommen und dann ebensoviel 95pro- zentiger Alkohol zugegossen. Zu dieser Mischung wird Pikrinsäure zugesetzt, so daß dieselbe stark gelb gefärbt ist, und endlich Osmium- säure 0*5 g etwa auf zehn Stücke von Neunaugen. In dieser Mischung verbleiben die Stücke etwa 12 Stunden, werden dann in 95prozeu- tigen Alkohol übertragen, der nach 24 Stunden erneuert wird, und können nun monatelang konserviert werden. Verf. benutzte so kon- serviertes Rückenmark häufig zur Anfertigung von Längs- und Quer- schnitten. Es wurde dazu auf einen oder mehrere Tage in doppelt- chromsaures Kalium gelegt und dann auf 24 Stunden in eine Lösung von Hämatoxylin , bis das Präparat intensiv gefärbt war. Dann wurde dasselbe mit Alkohol entwässert, mit Nelkenöl aufgehellt und dann bei 60*^ C. eine halbe bis eine Stunde im Brütofen in Paraffin nach Spee gelassen. Hierauf wurden die Präparate in Paraffin, welches bis zu derselben Temperatur in einem neapolitanischen Wasser- bade erhitzt war, übertragen und auf einen Objektträger gebracht. 80 Referate. XXI, 1. Da das erhitzte Paraffin flüssig, also durchsichtig ist, kaun man dem Präparate jede gewünschte Lage geben. Nach dem Erkalten Schneiden der Paraffinstücke auf dem Mikrotom. Die Schnitte kommen auf einen mit Glyzerineiweiß bestrichenen Objektträger. Dieser wird erhitzt , damit das das Präparat umgebende Paraffin schmilzt und durch Festwerden des Eiweißes die Schnitte festkleben. Dann wird das Präparat einigemal mit Xylol begossen , hierauf mit absolutem Alkohol und zuletzt wieder mit Xylol. Endlich Kanadabalsam und Deckglas. Will man die Schnitte stärker färben, so bringt man den Farbstoff auf das Präparat, nachdem dasselbe mit Xylol und Alkohol behandelt worden ist. Zuweilen erhält man ausgezeichnete Präparate nach der Färbung mit Hämatoxylinlösung und Glyzerin. Diese Prä- parate können nach geeigneter Behandlung auch in Kanadabalsam untersucht werden. Die Färbung mit Silbernitrat entsteht dadurch, daß das Silber sich auf den Formelementen auflagert. Dieser selbe Prozeß findet nicht selten auch bei Farbstoffen statt, namentlich bei Hämatoxylin und Methylenblau. Ist die Färbung intensiv, was bis- weilen durchaus notwendig ist, so erscheinen die zarten Gewebs- elemente gröber und dicker durch Auflagerung der Farbbestandteile. Dieser Umstand erleichtert wesentlich die Untersuchung. Verf. hat vom Rückenmarke des Neunauges besonders schöne Bilder erhalten, wenn er auf folgende Weise verfuhr. Ein Stück des Rückenmarkes wird mit Methylenblau gefärbt, mit absolutem Alkohol entwässert und in sehr verdünnte Celloi'dinlösung auf 15 bis 30 Minuten gelegt, dann mit Fließpapier abgetrocknet und wieder in Methylenblaulösung übertragen und darin so lange gelassen, bis es sehr gut durchgefärbt ist. Dann Schneiden in Paraffin. Später, bei der Entwässerung des Präparates , muß man bei der Behandlung mit Alkohol vorsichtig sein , damit das Celloidin nicht vollständig aufgelöst wird. Durch Auflagerung des Celloidins auf das Nervengewebe werden die Fort- sätze nicht allein gut gefärbt, sondern sie erscheinen auch dicker und sind daher unter dem Mikroskope besser zu verfolgen. — Für die Untersuchung des Rückenmarkes im frischen Zustande, z. B. bei Färbung mit Methylenblau, ist es durchaus notwendig die harte Haut zu entfernen, welche in zwei Schichten das Rückenmark umgibt. Es gelingt dieses am besten, wenn man Stücke des Markes in schwacher Methylenblaulösung in einem Uhrschälchen etwa eine halbe Stunde liegen läßt. Die harte Haut läßt sich dann sehr leicht von dem Präparate mit Hilfe von Nadeln abziehen. Sie erscheint in Form eines Rohres. Zuweilen kann man sie auf dieselbe Weise auch von XXI, 1. Refenite. 81 ganz frischen Präparaten abpräparieren , meist ist das aber viel schwieriger. In den Lamellen sind reichlich elastische Fasern ein- gelagert , die sicli nicht blau färben , wie alle anderen Gewebsteile, sondern violett. — Was die Spinalganglien anlangt, so hat Verf. die Neunaugen mit 20prozentiger Salpetersäure behandelt und unter der Lupe die Ganglien isoliert (auf einem breiten Objektträger). Das Ganglion zerfällt in einzelne Fasern und Zellen. Will man die Lage der Ganglien zu dem Rückenmarke kennen lernen, so sind Quer- schnitte durch das Rückenmark und das Ganglion vorzuziehen. — In bezug auf die Glia gibt Verf. an , daß die nach der GoLGischen Silbermethode gefärbten Präparate ganz vorzügliche scharfe Bilder geben. Behandlung mit Hämatoxylin vervollständigt jedoch wesent- lich die mit der Silberbehandlung erhaltenen Resultate. Scliiefferdecker {Bonn). Wanicke, Zur Darstellung der Achse nzylinderfibrillen in den markhaltigen Fasern des Zentralnerven- systems nebst Bemerkungen zur Histologie des A c h s e n z jr 1 i n d e r s im allgemeinen (Arch. f. Psychiatr. u. Nervenkrankh. Bd. XXXVIII, 1904, H. 1, p. 15G— 170 m. 1 Tfl.). Verf. bespricht die Frage, warum die Darstellung der Fibrillen nach der Methode von Mönkeberg und Bethe in den zentralen Teilen nicht ebensogut gelingt wie in den peripheren Nerven. Ein einfaches mechanisches Hindernis besteht für die Fasern des Gehirnes in ihrem geringen Durchmesser, Es ist nicht möglich, die Schnitte so dünn zu machen, daß von diesen feinsten Fasern gleichzeitig auf zwei Seiten der Markmantel entfernt werden könnte. Anders liegt die Sache bei den großkaliberigen Fasern des Rückenmarkes. Hier kommt erschwerend in Betracht der geschlängelte Verlauf der ein- zelnen Faser und der ungleichmäßige Durchmesser derselben, wodurch es schwierig wird, beim Schneiden die Achsenzylinder zweiseitig von Mark zu entblößen. Auch kann man diesen Mißstand nicht wie beim peripheren Nerven durch Streckung der Fasern beseitigen. Die Weichheit des Gewebes erschwert die Entnahme so dünner Stücke wie nötig, damit die Osmiumsäure genügend schnell eindringt. End- lich kommt dazu das schnellere Absterben des zentralen Achsen- zylinders. Als ein günstiges Objekt fand Verf. nun das Rückenmark kleiner Fische. Dieses ist so dünn, daß die Osmiumsäure genügend durchdringen kann und enthält außerdem hinreichend dicke Fasern. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 6 82 Referate. XXI, 1. Ein kleiner Fiscb wird schnell getötet, das Rückenmark schnell frei- gelegt und es werden Stücke von 2 bis 3 mm Länge in 0*25pro- zentige Osmiumsäiirelösung gelegt. Man muß das ganze Segment dann in Längsschnitte zerlegen, nm die dicken Nervenfasern zu erhalten. Es ist leicht, Schnittbänder von 2 bis 3 /^ zu erreichen. Schieferdecker [Bonn). Chenzinski, C. , Zur Frage über den Bau der Nerven- zellen [Was sind die N i s s l s c h e n K ö r p e r c h e n ? ] (Neurol. Zentralbl. Jahrg. XXII, 1903, No. 22, p. 1045 ^1050 m. 5 Figg.). Verf. hat gefunden , daß diejenigen Gebilde , welche auf den gewöhnlich untersuchten Querschnitten der Nervenzellen als die be- kannten NissLschen Körperchen erscheinen, auf Längsschnitten von Rückenraarkszellen oder an Isolationspräparaten als Fasern oder Streifen sich zeigen. Die Untersuchungen wurden am Menschen, Ochsen und Kaninchen ausgeführt. Das Rückenmark wurde in 5pro- zentiger Formollösung gehärtet, die Sclinitte wurden entweder mit dem Rasiermesser direkt vom Rückenmarke gemacht oder mittels des Mikrotoms von Präparaten , die in Paraffin eingebettet worden waren. Dicke der Schnitte 5 bis 10 /^. Zerzupfungspräparate wurden in folgender Weise hergestellt : Ein Stück aus der Halsanschwellung des frischen Rückenmarkes vom Rinde wurde in Öprozentiger Formol- lösung 2 Stunden gelassen , dann wurden in frontaler Richtung mit dem Rasiermesser Schnitte gemacht, die mit NissLscher Methylen- blaulösuug gefärbt wurden. Nach der P^ntfärbung in Anilinalkohol wurden die Schnitte in Bergamottöl mit Nadeln auf dem Objekt- träger zerzupft, das Bergamottöl mit Filtrierpapier entfernt und die Präparate in Kanadabalsam eingeschlossen. Schiefferdecker (Bonn). Miscli, J., Das Binnen netz der spinalen Ganglienzellen bei verschiedenen Wirbeltieren (Internat. Monats- schr. f. Anat. u. Physiol. Bd. XX, 1903, H. 10—12, p. 329—414 m. 13 Figg. u. 3 Tab.). Verf. bediente sich zur Darstellung des Binnennetzes der von KopscH beschriebenen Osmiumsäurebehandlung. In ein Glasröhrchen, welches einige Kubikzentimeter der 2prozentigen wässerigen Osmium- säurelösung enthält , bringt man wenige Spinalknoten , die längere Zeit in der Lösung verbleiben müssen. Von Zeit zu Zeit schüttelt man die Lösung ein wenig und prüft sie durch den Geruch auf ihren XXI, 1. Referate. 83 Gehalt an Osmiumsäure. Eventuell setzt man wenige Tropfen einer frischen Osmiumsäurelösung zu. Korsen hat seinerzeit angegeben, daß die ersten Spuren des schwarzgefärbten Binnennetzes schon am 5. Tage auftreten, am 8. Tage, eventuell ein paar Tage später, soll die Färbung- den Höhepunkt erreichen. Verf. konnte erst am 13. Tage die ersten Spuren entdecken und die besten Resultate erhielt er nach 19 bis 22 Tagen. Der Unterschied wird wohl darauf beruhen, daß Kopsch seine Versuche im heißesten Sommer anstellte, Verf. die seinigen im Winter. Dann Entwässerung der Präparate in langsam steigendem Alkohol (ein Begiiui mit 40prozentigem Alkohol ergab schlechtere Resultate als ein solcher mit TOprozentigem), Xylol, Xylol-Paraffiu , Paraffin. Das Material muß spätestens eine Stunde nach der Tötung dem Tiere entnommen sein, später läßt sich das Binuennetz nicht mehr darstellen. Diese Beobachtung, welche Verf. bisher außer bei Kopsch und Totsuka nirgends weder bei Golgi noch bei Holmgren erwähnt gefunden hat, macht es wahrscheinlich, daß das Binnennetz eine rein vitale Struktureigentümlichkeit der Zelle ist. Scltie/ferdeclrr (Boim). Regaild, Cl., et Policard, A. , Recherches sur la struc- ture du rein de quelques Ophidiens (Arch. d'Anat. microsc. t. VI, 1903, fasc. 2, 3, p. 191—282 av. 4 pl.). Die Verff. haben etwa fünfzig Schlangen beiderlei Geschlechts untersucht, welche zu den folgenden fünf Arten gehörten : Coronella austriaca (Laur.) , Tropidonotus natrix (L.) , Tropidonotus viperinus (Latr.) , Zamenis viridiflavus (Boie) var. sardus (Suckow) , Vipera aspis (Dum.). Die Tiere wurden durch Chloroform oder durch Ab- schneiden des Kopfes getötet zu verschiedenen Zeiten des Jahres, bald nach mehr oder weniger langem Hungern, bald nach Nahrungs- aufnahme. Man findet in der Struktur der Nieren bei den Schlangen Unterschiede , welche abhängen : von der Art , von dem Zustande der Geschlechtsfunktionen (so von den Jahreszeiten) , und von der Nahrungsaufnahme. — Die meisten Nieren wurden zuerst im leben- den Zustande nach Zerzupfuug in künstlichem Serum, mit oder ohne Zusatz von Neutralrot untersucht und dann zweitens nach Fixierung, in Schnitten mit verschiedenen Färbungen. 1) Untersuchung im frischen Zustande. Die Harnkanälchen der Schlangen wer- den miteinander durch fibrilläres Bindegewebe ohne elastische Fasern verbunden und lassen sich mit Hilfe von Nadeln leicht zerzupfen und auf größere Strecken isolieren. Die Niere von Zamenis ist 6 * 84 Referate. XXI, 1. etwas fester iiml für die Zerzupfiuig weniger günstig als die von Tropidonotus und Vipera. Man sclineidet ein kleines Stückchen der Niere aus, überträgt es auf den Objektträger in einige Tropfen einer 0"8prozentigen Kochsalzlösung und zerzupft es vorsichtig. Dann be- deckt man das Präparat mit einem Deckgläschen und umgibt es mit Paraffin. Die Zellen bleiben mehrere Stunden ohne wesentliche Änderungen erhalten. Man kann diese Präparate aufheben, wenn man der Kochsalzlösung eine lOprozentige Formollösung in 0*8pro- zentiger Kochsalzlösung substituiert, nach 24 Stunden Aufheben in Glyzerin. Mit dieser Methode erhält man zahlreiche und gute Re- sultate, noch vorteilhafter ist es aber , zu der 0"8prozentigen Koch- salzlösung 1 cc auf 100 einer kaltgesättigten Lösung von Neutralrot zuzufügen und die Zerzupfuiig hierin vorzunehmen. Das Neutralrot verändert die Zellen absolut nicht und läßt bestimmte Sekretions- produkte, die noch in dem Protoplasma enthalten sind, ausgezeichnet hervortreten. 2) Zur Fixierung wurden verwendet: Die Flüssigkeit von Tellyesniczky (doppeltchromsaures Kalium und Essig- säure), die von Bouin (Formol, Pikrinsäure und Essigsäure), die von Lenhossek (Sublimat, Alkohol, Essigsäure), die von Zenker und von Flemming. Keine von diesen ist vollkommen, jede hat ihre Vor- teile. Eingebettet wurde in Paraffin. Gefärbt wurde mit sehr ver- schiedeneu Methoden. Die allgemeinste , die man immer zuerst an- wenden soll, war die mit Alaunhämatein und Eosin. Von Methoden, welche spezifische Resultate geben, werden erwähnt: Alauu-IIämatein und Safranin (immer nach Chromfixierung), Alaun-Hämatein und Muzi- karmin (besonders nach Fixierung mit der Flüssigkeit von Lenhossek), Eisenhämatoxylin (mit verschiedenen Varianten in bezug auf die Beizung mit dem Eisenalaun), allein oder verbunden mit einer Plasma- färbung, das Chrom-Kupfer-Hämatoxylin von Weigert, Thionin etc. Wegen des genaueren über die Anwendung dieser Methoden wird auf das Original verwiesen. Ferner wurde auch Imprägnation mit Silber angewendet, entweder nach einer Injektion in die Blutgefäße von der Aorta aus mit der Mischung von Renaut (3 Volumenteile einer Mischung von 75 Volumenteilen einer gesättigten wässerigen Pikrinsäurelösung und von 25 Volumenteilen einer eiuprozentigen wässerigen Osmiumsäurelösung, und ein Volumenteil einer eiupro- zentigen wässerigen Lösung von salpetersaurem Silber) oder indem man die Harnröhrcheu in einer wässerigen eiuprozentigen Lösung von Protargol zerzupfte. Schiefferdecker (Borm). XXI, 1. Referate. ^ 85 Kallius, E., Sehorgan (Ergebn. d. Anat. u. Entwickhmgsgesch. Bd. XII, 1902, Wiesbaden 1903, p. 348—444 m. 12 Figg.). In seinem Berichte über eine größere Anzahl neuerer Arbeiten über das Auge bespricht Verf. auch kurz die neuerdings angegebenen mikroskopisch-technischen Methoden zur Untersuchung des Auges. Die MüLLERsche Flüssigkeit und ihre Verbindting mit Formol eignen sich nicht dazu, den Bulbus so zu konservieren, daß die Retina ganz glatt und faltenlos anliegt. Verf. kann Greeff beistimmen darin, daß wir überhaupt noch kein Härtungsmittel besitzen, das in bezug auf die Fixierung der Retina in ihrer Lage Vollkommenes leistet. Für viele Tieraugen ist es nach den Erfahrungen des Verf. sehr gut, den Bulbus vorsichtig mit sehr scharfem Messer zu er- öffnen und nach Entfernung des Glaskörpers oder mit seiner Er- haltung die Bulbushälfte zu konservieren. Für viele Fälle ist dieses sogar die einzige Methode, die Lage der Retina möglichst wenig zu stören. Unter den Flüssigkeiten, die für den Bulbus in Frage kommen, stehen obenan die Osmiumsäure und die Sublimatgemische. Greeff gibt der reinen Osmiumsäure den Vorzug, namentlich, was die gute Konservierung der Sehepithelien betrifft. ZtJRN wählte hauptsächlich die mit Sublimat heiß gesättigte O'Gprozentige Kochsalzlösung mit 1 bis l^/o Prozent Eisessigzusatz deswegen, weil gewisse Färbungen danach besonders gut gelangen. Der Eisessigzusatz ist unbedingt notwendig, weil sonst die Gewebe viel zu sehr schrumpfen. Sehr gute Dienste leistet auch die Fixierung mit Salpetersäure und Nach- behandlung mit Kalium bichromicura. Auch die Mann scheu Mischungen von Sublimat und Formol und Sublimat-Pikrinsäure und Formol leisten Vorzügliches. Die Zenker sehe Flüssigkeit ist gerade bei Härtungen des ganzen Bulbus brauchbar, denn man kann diesen nicht immer zerschneiden. Verf. verweist dann auf eine technische Notiz von L. Müller zur Depigmentierung von mikroskopischen Schnitten , die ja gerade beim Auge oft geübt wird. MtJLLER benutzt den bei der Elektrolyse des Wassers frei werdenden Sauerstoff zur Bleichung des Pigmentes. An den negativen Pol eines zur Elektrolyse ge- eigneten Stromes kommt der Streifen aus Platinblech , an den posi- tiven Pol wird ein flaches Säckchen aus Platindrahtgeflecht ange- schlossen ; dieses Säckchen taucht in eine Porzellanschale mit Wasser, dem Kochsalzlösung zugefügt ist; in das Säckchen kommen die von Alkohol befreiten Schnitte , die sehr bald vollständig depigmentiert sind. Läßt man die Schnitte zu lange dem Sauerstoffe ausgesetzt, dann zerfallen sie. Schiefferdecker {Bonn). 86 Referate. XXL 1. C Mikrooi^ganisnien, Koch, A., Jahresbericht über die Fortschritte in der Lehre von den Gärungsorganismen. XII. Jahrg., 1901. Leipzig (S. Hirzel) 1904. 16 M. Der Inhalt des vortrefflichen Jahresberichtes streift in seinem zweiten Kapitel (Arbeitsverfahren, Apparate etc.) vielfach die Inter- essenkreise unserer Zeitschrift. Die auf Färbung und Fixierung der Bakterien sich beziehenden Arbeiten sind in ihr seinerzeit fast sämt- lich besprochen worden. Wir verweisen noch auf die Referate über Mac Conkey (Geißelfärbung , Thompson Yates Labor, report vol. III), B. Smith (Geißelfärbung, Brit. med. Journ. 1901), Savage (Neutralrot bei der bakteriologischen Wasserprüfung, Journ. of Hyg. vol. I) , Kruis (Mikrophotographie von Hefe , Jahrb. f. Photogr. u. Reproduktionstechnik) u, a. Küster {Halle a. S.). Petkowitscli , Beitrag zur Frage des diagnostischen Wertes einiger Nährböden für die Typhus- diagnose (Zentralbl. f. ßakteriol. Abteil. 1, Orig. Bd. XXXVI, 1904, No. 2, p. 304). Nach einem kurzen historischen Überblick über elektive Nähr- böden zur praktischen Typhusdiagnose, auf welchen das Bacterium coli durch seine stärkere Säurebildung eine von den ge- ring Säure, beziehungsweise Alkali bildenden Typhusbazillen difterente Farbe in seinen Kolonien bildet, teilt Verf. seine Resultate mit, die er mit dem von Drigalski- CoNRADischen Lakmus-Nutrose- Milch zucker-Agar und dem Endo sehen Fuchsin -Agar erhalten hat, wenn er Gemische von Coli-, Typhus- und mehreren zwischen beiden Bakteriengruppen liegenden Paratyphus- beziehungs- weise Paracolibazillen ausstrich. Wenn auch bei dem von Drigalski- CoNRADi sehen Nährboden durch den Zusatz von Kristallviolett eine gewisse Anzahl saprophytischer Begleitbakterien, besonders auch ver- unreinigende Bakterien aus der Luft ausgeschaltet werden — was mmerhin eine Erleichterung bedeutet — , so wachsen doch wieder andere Bakterienarten , z. B. Paratyphusbazillen , Fleischvergiftungs- bakterien etc. sehr typhusähnlich. Auf dem Endo sehen Nährboden XXI, 1. Referate. 87 lassen sich diese jedoch durch ihren differenten Farbenton von Typhus- kolonien , welche ganz farblos wachsen , unterscheiden. Auch der Choleravibrio wächst auf dem vox Drigalski-Conradi sehen Agar blau, wie der Typhusbacillus , auf „Endo" dagegen rot, wie der Colibacillus. Nach den Untersuchungen des Verf. scheint also der P^NDOSche Fuchsin-Agar ein feineres Reagens für Typhus zu sein, als der Lakmusnährboden, vor dem er auch noch seine einfachere Herstellungsweise voraus hat. Verf. konnte bei einer Typhusepidemie, die wahrscheinlich durch einen mit Typhusabgängen verunreinigten Brunnen hervorgerufen war, zwar keine verifizierten Typhusbazillen, wohl aber Bakterien isolieren, die auf „von Drigalski-Conradi" und auf den übrigen bekannten Nährböden durchaus typhusähnlich wuchsen, sich aber auf „Endo" durch ihr nicht typisches Wachstum und durch die fehlende Agglu- tination von Typhusbazilleu unterscheiden ließen. Verf. empfiehlt deshalb hauptsächlich bei W a s s e r u n t e r - suchungen den „Endo sehen Nährboden", entweder mit demjVALLEx- ScHÜDER sehen Fällungs- oder dem Ficker-Hoffmann sehen Anreiche- rungsverfahren in Verbindung gebracht. W. Hoff mann {Berlin). Konrädi , Über die Lebensdauer pathogener Bakterien im Wasser (Zentralbl. f. Bakteriol. Abteil. 1, Orig. Bd. XXXVI, 1904, No. 2, p. 203). Nach einer Zusammenstellung der über diese epidemiologisch wichtige Frage bisher erschienenen Arbeiten, die in ihren Endresul- taten teilweise weit auseinander gehen, berichtet Verf. über seine eigenen langjährigen Versuche, die von gewisser Bedeutung sind. Zunächst beobachtete er das Verhalten des Milzb r an d b acillus im gewöhnlichen und sterilen Leitungswasser, und zwar sowohl bei Zimmertemperatur als auch im Thermostaten bei 37°, indem er einerseits Reinkulturen, anderseits M i 1 z s t ü c k c h e n eines an Milzbrand eingegangenen Kaninchens und M i 1 z b r a n d s p o r e n - seidenfäden in das Wasser brachte. Er konnte noch nach 264, beziehungsweise 258, bezw. 816 Tagen, bezw. 3^2 Jaliren Milz- brandbazillen im Wasser nachweisen, die trotz dieses langdauernden Verweilens in einem nährstoffarmen Medium an ihrer Virulenz nichts eingebüßt hatten. Auf dieselbe Weise untersuchte er die Lebensdauer des Staphy lococcus pyogen es aureus. In Leitungswasser bei 37° lebte diese Bakterienart 438 Tage, in ste- rilem Leitungswasser dagegen nur einen Monat, in destilliertem Wasser 88 Referate. XXI, 1. 438 Tage, in Leitungswasser bei Zimmertemperatur sogar 508 Tage. Von besonderem Interesse erscheint die Beobachtung, daß der Staphylo- coccus aureus im Wasser seine gelbe Farbe verlor, dieselbe beim Einimpfen in das Tier wieder gewann. Von größerem praktischem Wert ist das Verhalten des Typhus- bacillus im Wasser. Bei 37^ konnte ein Leitungswasser bei Ein- saat eines Milzstückchens einer Typhusleiche nach .542 Tagen, bei Einsaat von Reinkulturen nach 420 Tagen, bei Zimmertemperatur dagegen nach 499, beziehungsweise 490 Tagen nachgewiesen werden; bei Einsaat in destilliertes Wasser sind die Zahlen ungefähr die- selben. Auch bei den Typhusbazillen glaubt Verf. eine biologische Änderung, durch ihr Verweilen im Wasser verursacht, insofern beobachtet zu haben, als der Typhusstamm später in Bouillon "an der Oberfläche ein Häutchen bildete, was vor dem Versuch nicht konstatiert werden konnte — verschiedene Typhusstämme bilden jedoch von vornherein auch Häutchen. (Ref.) Dadurch, daß die pathogenen Bakterien in verschiedenen Wässern lange Zeit lebensfähig bleiben können, läßt sich das Auftauchen mancher Epidemien erklären. W. Hoffinann {Be7'lin). Cavini , Apparat für intravenöse Injektion größerer Mengen infektiöser Kultur (Zeutralbl. f. Bakteriol. Abteil. 1, Orig. Bd. XXXVI, 1904, No. 2, p. 318). Da zur Gewinnung möglichst hochwertiger Immunsera (Pest, Typhus, Milzbrand etc.) die intravenöse Einspritzung häufig mit leben- den , vollvirulenten Bakterieukulturen vorgenommen wird , ist eine Gefahr für die menschliche Umgebung nicht völlig ausgeschlossen. Verf. hat deswegen einen Apparat konstruiert , bei dessen Anwen- dung weder Tröpfchen der infektiösen Flüssigkeit verspritzt werden, noch Infektionsflüssigkeit bei einer plötzlichen Bewegung des Ver- suchstieres verschüttet werden kann. Der Apparat wird hauptsäch- lich bei Pferden im Institut zur Erforschung der Infektionskrankheiten in Bern angewendet und besteht in folgendem: Eine 250 bis 500 cc haltende Flasche mit weitem Hals kann durch einen Gummistöpsel mit dreifacher Durchbohrung verschlossen werden. Durch eine Öff- nung führt ein Glasrohr bis zum Boden der Flasche, das an seinem äußeren Ende durch einen Gummischlauch mit einer Troicartkanüle in Verbindung gesetzt werden kann, die zweite Öffnung nimmt einen kleinen Trichter auf und die dritte eine Glasröhre, nach außen mit Watte verschlossen , durch welche beim Füllen der Flasche durch XXI, 1. Referate. 89 den Trichter die Luft entweichen kann. Der ganze Apparat kann sterilisiert werden. Vor dem Gebrauch wird die Flasche durch den Trichter zur Hälfte mit physiologischer Kochsalzlösung gefüllt und damit durch Neigen die Luft aus dem Kautschukschlauch getrieben und dieser dann nahe der Kanüle mittels eines Quetschhahnes geschlossen. Die zu injizierende Bakterienkultur wird hierauf nach Entfernung des Stöpsels unmittelbar in das Glas gegossen. Diese Manipulation soll „vor- sichtig im Laboratorium ausgeführt werden", doch erscheint hierbei eine Infektionsgefahr für die Umgebung nicht ausgeschlossen (Ref.). Der weitere Gang der Einspritzung ist der gewölinliche. Die Schnelligkeit des Ausfließens der zu injizierenden Flüssigkeit kann durch Heben und Senken der Flasche reguliert werden. W. Ho ff mann {Berlin). Jacque , Le procede de Cambier pour la recherche du bacille typhique (Zentralbl. f. Bakteriol. Abteil. 1, Orig. Bd. XXXVI, 1904, No. 2, p. 300). Verf. hat die von Cambier vom Institut von Montsouris — Paris angegebene Methode, Typhusbazillen dadurch nachzuweisen , daß sie in einer bestimmten Peptonlösung mit einem gewissen Seesalzgehalt durch ein CnAMBERLAND-Filter schneller hindurchgehen als B. coli, nachgeprüft und ist wie Kirsch-^ zu dem Resultat gekommen, daß sie praktisch nicht die ihr zugeschriebene Bedeutung habe, da auch andere Bakterien — auch Coli — ebensoschnell durch die Wandung filtrierten. Ebenso ungünstige Resultate hätten Biffi und Lesieur gehabt. W. Hoffmmm {Berlin). Emmeiiing, Ein einfacher und zuverlässiger Anae- robenap parat (Hygien. Rundsch. Bd. XIV, 1904, No. 10, p. 452). Verf. empfiehlt auf Grund guter Resultate einen Apparat für anaerobe Bakterienkultur , der in der Hauptsache in folgendem be- steht. Ein Glaszylinder von 25 cm Höhe und 5 cm Weite besitzt an seinem oberen Ende eine kropfartige Erweiterung, in welche ein guter mit Vaselin bestrichener Guramipfropfen paßt ; ferner ist in die obere Hälfte des Zylinders ein rechtwinkliges Rohr eingeschmolzen, welches mittels eines dickwandigen Gummischlauches mit einer Saug- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 369. 90 Referate. XXI, 1. flasche, die an eine Luftpumpe angeschlossen werden kann , in Ver- bindung gebracht ist. Zu Beginn des Versuchs gießt man in den Glaszylinder ca. 10 cc Kalilauge , setzt ein mit der entsprechenden Kultur versehenes Reagenzglas auf ein im unteren Teil des Glas- zylinders befindliches Bänkchen, verschließt mit dem Gummipfropfen und saugt mit der Luftpumpe die Luft aus dem Zylinder und der mit Pyrogallollösung gefüllten Saugflasche. Nach genügend großem Vakuum unterbricht man die Verbindung zwischen Zylinder und Saugflasche durch einen Quetschhahn und hebt die Verbindung mit der Luftpumpe auf. Die Pyrogallollösung steigt dann zunächst bis zu dem Quetschhahn und nach vorsichtigem Öff'nen desselben lang- sam in den Zylinder, wobei der Zutritt von Luftblasen zu vermeiden ist. Nach einiger Zeit schließt man den Quetschhahn und der Sauer- stoff ist durch die mit der Kalilauge sich mischende Pyrogalluslösung absorbiert. W. Hoffuiann {Berlin). Hirschl)ruch u. Schwer, Bemerkungen über feste Nähr- böden zum Zwecke der Choleradiagnose (Zen- tralbl. f. Bakteriol. Abteil. 1, Orig. Bd. XXXVI, 1904, No. 1, p. 144). Nachdem Verff. sich über die Bedeutung der Reaktion eines Nährbodens in bezug auf das Temperaturoptimum der einzelnen Bakterienarten , speziell des Vibrio cholerae asiaticae an der Hand früherer Veröffentlichungen ausgesprochen , gehen sie zu Versuchen über, die sie zur Bestimmung des Reaktionsoptimum ihres neu empfohlenen Spezialagars für die Choleradiagnose ^ angestellt haben. Hierbei mußten sie einerseits Rücksicht darauf nehmen, daß Bacterium coli stark von den blauen Cholerakolonien abstechende rote Kolonien bildete , anderseits aber auch die Choleraerreger gute Wachstumsbedingungen fanden. Diesen Grad der Alkaleszenz erreichten sie, wenn ein Zusatz von 0'09 Prozent kristallisierter Soda zum neutralen Nährboden erfolgte, ein Punkt, bei dem rotes Lakmus- papier deutlich gebläut und blaues Lakmuspapier noch etwas blauer gefärbt wird. Eine besondere Bedeutung besitzt ferner der „Spezialagar" den üblichen festen Nährböden gegenüber , die zur Choleradiagnose ver- wendet werden können. Die Gelatineplatte hat gegen früher an Wert eingebüßt , da ein Abstechen der verdächtigen Cholera- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 483. XXI, 1. Referate. 91 kolonien behufs Agglutination mit Cliolerasernm untunlich ist und der gewöhnliche Agar läßt die Cholerakolonien an ihrer eigen- artigen Transparenz wohl erkennen, doch treten zwischen den Kolo- nien der echten Choleravibrionen und anderen choleraähnlichen Vibrionen diagnostisch verwertbare Unterschiede nicht zutage ; nur die Probeagglutination kann hier entscheiden. Der „Spezialagar" hat nun den Vorteil , daß alle Colibakterien sich durch ihre rote Farbe deutlich unterscheiden lassen, während andere Begleitbakterien durch den Kristallviolettzusatz zurückgehalten werden ; ferner wachsen die Cholerakolonieu in denselben Größenverhältnissen , wie auf ge- wöhnlichem Agar. Statt der Lakmuslösung nach Kubel-Tiemann, welche leicht verdirbt, benutzten VerfF. den Farbstoff des Lakmus, das Azolithmin, von welchem 3 g im färberischen Verhalten genau einem Liter Kubel-Tiemann scher Lösung entsprechen. Auf eine schnelle Herstellungsweise ihres Spezialagars haben die Verff. besonders Rücksicht genommen und empfehlen folgende Zubereitung : 12 bis 13 Röhrchen fertigen Bouillonagars {l^U Prozent Agar) werden im Wasserbad verflüssigt; l^/o g Milchzucker werden in ein steriles 100 cc-Kölbchen geschüttet und der flüssige Agar darauf gegossen, bis durch Vergleich mit einem zweiten gleichartigen Kölb- chen, das 100 cc enthält, nach Augenmaß (! Ref.) 100 cc im Kölbchen sind. Der Kolben wird dann ins Wasserbad gestellt, wo er ^/^ Stunde im siedenden Wasser bleibt. Inzwischen sind in einem anderen Wasser- bad 100 cc destilliertes Wasser ^/^ Stunde gekocht worden; in diesem löst man dann 0"1 g Kristallviolett auf. Der Milchzuckeragar wird mit einer schwachen, mehrmals aufgekochten Sodalösung bis zu dem oben erwähnten Grade alkalisiert, eine gekochte Lösung von 0'04 g Azolithmin in wenig Wasser und 1 cc Kristallviolettlösung werden hinzugefügt. Dann wird der Agar in PETRi-Schalen gegossen und nach bekannten Grundsätzen weiter verfahren. W. Hoff mann {Berlin). Bodiu et Castex , A p p a r e i 1 p o u r 1 ' a g i t a t i o n c o n t i n u e des cultures (Annales de Tlnstitut Pasteur t. XVIII, 1904, p. 264). Zur Erlangung von gleichmäßig durchgeschüttelten Bakterien- kulturen , wie sie besonders zur Anstellung der Serodiagnostik bei der Tuberkulose notwendig sind , waren bisher meist umständliche und kostspielige Apparate im Gebrauch, Die Verff. empfehlen einen 92 Referate. XXI, 1. Apparat, dessen Ziisammensetziing sie eingehend schildern nnd durcli leicht verständliche Abbildungen erläutern, welcher gestattet, auch in Reagenzgläsern Schüttelkulturen anzulegen. Der Apparat kann mit einer kleinen Wasserturbine — 400 Liter in einer Stunde — oder einem elektrischen Motor von 2 bis 3 Kilogrammeter getrieben werden. Die Platte, auf der 12 Reagenzgläser Platz finden können, ist so geneigt, daß die Kultnrtiüssigkeit mit dem Verschluß nicht in Verbindung treten kann , allerdings dürfen die Reagenzgläser nur bis zum Drittel ihrer Höhe angefüllt sein. W. Hoffmann {Berlin). Weigert, Über das Bakterien Wachstum auf wasserarmen Nährböden (Zentralbl. f. Bakteriol. Abteil. 1, Orig.Bd. XXXVI, 1904, No. 1, p. 112). Verf. sucht durch zahlreiche Versuche zur Klärung der Frage beizutragen , warum gehen die Bakterien im menschlichen Körper nach mehr oder weniger langer Zeit zugrunde , indem er entgegen der jetzt herrschenden Ansicht, daß sich der Körper durch Produktion eigenartiger eiweißartiger Schutzkräfte — Antikörper — der Über- schwemmung mit Bakterien erwehre , die Zusammensetzung der menschlichen Körpersäfte ihrer chemischen Natur nach als Nähr- böden für bakterielles Wachstum zum Ausgangspunkt seiner Unter- suchungen machte. Die Bakterien sind in bezug auf ihre Fort- entwicklung in hohem Maße abhängig von den Nährböden, d. h. von der ihnen zusagenden Mischung von stickstoffhaltigen Körpern, Salzen und Wasser. Besitzt der Nährboden zu wenig oder zu viel, eiweiß- artige Stoffe, oder enthält er die Salze in ungünstiger Art und Menge und das Wasser in zu großer oder zu minimaler Menge , so fallen die auf ihn gebrachten Spaltpilze nach bestimmten biochemischen Gesetzen durch Plasmolyse oder Plasmoptyse der Wachstumshemmung oder gänzlich der Vernichtung anheim. Verf. bereitete sich seine entsprechenden Nährböden nach fol- gender Methode: In 100 g Fleischwasser mit einem Gehalt von 1 Prozent Pepton und 0"5 Prozent Kochsalz wurden 10, 30, 50, 100 g Gelatine im Wasserbad gelöst, um Nährböden mit verschieden hohem Trockengehalt herzustellen, was durch Trocknung bei 90 bis 100*^ im Wärmeschrank und Wägung nach 3 Tagen bis zur Gewichts- konstanz noch genauer festgestellt wurde. Verf. prüfte B. coli, typhi, pyocyaneus , Proteus vulgaris , Staphylococcus pyogenes aureus und XXT, 1. Referate. 93 albus und kam zu dem Resultat, daß sie in einem Nährboden bis zu einem Trockengehalt von 31*9 Prozent = 68"1 Prozent Wasser- gehalt in allen Schichten gut gedeihen, bei einem Trockengehalt von 33 bis zu 41 Prozent nur Oberflächenwachstum zeigen, bezw. gar nicht mehr fortkommen, d.h. also bei einem Wassergehalt von 67 bis 59 Prozent. Nun beträgt der Wassergehalt des gesunden, er- wachsenen Menschen nach den fast übereinstimmenden Ergebnissen verschiedener Autoren ca. 63 bis 67 Prozent, beim Neugeborenen ca. 71 bis 74 Prozent. Aus diesen Resultaten zielit Verf. die Schlüsse: 1) Der mittlere Wassergehalt des gesunden, erwachsenen Men- schen entspricht dem Wassergehalt solcher künstlicher Nährböden, in denen Bakterien nicht mehr fortkommen können. 2) In künstlichen Nährböden, deren Wassergehalt größer ist als der mittlere Wassergehalt des gesunden Menschen, ist eine allmählich sich steigernde Wachstumshemmung für Bakterien zu konstatieren; diese ist um so größer, je geringer der Wassergehalt der Nähr- böden ist. W. Hoffmann (Berlm). Pfuhl , E. , I*". r g e b n i s s e einer erneuten Prüfung einiger Kieselgur- und Porzellanfilter auf Keimdichtig- keit (Festschr. z. sechzigsten Geburtstage von Robert Koch. Verlag von Gustav Fischer, Jena 1903, p. 75). Das Bestreben, ein bakterienfreies Filtrat zu erhalten, scheitert öfters daran, daß selbst auch neu bezogene Bakterienfilter manchmal keine ausgesprochene Keimdiclitigkeit besitzen. Verf. ist dieser Frage experimentell näher getreten und konnte dabei die Beobachtung machen, daß bei durchlässigen Filtern nicht kontinuierlich die durch- gefilterten Bakterien sich nachweisen lassen, sondern daß in einzelnen, besonders aufgefangenen Mengen des Filtrats sich Bakterien nicht nachweisen ließen. Er stellt hiernach die Forderung auf, bei der Prüfung der Filter ganz systematisch zu verfahren und gleich vom Beginn der Filtration au das Filtrat Liter für Liter zu untersuchen. W. Hoffniann {Berlin). Otto , R. , Über die Lebensdauer und Infektiosität der P e s t b a z i 1 1 e n in den Kadavern von P e s t r a 1 1 e n (Festschr. z. sechzigsten Geburtstage von Robert Koch. Verlag von Gustav Fischer, Jena 1903, p. 331). Mit Rücksicht darauf, daß auch in deutschen Häfen in den letzten Jahren mehrfach Schiffe angekommen sind, auf denen an Pest 94 Referate. XXI, 1. verendete Ratten oder selbst noch pestkranke Ratten beim Löschen der Ladung gefunden wurden , stellte Verf. an einer sehr großen Zahl von Ratten fest , nach wieviel Tagen eine an Pest verendete Ratte noch von gesunden Ratten augefressen wird und dadurch von neuem eine Pestinfektion hervorrufen kann. Außerdem suchte Verf. die natürlichen Verhältnisse in den Lagerräumen eines Dampfers nachzuahmen , wo die Übertragung der Pest unter den Ratten nicht nur durch Anfressen der an Pest gestorbenen oder an Pest kranken Ratten, als auch dadurch geschieht, daß gesunde Ratten Getreide, Früchte etc. annagen, die mit Koth bezw. ürin pestkranker Ratten verunreinigt waren. Im allgemeinen konnte Verf. betreffs der Lebens- dauer der Pestbazillen die Angaben anderer Autoren bestätigen, wonach der Pestbazillus verhältnismäßig schnell außerhalb des Tier- körpers zugrunde geht (Licht, Austrocknung etc.), daß er sich aber in Pestkadavern sehr lange — 2 bis 3 Monate — virulent hält. Jedoch ist die Gefahr hierbei nicht sehr groß , da stark angefaulte Kadaver von den Ratten nicht angefressen werden und ferner zur Erzeugung der „Freßpest" größere Mengen infektiösen Materials not- wendig sind, der Pestbazillus aber im Laufe der Zeit im Kampfe mit den Saprophyten allmählich zugrunde geht. Die Methodik bei der Anstellung der Versuche sucht die natürlichen Verhältnisse möglichst getreu nachzuahmen (Getreidekisten, Temperatur etc.). W. Ho ff mann {Berlin). D, Botanisches, Meyer, A. , Orientierende Untersuchungen über Ver- breitung, Morphologie und Chemie des Volu- tins (Botan. Zeitg. Bd. LXII, 1904, H. 7, p. 113). Die in den Bakterienzellen enthaltenen Körnchen, welche Grimme eingehend untersucht hat, bestehen zum Teil aus einem eigenartigen Reservestoff, welchen Verf. als Volutin bezeichnet. Die vorliegende Arbeit bringt zunächst die Beschreibung verschiedener Reaktionen und Methoden , durch welche man in Bakterienzellen , sowie in den Zellen der verschiedensten höheren Pflanzen die Volutiukörner sicht- bar macheu kann. — 1) Methylenblau-Schwefelsäure. — Verf. mischt ein Vol. gesättigter Lösung von Ehrlich s Methylenblau (Grübler) mit XXI, 1. Referate. 95 10 Vol. Wasser; die lebenden oder toten Zellen werden unter dem Deckglas mit einer reichlichen Menge der Farbstofflösung versehen. Nachdem sie intensive Färbung angenommen haben , wird das Me- thylenblau abgesaugt und die Schwefelsäure seitlich zugesetzt. In lebenden Zellen färbt sich das Volutin mit der genannten Lösung nur langsam („Lebendfärbung") , in absterbenden Zellen färben sich die Körnchen schnell und intensiv („Krankfärbung"). Die Volutin- massen nehmen oft einen rötlicheren Ton an, als ihn die Farblösung hat, — der Unterschied ist auf das im Methylenblau enthaltene Methylenazur zurückzuführen , welch letzteres vom Volutin besonders energisch aufgenommen wird. Die Zellenkerne färben sich mit dem Methylenblau oft schneller als die Volutinmassen, aber minder intensiv als diese. Der Zusatz von 1 Prozent Schwefelsäure bewirkt Ent- erbung der meisten gefärbten Zellanteile : nur die Volutinkörner bleiben blau. Nur selten bleiben die Nukleolen noch hellblau ge- färbt, noch seltener der Zellenkern ; mit Sicherheit werden alle diese Anteile entfärbt, wenn man das Präparat ganz kurze Zeit mit öprozentiger Scliwefelsäure behandelt. Li manchen Fällen ist es vorteilhaft , die Objekte vor der Färbung zu fixieren , wozu sieh eine 10 Minuten lang währende Behandlung mit Formol empfiehlt. (Formol-Methylenblau-Schwefelsäuremethode.) — Um Verbindungen wie Gerbsäure, die sich mit Methylenblau färben, von vornherein auszuschließen, kann man die Objekte vor Zusatz der Farbstottlösung mit Alkohol ausziehen. 2) M e t h y 1 e n b 1 a u - J d j d k a 1 i u m - N a t r i u m k a r b n a t. — Färbt man eine lebendige oder mit Formol (s. 0.) fixierte Zelle wie vorhin mit Methylenblau, und setzt man nach dem Absaugen der Farbstotriösung Jodjodkalium hinzu , so färbt sich das Proto- plasma gelb bis braun, die Volutinmassen schwärzlich. Entfernt man das Jodjodkalium und setzt 5prozentige Sodalösung zu , so ver- schwindet die Färbung der Volutinmassen nicht, vielmehr sieht man sie nur langsam verblassen, bis zuletzt nur noch eine schwächer licht- brechende Stelle im Plasma übrig bleibt : öprozentige Sodalösung löst das Volutin nach Zersetzung der Farbstoffverbindung schon nach 5 Minuten. Im Gegensatz zu dem Volutin werden bei dieser Methode viele andere Bestandteile der Zelle schnell entfärbt. Störend ist das Verhalten der Stärke, die sich mehr oder minder stark färbt; auch die Pyrenoide färben sich blau. 3) Karbolfuchsin - Seh we feisäure (NEissERSche Fär- bung). — Färbt man ein angetrocknetes Präparat kräftig mit Karliol- 96 Referate. XXI, 1. fuchsin, eutfernt dann den Farbüberschuß durcli Abwaschen mit Wasser, und setzt einprozentige Schwefelsäure hinzu , so entfärben sicli die meisten Zellenanteile mehr und mehr, während die Volutin- massen in eigenartigem P\arbton fast schwarz hervortreten. In 5pro- zentiger Schwefelsäure schwindet auch ihre Farbe, und an Stelle des Volutins bleibt eine Vakuole zurück. 4) Lösung in Wasser, P^au de Javelle und Chloral- h y d r a t. — In siedendem Wasser lösen sich die Volutinmassen spätestens nach 5 Minuten ; sind die Objekte 30 Minuten oder länger mit Formol fixiert worden, so tritt keine Lösung mehr ein. Weiterhin lösen sich die Volutinmassen in frisch bereiteter Eau de Javelle. — In Chloralhydrat löst sich das Volutin bei 5 Minuten lang währender Einwirkung nicht; erst bei längerer Behandlung schwindet es. 5) M e t h y 1 e n b I a u - N a t r i u m k a r b n a t. — Färljt man Vo- liitiu mit Methylenblau und entfärbt es mit öprozentigem Natrium- karbonat, so tritt, wenn man sofort neues Methylenblau zusetzt, von neuem Färbung ein. 6) Weitere Reaktionen wurden ausgeführt mit verschie- denen Eiweißreagentien. Millons Reagenz , das nach folgendem Rezept zusammengesetzt wurde : Quecksilber 10 g Salpetersäure (spez. Gew. 1-45) 10 cc Wasser 20 „ färbt in der Kälte die Proteinkörner von Ricinus rötlich braun, die Volutinmassen werden nicht gefärbt. Färbt man diese mit Me- thylenblau und setzt dann das MiLLONSche Reagenz hinzu, so löst sich das Volutin bald. Auch bei Prüfung anderer Eiweißreagentien zeigten die Volutinmassen anderes Verhalten als die Eiweißkörner. — Neben anderen wurden FEHLiNGSche Lösung, Vanillin-Salzsäure, Jodjodkalium, Chlorzinkjod, Alkohol, verschiedene Säuren und Alkalien angewandt. — Trypsinlösung greift die Volutinkörner nicht schneller an als Wasser. Zur Färbung der Volutinkörner lassen sich benutzen Methylviolett, Bismarckbraun , Safranin; Delafields Hämatoxylin gegenüber verhalten sich die Körner formolfixierter Zellen verschie- den. Eosin , Nigrosin , Boraxkarmin und Kernschwarz färben nicht. Rutheniumrot (0"02 g in 10 cc heißem Wasser gelöst) färbt die Volutinkörner vielfach. Auf Grund seiner Reaktionen kommt Verf. zu dem Resultat, daß das Volutin eine Nuklein verbin düng sei. — XXI, 1. Referate. 97 Die Färbung vieler Objekte mit ^lethylenblau machte mit ge- wissen Zellbestandteilen bekannt, die mit dem Volutin nicht identisch und sicher keine Gerbstoffe sind. In Achlya fand Verf. Körner, die mit Methylenblau sich färben, aufquellen und sich anscheinend zuletzt in eine leichtflüssige , tiefblaue Lösung verwandeln. V^erf. nennt sie ^-Körner. In einprozentiger Schwefelsäure verschwinden sie sofort. Nach Härtung in Formol färben sie sich in Methylenblau ohne zu verquellen. Bei Anwendung von Reaktion 2 verhalten sie sich wie Volutin. Weiterhin fand Verf. im Zellsaft von Mougeotia sp. einen Stoff, welcher in der lebenden Zelle mit Methylenblau tiefblaue, tropfen- förmige Ausscheidungen bildete ; Verf. nennt den Stoß" 1-Volutin. Die Ausscheidungen lösen sich ganz oder teilweise in einprocentiger Schwefelsäure zu einer anfangs tiefblau gefärbten Flüssigkeit. Bei Untersuchung einiger Objekte wurden die oben angeführten Methoden einigermaßen modifiziert. Für Pilzkeimlinge (Peni- cillium) benutzte Verf. ein Gemisch von 25 cc einprozentiger Karbol- säure und 6 Tropfen Fuchsinlösung ; erst nach Stunden erscheinen die Volutinkörner dunkler als die andern Zellbestandteile; hiernach Ent- färbung mit einprozentiger Schwefelsäure. Hämatoxylin nach Delafield kam in der Weise zur Anwendung, daß Verf. einen älteren Keimling auf dem Objektträger in öprozentige Karbolsäure legte und dann mit einem Gemisch von 5 cc Wasser und 10 Tropfen Hämatoxylin färbte. Bringt man Penicilliumpflanzen einen Tag in FLEiiMiNGSche Lösung, wäscht einen Tag mit Wasser und färbt 12 Stunden lang auf dem Objektträger mit sehr verdünnter Hämatoxylinlösung , so erscheinen die Kerne schwach blau gefärbt, das Volutiu ist gelöst. — Ruthenium- rot gibt sehr ungleichmäßige Resultate ; am meisten empfiehlt sich nach Verf. Vorbehandlung der Zellen mit schwefliger Säure , Aus- waschen mit Wasser und mehrstündiges Färben. Zur Klärung des Bildes kann man nachträglich noch einprozentige Schwefelsäure zusetzen. Bei Hefen (Saccharomyces ellipsoideus) färben sich die Volutin- körner nur schlecht mit Methylenblau allein 5 man setze zu 10 cc Farbstofflösung 20 Tropfen Natriumkarbonat („Krankfärbung''). Rührt man Hefezellen mit einem Tropfen Formol an und setzt nach 10 Mi- nuten doppelt soviel Methylenblaulösung hinzu , so erscheint nach weiteren 10 Minuten das Volutin meist intensiv gefärbt, während das Cytoplasma noch ungefärbt ist. — Die Volutinkörner sind identisch mit den von Giulliermond studierten metachromatischen Körnchen. ^ 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 247, 491. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 1. 98 Referate. XXI, 1. Bei Besprechung der Scliizophyceen geht Verf. auf die Resul- tate KoHLS^ ein und korrigiert einige seiner auf die Volutinkörner (Zentralkörner) sich beziehenden Angaben. Bei Untersuchung der Diatomeen wurde die Behandlung mit Eau de Javelle derart modifiziert , daß die Präparate zunächst mit Methylenblauschwefelsäure gefärbt wurden ; dann wurde Eau de Ja- velle zugesetzt, von neuem mit Methylenblau gefärbt und einprozen- tige Schwefelsäure zugesetzt; an Stelle der Volutinkörner sind dann nur noch Löcher wahrnehmbar. — Anstatt direkt mit Chloralhydrat zu behandeln , fixierte Verf. Syuedra mit Formol , wusch dieses in Methylenblau aus, setzte hiernach Chloralhydrat hinzu und tingierte nach völliger Entfärbung der Zellen mit Methylenblau. Bei Pinnu- laria radiosa finden sich Inhaltskörner , die zwischen gekreuzten Nikols sich als doppeltbrechend erweisen und Volutinsphärokristalle zu sein scheinen. Die Fukosankörner Hansteens in den Zellen der Braunalgen sind vielleicht zum Teil — soweit sie sich mit Methylviolett färben — mit den Volutinkörnern identisch. Bei Pilayella littoralis ver- mied Verf. eine allzu starke Methylenblaufärbung der Membranen dadurch , daß er die Objekte mehrere Stunden lang in stark ver- dünnter Farbstoff lösung liegen ließ ; bei Behandlung mit einprozen- tiger Schwefelsäure treten die Volutinkörner deutlich hervor, ohne .daß die Färbung der Membranen abnimmt. Bei AI eur onkörnern von Ricinus ließ sich bei Ausführung der oben genannten Reaktion 1 keine Blaufärbung nachweisen. Wer- den aber die mit absolutem Alkohol entölten Schnitte in reichlichem Methylenblau gründlich durchgefärbt, und läßt man unter dem Deck- glas seitlich wenig Schwefelsäure zufließen (1 : 10), so treten an einzelnen Stellen über den Globoiden dunkelblaue Tropfen auf. Setzt man statt der Schwefelsäure ein Gemisch von 9 cc einprozentiger Schwefelsäure und 1 cc gesättigter Methylenblaulösung in 95pro- zentigem Alkohol zu, so verwandeln sich die Globoide in blaue Kugeln. Denselben Prozeß noch deutlicher kann man an freiliegenden Glo- boiden von Schnitten verfolgen , die mit verdünnter Kalilauge vor- behandelt, mit Wasser gewaschen und mit Methylenblau gefärbt worden sind , und zu welchen mau eiuprozentige Schwefelsäure zu- gesetzt hat. Küster {Halle a. S.). 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 240. XXI, 1. Referate. 99 Reed , H. S. , A study of the enzyme-secreting cells in the seedlings of Zea Mays and Phoenix dacty- lifera (Ann. of Botan. vol. XVIII, 1904, p. 267). Beim Studinm der zarten, enzymabscheidenden Zellen der Keim- linge von Zea Mays und Phoenix dactylifera nahm Verf. Gelegenheit, verschiedene Fixierungsmittel durchzuprobieren und auf ihre Wirkung hin miteinander zu vergleichen. Gesättigte Lösung von Pikrinsäure in öOprozen- tigem Alkohol gab keine befriedigenden Resultate. Die Plasma- strukturen werden nicht gut fixiert; zur Untersuchung der Protein- körner ist das Mittel wohl geeignet. — Wässerige Pikrinsäure- Sublimatlösung wurde in der von Huie^ empfohlenen Modifikation des Mann sehen Verfahrens"-^ in Anwendung gebracht: ein Teil der gesättigten wässerigen Sublimatlösung und drei Teile gesättigte wäs- serige Pikriusäurelösung. Die Objekte verbleiben 12 bis 18 Stunden in der Mischung, werden dann mit Wasser ausgewaschen und in der üblichen Weise entwässert. Die Fixierungsflüssigkeit erwies sich als sehr brauchbar: der Zusatz von Pikrinsäure reicht aus, um die Eiweißkörner zu fixieren, durch das Sublimat wird das Protoplasma fixiert und die löslichen Eiweißstofi'e gefällt. In manchen Fällen sah Verf. in den Zellen des Scutellums von Zea Kontraktion des Inhalts auftreten. — Kleinenbergs Pikrinschwef elsäur e erwies sich als minder brauchbar, aber besser als Pikrinsäure allein. Chrom -Osmium-Essigsäure, die in der MoxTiERSchen Modifikation" zur Anwendung kam, ist nur zum Fixieren der Plasma- strukturen geeignet. — Iridium chlor id eise ssig nach folgen- dem Rezept hergestellt: Iridiumchloridlösung, einprozentige wässerige. . 25 cc Eisessig 75 „ wirkt ähnlich wie die nachfolgend genannte Lösung , ist ihr jedoch überlegen durch die bessere nachfolgende Färbung der Präparate. — Die WoRCESTERSche Flüssigkeit: Sublimatlösung, gesättigte wässerige .... 9(3 Teile Formalin 4 „ Essigsäure, lOprozentige 10 „ 5 Tropfen Ameisensäure pro Liter 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 126. -) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 479 ff. «) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 2<;9. 7* 100 Referate. XXI, 1. ließ Verf. 10 bis 20 Stunden auf seine Objekte einwirken; dann wurden sie in TOprozeutigem Alkohol, die gegen ein Prozent Jod- kaliura enthielt, ausgewaschen. Die Flüssigkeit gab gute Resultate, vermutlich wegen ihres hohen Sublimatgehaltes. Sie muß aber durch Auswaschen gründlich entfernt werden, da andernfalls die Färbung, besonders die mit basophilen Farbstoffen, ungünstig beeinflußt wird. — Gesättigte Sublimatlösung in absolutem Alkohol wurde zur Fixierung der Embryonen aus trockenen Samen angewandt: die Kerne wurden aber bei der nachfolgenden Färbung nicht so deutlich wie nach Anwendung der Worcester sehen Flüssigkeit. — Verf. resümiert seine Erfahrungen mit verschiedenen Fixierungs- flüssigkeiten dahin, daß diejenigen Gemische, welche reichlich Sublimat und wenig Säure enthalten , gut fixieren. Mischungen mit umge- kehrtem Verhältnis üben auf die Eiweißkörner einen zerstörenden Einfluß aus. Geringer Zusatz von Säure scheint die fixierende Wir- kung zu fördern, ohne die Eiweißkörner zu schädigen. — Beim Einbetten verfuhr Verf. nach Howards Methode^ und erzielte dabei gute Resultate. — Beim Färben wurden wiederum mit verschiedenen Substanzen und Gemischen Versuche angestellt. Pikro-Nigrosin erwies sich als sehr empfehlenswert; doch ist die Diflerenzierung der verschiedeneu Zeilinhaltsbestandteile uicht hinreichend deutlich. Kleinenbergs Häma- toxylin wirkt ähnlich und kommt besonders als Chromatinfarbstoft' in Betracht. Heidenhains Eisenhämatoxylin wurde nach Torreys Vor- schlagt mit Kongorot kombiniert. Minder gute Resultate wurden erzielt mit Zimmermann's Fuchsin-Jodgrün und Gram s Auilin-Gentiana- violett- Jod-Eosin. Eosin-Anilinblau gestattet eine Unterscheidung der Stärke- und Eiweißkörner ; ähnlich , aber minder vorteilhaft ist die Wirkung von Eosin-Gentianaviolett. Flemiongs Gemisch wirkt gut nach vorheriger Anwendung von Chrom-Osmium-Essigsäure, läßt aber bei Material, das mit sublimathaltigen Flüssigkeiten fixiert worden ist, im Stich. — Vorzugsweise machte Verf. von Manns Eosin- Toluidinblau-Methode ^ Gebrauch. Sie gestattet Zellwände und Zell- inhalt, auch die verschiedenartigen Einschlüsse in den Zellen gut zu differenzieren. Die Zellwände färben sich blau, die Stärkeköruer 1) Vgl. Journ. üf applied Micrusc. vol. VI, 1903, p. 2498. ^) Tourey, Cytological chan^-es accompanying the secretion of diastase (Bull. Torrey Botan. Club vol. XXIX, 1902, p. 421). 3) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 126. XXI, 1. Referate. 101 hIaugTÜn ; das Cytoplasina färbt sich im allgemeinen blau, in Zellen, welclie schon einige Zeit sezernierencl tätig sind, rot; die Zymogen- körner werden blau oder purpurn, das Chromatin rot-purpurn. Die besten Resultate wurden an Material erzielt, das mit Manns wässe- riger Pikrinsäure-Sublimatlösung fixiert worden war. — Zur Kontrolle der an fixiertem Material gewonnenen Ergebnisse wurde auch von der i n t r a v i t a 1 e n Färbung mit Methylenblau Gebrauch gemacht, — doch ohne daß von den so gewonnenen Prä- paraten besondere Aufschlüsse sich hätten gewinnen lassen. Küster {Halle a. 8.). Gothan, W. , Über die Präparation von Braunkohlen- hölzern zur mikroskopischen Untersuchung (Naturwiss. Wochenschr. , N. F., Bd. III, 1904, No. 36, p. 574). Zur mikroskopischen Untersuchung von Braunkohlenhölzern empfahl Schmalhausen, die Untersuchungsobjekte mehrere Tage in glyzerinhaltige Gummilösung zu legen und nach dem Trocknen mit dem Rasirmesser zu schneiden. Triebel ließ seine Hölzer mit Canada- balsam sich durchtränken und fertigte dann Dünnschliffe an. Die erste Methode genügt nicht mehr bei stark zerstörten Schnitten, und beide Verfahren sind recht zeitraubend. Verf. verfährt in der Weise, daß er das Ende des Holzstückchens, das untersucht werden soll, auf 2 bis 4 Minuten in absoluten Alkohol taucht und dann mit einem scharfen Messer eine gute Schnittfläche am Holz herstellt. Hierauf wird das Holz aus dem Alkohol direkt in geschmolzenes Bienenwachs übertragen , in dem es etwa 5 Minuten zu verbleiben hat ; dabei sorge man auch für gelindes Weitererwärmen , daß das Wachs vor- läufig noch flüssig bleibe. Hiernach läßt man das Holz in dem Wachs erkalten; erst wenn dieses etwa Butterkonsistenz angenommen hat, darf man es herausziehen. Nach völligem Erhärten des anhaftenden Wachses ist das Präparat schnittfertig. Die Schnitte „rollen sich zwar ziemlich stark , doch gleicht man dies beim Aufbewahren des Präparates aus. Man bringt die Schnitte auf dem Objektträger in Gly- zerin, dem man etwas Alkohol zusetzt; den Rest der Aufrollung beseitigt man durch Andrücken des Deckglases". Küster {Halle a. 8.). Guilliermond , A., Recher ch es sur la Karyokinese chez les Ascomycetes (Rev. gen. de Botan. t. XVI, 1904, p. 129). 102 Referate. XXI, 1. Zur Verwendung kamen dieselben mikrotechnischen Methoden, die schon bei den früheren Untersuchungen des Verf.^ sich be- währt hatten. — Im allgemeinen wurde mit FLEMMiNGScher Flüssigkeit fixiert; nur dann, wenn es sich um die Differenzierung der meta- chromatischen Körnchen handelte, wurde mit Pikroformol fixiert. — Als Färbemethoden erwiesen sich am brauchbarsten die Tinktionen mit Diamantfuchsin -Lichtgrün, Unnas Polychromblau, Safranin - Licht- grün und Eisenhämatoxylin-Lichtgrün. Küster {Halle a. S.). Klebahii, H., Die wirtswechselnden Rostpilze, Versuch einer Gesamtdarstellung ihrer biologischen Verhältnisse. Berlin (Gebr. Borntraeger) 1904. 447 pp. Herbariummaterial schneidet Verf. trocken; die Schnitte werden durch Alkohol von der Luft befreit, in Wasser und nötigen- falls mit Milchsäure , Eau de Javelle oder starker Chloralhydrat- lösung aufgeweicht. Die Milchsäure wurde dabei nach Lagerheims Vorschrift angewandt , indem die Objekte in der Säure auf dem Objektträger stark erhitzt wurden; verschrumpfte Gewebe quellen dabei auf, undurchsichtige Schnitte werden klar und die Keimporen lassen sich sichtbar machen. Eau de Javelle kam nur ausnahms- weise und mit Vorsicht zur Anwendung, etwa wenn Gewebe mit überwinterten Pilzen zu sehr gebräunt waren. Dauerpräparate von Sporen fertigt Verf. mit Glyzerin- gelatine an. Auf dem Objektträger breitet Verf. eine Schicht der Gelatine aus ; nach ihrem Erstarren werden auf die Mitte die Sporen gebracht, hiernach wird das Deckglas aufgelegt und die Gelatine durch vorsichtiges Erwärmen verflüssigt, die Sporen quellen dabei auf und bleiben bei der nötigen Vorsicht einigermaßen in der Mitte liegen. Küster {Halle a. S.). Iwaiiowski, D., Über die Mosaikkrankheit der Tabaks- pflanze (Zeitschr. f. Pflanzenkrankh. Bd. XIII, 1903, p. ^1). Um die Bakterien , welche nach Verf. die Mosaikkrankheit der Blätter von Nicotiana hervorrufen , in dem Gewebe der infizierten Pflanzen sichtbar zu machen, färbte Verf. seine Schnitte mit Löffler- schem Methylenblau bei einer bis 2 Minuten währenden Erhitzung. Die. Schnitte werden dann mit TOprozentigem Alkohol abgespült, mit 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XX, 1903, p. 245, 247, 491. XXI, 1. ■ Referate. 103 Anilin getrocknet und mit einer Lösung von Eosin in Nelkenöl nach- gefärbt. Die Kerne erscheinen dann intensiv blau gefärbt, Plasma, Piastiden und Zellmembranen rosa. Die Bakterien sind blau gefärbt, doch heller als die Zellkerne. Küster {Halle a. 8.). Tillard , J. , Contribution a l'etude cytologique des Zoochlorelles (Comptes Rend. de l'Acad. des Sc. de Paris t. CXXXVI, 1903, p. 1283). Zur Färbung der metachromatischen Körnchen in den Zoochlorellen benutzte Verf. Polychromblau, Methylenblau, Gentiana- violett und Hämatoxylin nach vorangegangener Fixierung mit Pikro- formol. Küster {Halle a. S.). ral)er, F. C. V. , Zur V er holzungs frage (Ber. d. deutsch, botan. Gesellsch. Bd. XXII, 1904, H. 2, p. 177). Allgemein bekannt sind die von Wiesner in die botanische Mikrotechnik eingeführten Holzstoffreaktionen mit Phlorogluzin und Salzsäure (1) und Anilinsulfat. Man vermeinte den „Holzstoff" damit nachweisen zu können ; doch hat besonders Czapek gezeigt, daß man mit „Holzstoff" eine ganze Gruppe von chemischen Individuen be- zeichne, und hat selbst ein solches, sein Hadromal isoliert, das selbst Wiesners Reaktionen gab. -^ Später fand Mäule eine Holzstoffreaktion mit KaUumpermanganat (2) , die auch bei Abwesenheit von Hadromal eintritt. Die Schnitte werden nach Mäule s Vorschlag in eine einprozentige Kaliumper- manganatlösung gelegt und nach oberflächlichem Auswaschen in ver- dünntes HCl gegeben ; hier werden sie 2 bis 3 Minuten aufgehellt. So behandelte Schnitte, über die Öffnung einer NHg-Fläche gehalten, lassen die verholzten Teile intensiv rot erscheinen ; Hadromal wird, wie Mäule zeigte, durch Kaliumpermanganat zerstört."' Verf. weist nun auf Fälle hin, in welchen Membranen, die sich nach Methode (1) färbten, nach Methode (2) farblos blieben und umgekehrt. Beispiele für das erste Verhalten : Hydathoden von Anamirta Cocculus , Bastfasern von Böhmeria platyphylla , für das entgegengesetzte die Sklerenchymfaseru von Anamirta Cocculus. Die Tatsache, das Methode (1) auch Korksubstanz, Methode (2) aber nur die Holzsubstanz färbt , läßt Faber der zweiten den Vorzug 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 119. •2) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 108. 104 Referate. XXI, 1. geben. Die Ilolzstofffrage ist also eigentlich erst wieder aufgerollt und nicht, wie man schon meinte, gelöst. Richter- {Prag). Radlkofer, L. , Über Tonerdekörper in Pflanzenzellen (Ber. d. deutsch, botan. Gesellsch. Bd. XXII, 1904, H. 4, p. 216). Bei einer anatomischen Untersuchung verscliiedener Symplocos- Arten zeigten sich in den Zellen der untersuchten Objekte Massen, die festen Fettkörpern oder großen Kieselsäuremassen nicht unähn- lich sahen und , wie für letztere zu erwarten war , das Glühen ver- trugen, ohne zerstört zu werden. Mit Kieselkörpern konnten sie andrerseits nicht identifiziert werden, da sie vor dem Glühen ohne Gipsbildung in Scliwefelsäure unter langsamem Abschmelzen löslich waren. Die Synonymik gab die Antwort auf die Frage nach der Herkunft der Kristallaggregate: Ein altes von Rumphius herrühren- des, etwa um 1690 entstandenes Synonym einer Symplocos-Art be- zeichnet einen auf Amboina einheimischen Baum als Alaunbaum. An der Stelle , an der Rumphius der Bezeichnung gedenkt , erwähnt er auch, daß die Rinde des Baumes an Stelle von Alaun beim Färben als Beize verwendet wird. Eine chemische Analyse auf Tonerde ergab ein überraschen- des Resultat: Die Hälfte der Blattasche war Tonerde. Mikrochemisch wurde mit Alizarin und Brasilin nach- gewiesen, daß sich die oben genannten n e b e n u n g e - färbt bleibenden Fettkörpern in den Zellen vorkom- menden I n h a 1 1 s k ö r p e r intensiv färbten. — Für die biologische Bedeutung solcher Einlagerungen fehlt jeder Anhalts- punkt. Richter [Prag). E. Miuercilog isch - Petrographlsches. LelimailU, 0., Flüssige Kristalle sowie Plastizität von Kristallen im allgemeinen, molekulare üm- la gerungen und Aggregatzustandsänderungen. Mit 483 Figg. im Text u. 39 Tfln. 4*^. Leipzig 1904, Engelmann. M. 20. In dem verdienstvollen Werk werden die ungemein zahlreichen mikroskopischen Beobachtungen des Verf. über die Eigenschaften XXI, 1. Referate. 105 flüssiger Kristalle , welche bisher in den Zeitschriften nur in ge- kürzter Form besclirieben werden konnten, in ilireni vollen Umfange wiedergegeben. Besonders wertvoll sind die vorzüglich reproduzierten Mikrophotogramme, welche nunmehr wohl einen jeden davon über- zeugen werden , daß es sich in den flüssigen Kristallen um eine neue, höchst eigenartige Körperklasse handelt, die sich nicht ohne weiteres durch die Annahme von suspendierten Teilchen oder der- gleichen erledigen läßt. So interessant aber das mikroskopisch-optische Studium dieser Substanzen auch ist , so wird man doch , um allgemeinere Gesichts- punkte zu gewinnen , die Untersuchung der Gesamtheit der physi- kalischen Eigenschaften dieser merkwürdigen Verbindungen nicht umgehen können. Obgleich nun vorliegendes Buch direkt experi- mentell nicht weit über die an dünnen Schichten ausführbaren Versuche hinausführt , so daß fast überall der Einwand gemacht werden kann, daß die kapillaren Kräfte au der Grenze von Präparat und Objektträger komplizierend wirken, so bietet es doch in weitestem Maße einen Ausblick auf die Probleme, mit welchen sich derartige weitere Untersuchungen beschäftigen müssen. Und zwar verdankt das Werk diesen großen heuristischen Wert, den es für jeden besitzt, der sich künftig mit Forschungen auf dem Gebiete der flüssigen Kristalle abgeben wird , den auf weitester Basis angelegten Ver- gleichen mit den analogen Eigenschaften der festen Kristalle sowie dem Studium der im gewissen Sinne eine Mittelstellung zwischen beiden Körperklassen einnehmenden fließenden Kristalle. Daher wird die Plastizität, Translationsfähigkeit, künstliche Zwillingsbildung, Deformierbarkeit der festen Körper im allgemeinen sowie unter steter Bezugnahme auf die fließenden und flüssigen Kristalle behandelt, auch über Mischkrystalle, Adsorptionen, Schichtkristalle, Homogenität und Raumgittertheorie finden sich interessante und stets durch die ungemein große Litteraturkeuntnis des Verf. bemerkenswerte Aus- führungen ; dasselbe gilt von denjenigen Kapiteln , welche den Ag- gregatzustandsänderungen, polymorphen Umwandlungen, der Elastizität, Unterkühlung und Amorphie gewidmet sind. — Nicht ganz einver- standen ist der Ref. damit , daß die Einteilung der festen Kristalle nach ihrer Symmetrie vom Verf. ohne weiteres auf flüssige Kristalle übertragen (und z. B. Azoxyphenetol der sphenoidischen Klasse des monoklinen Kristallsystems zugerechnet) wird. Es hätte zunächst bewiesen werden müssen, daß die Prämissen, auf denen diese Klassi- fikation beruht, auch für flüssige Kristalle erfüllt sind. 106 Referate. XXI, 1. Das Buch wird jedem sich für die Molekularlconstitution fester Körper interessierenden Leser, auch demjenigen, welcher dem Spezial- gebiet der flüssigen Kristalle ferner steht, eine Fülle von Anregungen bieten. E. Sommerfeldt {Tübingen). Heilieck, Fr., Die mikrophotographische Aufnahme von Dünnschliffen (Zentralbl. f. Mineral. 1903, p. 628 —635). Verf. teilt seine im wesentlichen mit den Angaben in den Lehr- büchern der Mikrophotographie übereinstimmenden Erfahrungen bei der Aufnahme von DünnschlitFen, und zwar besonders bei Anwendung polarisierten Lichtes mit. Jedoch wird ohne Grund die Exposition bei herausgenommenem Okular als der einzige in Betracht kommende Fall behandelt, da bekanntlich bei Anwendung eines (zweckmäßig nur schwach vergrößernd zu wählenden) Okulars Nebenlicht und Reflexe weniger schwer zu vermeiden sind , und da außerdem der Analysator nach Herausnahme des Okulars bei vielen Mikroskopen das Gesichtsfeld nicht mehr ausfüllt. Diesen Mangel zeigt, wie der Ref. beiläufig bemerken möchte, sogar das in Bd. XIX, p. 528 (1902) dieser Zeitschrift beschriebene FuEsssche Projektionsmikroskop, und der Ref. erhielt, als derselbe bei Gelegenheit einer Neuanschaffung eines solchen Instruments bei der Firma Fuess reklamierte, die Aus- kunft, daß die Firma nicht in der Lage sei, einen bei dem schwäch- sten zugehörigen Objektiv und herausgenommenen Okular bis zum Rande des Gesichtsfeldes polarisierenden Analysator dem Tubus ein- zufügen. Dort ist also Anwendung eines Okulars durchaus notwendig. (Ein für subjektive Beobachtung bestimmtes Okular läßt sich, wenn nötig, unter geringer Abänderung des Abstand es seiner beiden Linsen bei der Photographie von Dünnschliffen ebenso vorteilhaft verwenden, wie ein Projektionsokular, was der Ref. durch Vergleich erprobt und auch bereits lange vorher Nruhauss in seinem Lehrbuch der Mikro- photographie beschrieben hat.) Auch die Meinung des Verf. , daß eine Irisblende mit dem unteren Nikol schwer zu kombinieren sei, ist irrtümlich ; jede Polari- sationsmikroskope herstellende Werkstätte liefert auf Wunsch zu billigem Preise diese sehr empfehlenswerte Hilfsvorrichtung an dem Polarisator; die bequemste Anordnung, welche der Ref. für diesen Zweck kennt, weisen die neueren Mikroskope von Voigt und Hoch- gesang (Göttingen) auf. Bei letzteren erfolgt die Regulierung der Irisblende mittels eines wagerechten Hebels, der radial von dem XXI, 1. Referate. 107 Polarisator his zum Rande des Objektdrelitisclies sich erstreckt, so daß man nicht , wie bei den meisten Mikroskopen die Drelmng der Blende an der durch den überragenden Objekttisch verdeckten Pola- risatorhülse selbst auszuführen braucht. E. Sonimerfeklt {Tübingen). BruhilS, W., Kristallographie. Sammlung Göschen, No. 210. Leipzig 1904. 144 pp. m. 190 Figg. M. —-80. Vorliegendes Büchlein ist sehr geeignet denjenigen einen kurzen Überblick über die Hauptresultate der Kristallographie zu bieten, welche sich nicht in eines der umfangreicheren Werke von Groth oder Liebisch zu vertiefen beabsichtigen , da es trotz seiner Kürze eine für Anfänger genügende Übersicht über die kristallographischen Symmetriegruppen liefert und auch die Hauptresultate der physika- lischen Kristallographie, soweit das in elementarer Behandlung mög- lich ist, kurz berücksichtigt. Zwar hätte der Ref. für den optischen Teil die Anwendung einer solchen Terminologie als zweckmäßiger gehalten , welche der jetzt herrschenden elektromagnetischen Lichttheorie nicht widerspricht (was z. B. in den Lehrbüchern von Liebisch bereits durcligeführt worden ist), indessen kann sich der Verf. damit verteidigen, daß auch in manchen neuen umfangreicheren Lehrbüchern , für deren Vorstudium das vorliegende Bändchen vielleicht geeignet wäre, die Anlehnung an die optische Elastizitätstheorie noch beibehalten ist. In bezug auf Einzelheiten sei zu Seite 18 bemerkt, daß nicht die (dort mit m, n, o bezeichneten) Ableitungskoeffizienten selbst, son- dern nur deren Verhältnisse rational zu sein brauchen ; zu Seite 22 , daß nicht die reziproken , sondern direkten Koordinaten der Zonenachse zur Bildung der Zonenindices benutzt werden, daß die auf Seite 23 genannte „Veränderlichkeit der irrationalen Zonen" nicht vorkommt, vielmehr bei Temperaturänderungen sowohl die rationalen, wie die (z. B. künstlich angeschliffenen) irrationalen Zonen erhalten bleiben. Es sollten diese Einzelheiten indessen nur für den Fall einer Neuauflage, nicht als Tadel für das besonders in Anbetracht des bekanntlich ungemein niedrigen Preises der „GöscHEN-Bändchen" voraussichtlich einen großen Leserkreis erlangende Büchlein hier be- merkt werden. j^ Sommer feldt (Tübingen). 108 ' Referate. XXT, 1. Leiss , C, Neues Kristallrefraktometer zur Bestim- mung größerer und mikroskopisch kleiner Ob- jekte nach C. Klein (Tschermak s mineral. u. petrogr. Mitteil. Bd. XXIII, 1904, p. 51—58). Durch die Anbringung einer Vorschlaglupe an dem (gebrochenen) Fernrohr und einer Aushöhlung des Trägers der Abbe sehen Halb- kugel wird es erreicht, -"^ daß das Präparat, dessen Brechungsexponent bestimmt werden soll , in etwa zehnfacher Vergrößerung durch das so als schwaches Mikroskop wirkende Fernrohr sowohl im durch- fallenden als auch im reflektirten Licht betrachtet, und daher ge- nau zentriert werden kann. Schädliches Nebeulicht (z. B. bei Unter- suchung eines Gesteinsschliffes das von den benachbarten Körnern anderer Mineralien kommende), kann durch eine Irisblende beseitigt werden ; so lassen sich — was der Verf. durch Angabe seiner Ver- suchszahlen belegt — selbst an nur 1 mm großen Mineralkörnern im Gestein die Brechungsexponenten bis auf wenige Einheiten der vierten Dezimale genau bestimmen. Soll das Instrument auch zu spezielleren kristallographischen Untersuchungen verwendet w^erden, so läßt sich ein Okularspektroskop und Goniometerokular fast ebenso bequem wie bei den älteren nur für größere Objekte benutzbaren Modellen anbringen. E. So)nmerfeldt (Tübingen). Schwarzmami , M., Die Polarisationsbank für die mine- ralogisch-optische S c h a u s a m m 1 u n g (Zentralbl. f. Min. 1904, p. 330—333). Da die Aufstellung einer größeren Anzahl solcher Apparate, welche bisher zur Sichtbarmachung der kristalloptischen Erschei- nungen gebräuchlich waren , in einer Schausammlung auf praktische Schwierigkeiten stößt, empfiehlt der Verf. die Anfertigung einer ein- zigen derartigen Vorrichtung, welche wegen ihrer relativ großen Dimensionen eine ganze Anzahl von Präparaten aufzunehmen vermag. Dieselbe wird von ihm als „Polarisationsbank" bezeichnet und be- steht aus zwei sehr großen Glasplattensätzen (der Verf. empfiehlt Scheiben von 14x60 cm Fläche und 1 mm Dicke zum Aufbau), zwischen welche an denjenigen Stellen, wo Präparate im konvergenten Licht betrachtet werden sollen, einfache Lupen eingeschaltet werden. Es können so die Auslöschungslagen, Polarisationsfarben, Achsen- bilder u. dergl. bei Kristallen sichtbar gemacht werden. Für die 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 2(35. XXI, 1. Referate. 109 Demonstration des Pleochroimus empfiehlt sich die Montage einer zweiten derartigen , jedoch nur aus einem Polarisator bestehenden Polarisationsbank. Die Herstellungskosten der Vorrichtungen sind relativ sehr gering, E. Sommerfeldt (Tübingen). Rinne, F., V e r w a n d t s c h a f t von B r o m r a d i u m und B r o m - b a r i u m in k r i s t a 1 1 o g r a p h i s c h e r Hinsicht (Zen- tralbl. f. Mineral. 1903, p. 134—141 m. 4 Figg.). Durch mikroskopische Untersuchung der von Giesel hergestellten Bromradiumkristalle bestätigt der Verf. die durch das chemische Verhalten des Körpers vorauszusagende große Analogie zwischen Barium und Radium. Kristallographisch ließ sich nicht nur eine Übereinstimmung in den Flächenkombinationen , den Wachstums- erscheinungen und dem Verhalten im polarisierten Licht nachweisen, sondern es stellte sich auch vollkommener Isomorphismus der beiden analogen Bromide heraus. E. Soinnierfeklt {Tübingen). Siethoff, E. G. A. ten, Beitrag zur K r i s t a 1 1 u n t e r s u c h u n g im konvergenten polarisierten Lichte (Zeutralbl. f. Mineral. -1903, p. 657—658 m. 1 Fig.). Es wird ein sehr zweckmäßig konstruierter Kondensor für mineralogische Mikroskope zur Untersuchung kleiner Kristalle (resp. -Splitter) empfohlen , die oberste annähernd halbkugelförmige Linse ist drehbar und gestattet daher z. B. Achsenbilder bei verschieden großem Neigungswinkel des Präparats gegen die Sehrichtung zu be- obachten. Für ein umgelegtes Mikroskop (Sehrichtung horizontal) ist das Instrument allerdings nicht benutzbar, da die oberste Linse alsdann herausfallen würde. Der Kondensor wird von Fuess zu relativ sehr mäßigem Preise nach den Angaben des Verf. in den Handel gebracht. E. Soinmerfeldf {Tübingen). Becke , F. , Bestimmung der Dispersion der Doppel- brechung (TscHERMAKS miueral. u. petrogr. Mitteil. Bd. XXII, 1903, p. 378—380). Zur Ermittelung der Dispersion der Doppelbrechung empfieldt der Verf. die Benutzung des Babinet sehen Kompensators und Be- stimmung der Doppelbrechung mittels desselben für zwei durch Filter möglichst homogen gemachte Lichtarten. Die Wellenlänge des an- gewandten Lichtes kann mit Hilfe desselben Instruments festgestellt werden, und zwar aus der Streifenanzahl, welche einer konstanten 110 Referate. XXI, 1. Lauge des Quarzkeiles für das vom Filter durchgelassene Licht im Vergleich zur Streifenzahl im Na-Licht entspricht. Obgleich diese vom Verf. vorgeschlagene Methode Wellenlängen zu bestimmen , hinsichtlich der Genauigkeit hinter den spektralana- lyten natürlich weit zurückbleibt, ist dieselbe für denjenigen Mikro- skopiker, welcher auf nur wenige Instrumente angewiesen ist , recht empfehlenswert und für manche Zwecke hinreichend genau. E. Sommerfeldt {Tübingen). Rililie, F., Pleochroismus des grünen Mikroklius (Zen- tralbl. f. Mineral. 1903, p. 450—451). Verf. beobachtete , daß Schliffe der als Mikroklin bezeichneten Feldspatvarietät im liuear-polarisierten Licht Farbentöne aufweisen, die je nach der relativen Richtung der Polarisationsebene gegen die Kristallachsen zwischen „sehr lichtgrünlich", meergrün und farblos schwanken. E. Sommerfeldt {Tübingen). XXI, 1. Neue Literatur. 111 Neue Literatur, 1. Lehr- und Handbücher. Garten, S,, Leitfaden der Mikroskopie, 2. Aufl., vollständig neu bearbeitet, 262 pp., 152 Figg. u. 1 Ttl. — (Webers Illustr. Katechismen Bd. CXX.) Leipzig (J. J. Weber) 1904. 4 M. Mitlacher, W., Toxikologisch oder forensisch wichtige Pflanzen und vege- tabilische Drogen mit besonderer Berücksichtigung ihrer mikrosko- pischen Verhältnisse. Wien, Urban & Schwarzenberg. XXIII u. 200 pp. 106 Abb. 6 M. Stolze, F., Optik für Photographen unter besonderer Berücksichtigung des photographischen Fachunterrichtes. XII u. 172 pp., 107 Figg., 1904. (Enzyklopädie der Photographie, Halle a. S., No. 49.) 4 M. Winkelmann, A. , Handbuch der Phjsik, 2. Aufl., Bd. VI, 1, Optik I, VIII u. 432 pp. Leipzig (Job. Ambr. Barth) 1904. 14 M. 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Dowdy, S. E. , Sliding Stage for the raicroscope (English Mechanic vol. LXXIX, 1904, p. 218). Lucas, K., On a microscope with geometric slides (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 3, p. 272). Baker's Diagnostic Microscope, no. 1 (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 3, p. 357). 112 Neue Literatur. XXI, 1. Mineralogical Microscope (Catalo^ue Soc. Genevoise pour la construction d'instruments de physique et de mecanique, no. 2485 [1900], p. 102; vgl. Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 3, p. 359). Ross' Improved no. 2 „Standard" microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 2, p. 23(3; vgl. Ross' Catalogue of latest improvements in microscope construction 1903). Swift's newly designed microscope for bacteriological research (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 1, p. 101; vgl. J. Swift and Son's special catalogue London). Swift's newly designed histological and physiological microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 1, p. 103; vgl. J. Swift and Son's special cata- logue London). Swift's Continental stand (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 1, p. 105; vgl. J. Swift and Son's special catalogue London). Travelling microscope (Catalogue Soc. Genevoise pour la construction d'instruments de physique et de mecanique , no. 2485 [1900] , p. lOl ; vgl. Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 3, p. 359). Watson and Sons' new „Argus" microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 2 , p. 238 ; vgl. W. Watson and Sons' supplemental catalogue Oct. 1903). Watson and Sons' „Works" metallurgical microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 1, p. 105; vgl. W. Watson and Sons' catalogue of microcuttits for metallurgy, p. 1). b. Präpariermikroskop. Swift's simple dissecting microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1904, pt. 1, p. 101; vgl. J. Swift and Son's catalogue 1901, p. 26). c. 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Siedentopf ^ angegebene Einrichtung zur Untersuchung ultra- mikroskopischer Teilchen außerordentlich — bis zu kleinen Bruch- teilen der Wellenlänge des Lichtes herab — erweitert worden, soweit es sich darum handelt, isolierte Teilchen, deren Abstände nicht unter das Auflösungsvermögen der heutigen Mikroskope herabgehen , in der Gestalt von Beugungsscheibchen sichtbar zu machen. Bilder der Objekte in strengerem Sinn sind aber diese Beuguugsfiguren nicht, insofern man von einem Bilde eine, wenn auch nur unvollkommene (etwa schematische) Ähnlichkeit mit dem Objekt, oder — bei körper- Uchen Objekten — mit einer Projektion des Objekts verlangt. Ab- gebildet werden, worauf a. a. 0. ausdrücklich hingewiesen ist, nur jene Abstände der Teilchen. Der Begriff der Abbildung gründet sich eben auf geometrische Betrachtungen; diese sind aber für die optische Abbildung nur so- ') H. Siedentopf u. R. Zsigmondy, Über Sichtbarmachung^ und Größen- bestimmung ultramikroskopischer Teilchen mit besonderer Anwendung auf Goldrubingläser (Ann. d. Physik [4] X, 1903), und H. Siedentopf, On the rendering visible of ultramicroscopic particles and of ultramicroscopic bacteria (Journ. R. Microsc. Soc. 1903). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 2. 9 130 Kühler: Mikrophotogr.iphische Untersuchnriioen. XXI, 2. lange maßgebend, als die Annahme einzelner gradliniger Lichtstrahlen in keinem auffälligen Widerspruch mit den Tatsachen steht. Das ist aber nur der Fall, solange bei endlich entfernten Objekten keine Dimensionen in Fr;ige kommen, die von der Größenordnung der Lichtwellen sind oder gar unter diese herabgehen , und eine Ver- wirklichung der Abbildung über diese Grenze hinaus kann nur da- durch erzielt werden, daß man eben die Wellenlänge kleiner macht : die Größe der abbildbaren Teilchen sinkt dann offenbar in dem- selben Verhältnis, in dem die Wellenlänge abnimmt. Über die Versuche , die ich seit einer Reihe von Jahren in dieser Richtung augestellt habe, über deren theoretische Grundlage und über die Ergebnisse soll im folgenden berichtet werden. Von vornherein will ich bemerken, daß sich die erreichte Er- höhung des Abbildungsvermögens in bescheideneren Grenzen hält, insofern als mit der eingangs erwähnten Einrichtung sehr viel kleinere Teilchen sichtbar gemacht werden können, als die sind, die mit dem von mir angewandten Licht abgebildet werden; doch ist es immerhin gelungen, Licht zur Anwendung zu bringen, dessen Wellen- länge nur halb so groß ist, wie die wirksamste Wellenlänge des Tageslichts. Die Steigerung des Abbildungsvermögens ist, um sie an einem recht anschaulichen Beispiel zu erläutern, durchaus analog derjenigen, die eine homogene Immersion von der numerischen Apertur 1*30 einem mittelstarken Trockensystem von der Apertur 0*65 gegenüber aufweist. Einen weiteren Nutzen, der unter Um- ständen noch mehr ins Gewicht fallen kann als diese Steigerung des Abbildungsvermögens , bietet die Anwendung des kurzwelligen ultravioletten Lichtes dadurch , daß sehr viele Objekte ihm gegen- über Unterschiede in der Durchlässigkeit aufweisen, die denen analog sind, die man bisher durch künstliche Färbung mit den zahlreichen, in der mikroskopischen Technik gebräuchlichen Farbstoffen herbei- gefülirt hat. to Einleitung. Die Leistungsfähigkeit des Mikroskops ist zunächst von drei Faktoren abhängig: von der Vergrößerung, die es gewährt, von der geometrischen ^'ollkommenheit der Strahlenvereinigung, die in den Bildpunkten stattfindet, und von der Größe des Öffnungswinkels der abbildenden Lichtkegel. Diese denkt man sich nach der Anschauungs- weise der geometrischen Optik aus Strahlen zusammengesetzt, die XXI, "2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. 131 von den Punkten der Objektebene ausgehen und die sich dann in den konjugierten Punkten des Büdraumes vereinigen. Der Einfluß der beiden ersten Faktoren leuchtet ohne weiteres ein; die Erklärung für den Einfluß des dritten liefert die von Abbe aufgestellte Theorie über die Abbildung beleuchteter Objekte durch optische Systeme. Schon vor mehr als 25 Jahren konnte Abbe^ feststellen, daß die Konstruktion der Mikroskope sich, soweit die nutzbare Ver- größerung und der Olfnungswinkel in Frage kommen, der erreich- baren Grenze soweit als wohl überhaupt möglich genähert habe, und daß ein wesentlicher Fortschritt nur noch hinsichtlich des zweiten Punktes , der Vollkommenheit der Strahlenvereinigung , zu erhoffen sei. Dieses Ziel hat er denn auch verfolgt, und das Resultat dieser Arbeiten war die Konstruktion der Apochromate. '^ Nun ist aber, wie Abbe selbst schon früher hervorgehoben hatte, '^ noch eine weitere Größe von Bedeutung, die nicht, wie die drei eben genannten , im Bau des Instruments begründet ist : sie stellt vielmehr einen gegebenen Faktor vor, mit dem die Konstruk- tion des Mikroskops zu rechnen hat. Diese Größe ist die Wellen- länge des Lichtes, das die Abbildung vermittelt. Ein Mikroskop , das sich hinsichtlich der drei erstgenannten Faktoren dem Ideal soweit als möglich nähert , erreicht die Grenze seiner Leistungsfähigkeit stets bei Strukturen, deren Größe in einem bestimmten Verhältnis zur Wellenlänge des angewandten Lichtes steht, die also demgemäß verschiedene absolute Größen besitzen können. Objekte , deren Teile an Größe die Lichtwellen um mehr als etwa das Zehnfache übertreffen, werden durch ein solches Mikroskop schon nahezu unbedingt ähnlich abgebildet , d. h. das Bild ist einer Pro- jektion des Objekts auf die eingestellte Ebene fast streng geometrisch ähnlich. Sinkt die Größe der Teile dagegen auf kleine Vielfache oder Bruchteile der Wellenlänge, so wird der Grad der Ähnlichkeit ^) Abbe , E. , Die optischen Hilfsmittel der Mikroskopie (Bericht über die wissenschaftlichen Apparate auf der Londoner internationalen Aus- stellung im Jahre 1876. Braunschweig 1878. — Ges. Abhandl. Bd. I, No. 6, Jena 1904. ^) Abbe, E., Über neue Mikroskope (Sitzber. d. Jenaischen Gesellsch. f. Med. u. Naturw. 1886. — Ges. Abhandl. Bd. I, No. 20, Jena 1904). ^) Abbe, E. , Beiträge zur Theorie des jMikroskops und der mikro- skopischen Wahrnehmung (M. Schultzes Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. IX, 1873. — Ges. Abhandl. Bd. I, No. 3, Jena 1904). 9* 132 Kühler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. immer geringer, imd das Bild sinkt mehr und mehr herab zu einer sozusagen schematischen Wiedergabe der Gruppierung der Elemente, Beträgt z. B. bei periodischen Strukturen (Gittern) der Abstand der Elemente nur die Hälfte der Wellenlänge, so gibt das Bild nur noch den Abstand und die Anordnung der Elemente, aber nicht mehr deren Form und Größe wieder. Die Wellenlänge der bei der gewöhnlichen mikroskopischen Beobachtung wirksamen Strahlen schwankt aber nur innerhalb ziem- lich enger Grenzen. Bei weißem Licht, das man in der Regel an- zuwenden pflegt, und das man anwenden muß, wenn neben der Form auch die Farbe der Objekte eine Rolle spielt, kann die Wellenlänge der mittleren gelbgrünen Strahlen, die in der Luft etwa 550 /,kenntnis der Struktur der organischen Gewebe , die von der möglichen Er- höhung des Abbildungsvermögens ganz unabhängig sind. Die Kesultate übergehe ich hier , um Wiederholungen zu ver- meiden ; sie werden am Schlüsse kurz im Zusammenhang mitgeteilt werden. Die MonoChromate für X = 280 /t/<. Weitere Versuche zeigten nun, daß man Systeme von größerer Apertur auf dem bisher eingeschlagenen Weg nicht gut würde her- stellen können, wenigstens nicht mit der Vollkommenheit der Korrek- tion , die das gesteigerte Auflösungsvermögen erfordert , wenn es ohne Einschränkung nutzbar gemacht werden soll. durch die chemisch wirksamen Strahlen (Zeitschr. f. allgem. Physiologie Bd. IV, 1904). ^) Zschimmer, E., Über neue Ghisarten von gesteigerter Ultraviolett- Durchliissigkeit (Zeitschr. f. Instr. Bd. XXIII, 1903). XXI, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. I43 Da gelang- es im Frühjahr 1902 Dr. von Rohr bei den Unter- suchimgeu, die der Abfassung des Kapitels über die sphärische Aberration in der neuen Ausgabe der Theorie der optischen Instru- mente^ vorausgingen, einen gänzlich neuen Objektivtypus zu finden, dessen Vorzüge allerdings nur bei der hier gestellten eigenartigen Aufgabe zur Geltung kommen können. Er fand, daß es möglich ist, Systeme von ziemlich großer numerischer Apertur nur mit Sammel- linsen aus einem Material zu konstruieren, imd dabei die sphärische Aberration für eine Farbe sehr vollkommen zu korrigieren. Auch gelaug es, zugleich die Sinusbedingung durch eiue geeignete Linsen- kombination zu erfüllen, und so konnte Dr. von Rohr ein Objektiv berechnen, das für eiue bestimmte, beliebig zu wählende Wellenlänge aplanatisch war. Bei der Verwendung streng monochromatischen Lichtes von der Rechnung zugrunde gelegten Wellenlänge, weisen diese Objektive eine Vollkommenheit der Strahlenvereinigung auf, die mindestens der bei den Apochromateu erreichten gleich ist. Die für diese neuen Objektive charakteristische Beschränkung der Korrektion auf eine Wellenlänge soll der Name Monochrom at bezeichnen, der diesem Objektivtypus beigelegt worden ist. Unter Benutzung der bekannten aplanatischen Punkte der Kugel- fläche gelingt es dann, nacli diesem Typus Systeme zu bauen, deren numerische Apertur sich, soweit es die technischen Schwierigkeiten zulassen , der durch den Brechungsexponenten der Frontlinse ge- gebenen Grenze nähert. Versuche, die zunächst mit einem für grünes Licht korrigierten System aus Glas angestellt wurden , ergaben ein befriedigendes Re- sultat: daraufhin wurde die Berechnung der Objektive für ultra- violettes Licht in Angriff genommen. Von den oben erwähnten durchlässigen MateriaUen konnte Berg- kristall seiner Doppelbrechung wegen nicht in Frage kommen, der Fluorit aber erschien seines niederen Brechungsexponenten wegen nicht vorteilhaft, es war daher als ein besonders glücklicher Umstand zu betrachten, daß in dem oben erwähnten, von Dr. Hekschkowitsch hergestellten amorphen Quarz ein sehr geeignetes Material zur Ver- fügung stand , dessen Brechungsexponent in diesem Gebiet nahezu den der Krongläser für gelbes Licht erreicht. ^) VON Rohr, M., Die Bilderzeugung in optischen Instrumenten vouj Standpunkte der geometrischen Optik. Berlin 19U4. 144 Köhler: Mikrophotogr.aphische Untersuchungen. XXI, 2. Es wurden nun im August 1902 drei Objektive hergestellt, ein Trockensystem und zwei Immersionssysteme. Das Trockensystem hat eine Brennweite von etwa 7 mm und eine numerische Apertur von 0"39, das schwächere Immersionssystem eine Brennweite von etwa 3 mm imd eine numerische Apertur 0'85, das stärkste Immersionssystem besitzt eine Brennweite von etwa 2 mm und eine numerische Apertur 1'29. Die praktische Ausführung dieser Monochromate stellt an die Geschicklichkeit desjenigen, der die Linsen herstellt, wie desjenigen, der sie zu fassen und zu zentrieren hat, sehr hohe Anforderungen. Die vorgeschriebenen Kadien, Dicken und Abstände müssen mit sehr großer Genauigkeit eingehalten werden, damit das System bei der Prüfung, die selbstverständlich nicht bei Tageslicht vorgenommen werden kann, ohne weitere Nachhilfe vollkommene Resultate ergibt: durch Probieren , auf dem Wege des sogenannten Tatonnements, würde sich die richtige Korrektion nur mit einem unverhältnismäßig großen Aufwand von Zeit und Mühe erreichen lassen. Als Immersionsflüssigkeit wurde Glyzerin benutzt, dessen Brechungs- exponent für Licht von der Wellenlänge 280 infx dem des amorphen Quarzes durch Zusatz einer entsprechenden Menge Wasser gleich gemacht war , bis auf kleine Abweichungen , durch die die letzte Korrektion des Objektivs herbeigeführt werden kann. Die Deckgläser müssen für die Immersionssysteme natürlich aus amorphem Quarz bestehen, da diese Objektive ja das Prinzip der homogenen Immersion noch vollkommener verwirklichen, als die be- kannten homogenen Immersionen. Für das Trockensystem sind auch Deckgläser aus dem S. 142 erwähnten durchlässigen Glas zulässig. Bei den Versuchen, eine zur Prüfung dieser Objektive mit ultra- violettem Licht geeignete Testplatte herzustellen, fand ich, daß auch Mastix in sehr dünne n Schichten noch hinreichende Durchlässig- keit besitzt. Die Versuche mit der Kadraiumlinie X = 275 f.i[ji. Bei der strengeren Prüfung der Objektive zeigte sich nun, daß die Bilder bei den stärkeren Okularvergrößerungeu und bei empfind- lichen Objekten nicht den Erwartungen entsprachen, die man nach dem Ergebnis der Rechnung und nach dem Grad der technischen Vollendung zu hegen berechtigt war. Eine genaue Kontrolle zeigte. XXI, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. 145 daß keinerlei Fehler in der Berechnung oder Ausführung vorlagen; die Schuld an der Unvollkommeuheit trug vielmehr der zwar wohl- bekannte, aber bis dahin niclit genügend beachtete Umstand, daß die Maguesiumlinie nicht einfach ist, sondern aus mehreren Linien von verschiedener Wellenlänge besteht. So gering nun auch die Unterschiede der Brechungsexponenten für diese nahe bei einander liegenden Linien sind, sie genügen, wie auch die Rechnung nach- wies, um zu bewirken, daß das Objektiv verschiedene, von den einzelnen Komponenten der Liniengruppe herrührende Bilder in merk- lich von einander entfernten Ebenen erzeugt : schon innerhalb dieses ganz schmalen Spektralbezirks tritt also die chromatische Unter- korrektion der Monochromate in Erscheinung. Nach verschiedenen Versuchen fand ich eine Linie des Kadmiumspektrums, No. 17 nach der von Mascart^ eingeführten Bezeichnung, Wellenlänge 275 jjfx^ die den drei erforderlichen Bedingungen entspricht: sie ist erstens genügend homogen, so daß das Bild nun keine merklichen chroma- tischen Fehler mehr zeigen konnte, sie ist zweitens vollkommen intensiv genug, wenn sie auch die Magnesiumliuien nicht erreicht, und drittens kommt ihre Wellenlänge und ihr Brechungsexponent dem für die Magnesiumlinie so nahe, daß man ohne erhebliche Ein- buße an Bildqualität die für die eine Linie berechneten Objektive mit der anderen benutzen kann. Das Bild wird ja bei der Wellen- länge 280 fJij.i nicht so gut sein, wie bei der Benutzung der Kadmium- linie No. 17, aber die größere Intensität der Magnesiumlinien bei 280 uj^i kann in manchen Fällen, — z. B. bei Untersuchungen über die Durchlässigkeit, die subjektiv, mit dem Fluoreszenzokular , aus- geführt werden sollen , — den Mangel an Bildschärfe , zumal bei schwächeren Vergrößerungen, reicldich ausgleichen. Das für die Magnesiumlinieu korrigierte monochromatische Trockensystem erwies sich auch für die Kadmiumlinie No. 17 noch brauchbar, doch wurden auch noch drei neue Objektive speziell für die Kadmiumlinie No. 17 von Dr. von Rohr berechnet. Bei diesen neuen Systemen wurde die Abstufung der numerischen Aperturen beibehalten, die Brennweiten jedoch kleiner gewählt, wie bei den ersten für die Magnesiumlinie berechneten. Es geschah dies aus folgendem Grund. Bekanntlich liefert kein ^) Mascart, E., Recherches sur la determination des longueurs d'onde (Ann. d'ec. norm. t. IV, 18G7. Referat: Fortschritte der Physik Bd. XXIII, 1867). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 2. 10 146 Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. Objektiv eine ganz vollkommene Strahlenvereinigiing, so daß im Sinne der geometrischen Optik die von einem Objektpunkt ausgehenden Strahlen genau wieder in einem Bildpunkt vereinigt werden ; an die Stelle solcher Bildpunkte treten vielmehr , je nach der erreichten Vollkommenheit der Korrektion, größere oder kleinere Zerstremmgs- kreise. Damit diese Zerstremuigskreise die Schärfe des Bildes nicht in unzulässiger Weise beeinträchtigen, muß das Objektivsysteni eine genügend kurze Brennweite besitzen. Deren Betrag muß um so kleiner sein , je höher die , ihrerseits wieder im wesentlichen durch das Auflösungsvermögen bestimmte, Gesamtvergrößerung ist, die das Instrument liefern muß, und je unvollkommener die Strahlenvereinigung ist, die das Objektiv herbeiführt. Nun ist ja allerdings die Strahlenvereinigung bei den Mono- chromaten — bei streng einfarbigem Lichte selbstverständlich — von ähnlicher Vollkommenheit, wie bei den Apochromaten; insofern würden also keine kürzeren Brennweiten erforderlich sein wie bei diesen. Das Auflösungsvermögen erreicht aber, der kleinen Wellenlänge wegen, nahezu die doppelte Höhe und demgemäß werden für dessen Aus- nutzung auch etwa doppelt so hohe Gesamtvergrößerungen erforder- lich. Für den stärksten Monochromaten mit der numerischen Apertur 1'2.") bis 1"29 wurde daher eine Brennweite von 1*7 mm angenommen, ein Betrag, der sich ergibt, wenn man für einen Apochromaten mit der numerischen Apertur 1*40 eine Brennweite von 3 mm als zweck- entsprechend ansieht. Die Brennweiten der beiden schwächeren Systeme wurden so abgestuft, daß ihre Stärken, d. i. die reziproken Werte ihrer Brenn- weiten, proportional den numerischen Aperturen abnehmen. Bei dem schwächsten System wäre eine längere Brennweite zu- lässig gewesen, doch wurde der den stärkeren Systemen entsprechende kleinere Wert gewählt , damit dieses System auch noch besser bei der Beleuchtung des Objekts mit Linien von etwas abweichender Wellenlänge , insbesondere mit der Magnesiumlinie 280 ///x benutzt werden kihine. Die Mängel der Strahlenvereinigung, die bei der Benutzung stärker oder schwächer brechbarer Strahlen auftreten, sind dann nach dem oben Gesagten bei einer kürzeren Brennweite weniger störend. XXI, 2. Köhler: Mikrophotographischo Untersuchungen. 147 Die MonoChromate für l = 275 /.ifx. Die wissenswerten Daten über diese neuen Monochromate sind im einzelnen aus der folgenden Tabelle zu entnehmen. Unter der Spalte „relatives Auflösungsvermögen" sind Zahlen angegeben , die gleich dem Doppelten der für die numerischen Aperturen angegebenen Werte sind ; diese Zahlen geben au , wie groß die Aperturen von Systemen sein müßten, die bei Tageslicht dasselbe Auflösungsvermögen besitzen, wie der betreifende Mouochromat. Näheres über die Art dieser Größe findet sich am Schluß der Tabelle. Als Eigeuvergrößeruugen sind runde Zahlen angegeben, mit denen sich bequem rechnen läßt. Unter dem Ausdruck Eigenvergrößerung ist hier, nach der von Abbe^ eingeführten Benennung, die Ver- größerung verstanden, die das Objektiv allein, ohne Okular, liefern würde. Sie ist, wenn f^ die Objektivbrenuweite und i' der Abstand des Bildes vom hinteren Brennpunkt des Systems ist. Bei subjektiver Beobachtung ist für j;' die deutliche Sehweite,. 250 mm, zu setzen, und für diese wird die Eigenvergrößerung der Mikroskopobjektive in der Regel angegeben , weil sie ja vorzüglich für eine solche Art des Gebrauches bestimmt sind. Bei den Mono- chromaten , die in erster Linie für die photographische Aufnahme bestimmt sind, liegt die Sache natürlich anders. Wird nämlich ein reelles Bild auf einen Schirm oder eine photographische Platte pro- jiziert, so ist der Betrag von i' — bei einer mikrophotographisehen Aufnahme könnte man diese Größe füglich „optische Kameralänge" nennen — zunächst beliebig, innerhalb engerer oder weiterer Grenzen, je nach der Konstruktion der Okulare. In der Tabelle sind für jedes Objektiv mehrere Werte für die Eigenvergrößerung angegeben , und dahinter die optischen Kameralängen, für die die betreffende Eigen- vergrößerung gilt. Die Gesamtvergrößerung erhält man für eine der angegebenen optischen Kameralängen, indem man die Eigenvergrößeruug des Ob- ^) Abbe, E., The Relation of Aperture and Power in the Microscope (Journ. of the Roy. Microsc. Soc. [2] vol. II, 1882 ; vol. III, 1883). — Die Beziehungen zwischen Apertur und Vergrößerung beim Mikroskop (Ges. Abhandl. Bd. I, No. f7, Jena 1904). 10* 148 Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. jektivs mit der Okularvergrößerimg des angewandten Okulars multi- pliziert. Über diese Okularvergrößerungen und über die Einstellung einer bestimmten optischen Kameralänge findet sieb das Nähere in dem Abschnitt über die Okulare. Tabelle der Monochromate. Brenn- weite in mm numer. Apertur Relatives Auf- lösungs- vermögen Freier Objekt- abstand in mm Optische Kamera- länge in cm Eigen- vergröße- rung Trocken- 6 0-35 0-70 3 27 45 system 30 50 2-5 0-85 1-70 0-4 25 100 Glyzerin- 30 120 immersion 1-7 1-25 2-50 0-12 26 150 31 180 Das relative Auflösungsvermögen. Einer ausführlicheren Erläuterung bedarf noch der hier ein- geführte Begriff „relatives Auflösungsvermögen". Am nächsten liegt es natürlich, das Auflösungsvermögen eines Systems zu messen durch die Zahl der Elemente , die die feinste, noch lösbare periodische Struktur auf der Längeneinheit aufweist. Ist d der Abstand zweier Elemente , so ist die Zahl der Elemente pro Längeneinheit ijd und dieser Ausdruck stellt das gesuchte Maß vor. Nach einer bekannten Schreibweise können wir diese Beziehung darstellen durch die Gleichung R=C^ WO R das Maß für das Auflösungsvermögen und C eine Konstante bedeutet, die von der gewählten Längeneinheit abhängt. XXI, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. 149 Wählen wir als Längeneinheit das /j, , und als Wert der Kon- stanten C die Zahl 1, so würde in diesem Maßsystem ein Objektiv die Einheit des Auflösungsvermögens besitzen, wenn es ein Gitter eben auflösen könnte , dessen Elemente gerade einen Abstand von einem fx besitzen. Die Größe von d ist nun, äußerst schiefes Licht vorausgesetzt, gegeben durch die bekannte Gleichung wo X die Wellenlänge des angewandten Lichtes und a die numerische Apertur des Systems bedeutet. Setzen wir diesen Wert für d in die erste Gleichung ein , so ergibt sich Nun sind die Objektive bisher alle in erster Linie für den Ge- brauch mit Tageslicht bestimmt gewesen , dessen Wellenlänge im Mittel zu 550 ^ip- angenommen werden kann. Damit ist nun ein gewisser Wert von A gewissermaßen als normaler festgelegt , und die einzige veränderliche Größe in dem Ausdruck für H ist «, die numerische Apertur. Daher haben sich die Mikroskopiker gewöhnt, die Apertur als ein Maß für das Auflösungsvermögen zu betrachten. Das ist natürlich nicht mehr zutreffend, wenn das Objektiv mit Licht von anderer Wellenlänge benutzt wird, und die Bemessung des Auf- lösungsvermögens nach der Apertur allein verliert gänzlich ihren Sinn, wenn die Systeme, wie es bei den obengenannten der Fall ist, mit Tageslicht überhaupt nicht gebraucht werden können. In diesem F'all müßte man also auf das ursprüngliche, sozusagen absolute Maß, auf die Zahl der Strukturelemeute pro Längeneinheit, zurückgehen. Man kann aber leicht auch die Übereinstimmung mit der einmal eingebürgerten Vorstellungsweise aufrecht erhalten, wenn man in der dritten Gleichung die Konstante C so wählt, daß der Wert von R für die numerische Apertur 1 und für Licht von der normalen Wellen- länge (550 /i^a) gleich der Apertur, also ebenfalls 1 wird. Der dieser Bedingung genügende Wert für C ist 275, wenn X in ///^ gemessen wird. Das Maß, das sich dann aus der Gleichung i2 = 2.275-^=«^ 150 Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. ergibt, ist oben als relatives Auflösungsverraög-en bezeichnet worden ; die Einheit , mit der gemessen wird , ist das Anf lösungsvermögen, das ein System von der numerischen Apertur 1 bei äußerst schief einfallendem Tageslicht besitzt. Für Tagesliclit, X =^ 550, wird R stets gleich der Apertur, für Licht von anderer Wellenlänge ist es numerisch gleich der Apertur, die erforderlich sein würde, um bei Tageslicht Strukturen von der- selben Feinheit aufzulösen. Bei den in Rede stehenden Monochro- maten ist die wirksame Wellenlänge 275 ^/i, als relatives Auflösungs- vermögen ergibt sich daher aus der vierten Gleichung R = 2a, d. li. das relative Auflösungsvermögen dieser Systeme ist gleich dem doppelten Betrag ihrer numerischen Apertur , oder mit anderen Worten: bei Benutzung von Tageslicht müßte das System eine doppelt so hohe Apertur haben, um das gleiche Auflösungsvermögen zu er- reichen. ^ Handelt es sich nicht um das Auflösungsvermögen und um damit zusammenhängende Dinge, wie förderliche Vergrößerung, Abbildung kleiner isolierter Körperchen etc., sondern um Fragen, die wesent- lich vom Staudpunkt der geometrischen Optik aus zu behandeln sind, wie z. B. um die Lichtstärke oder um Erörterungen über die Tiefe, so ist auch bei diesen Systemen, wie bei den für Tageslicht korri- gierten, einfach die numerische Apertur, der Wert /z • sin a, maß- gebend. Aus diesem Grund schien es mir notwendig , das relative Auflösungsvermögen schon äußerlich durch die Wahl dieser besonderen Bezeichnung, als eine von der numerischen Apertur gänzlich ver- schiedene Größe besonderer Art zu kennzeichnen und dadurch einer SOI. st leicht möglichen Verwirrung vorzubeugen. Der Quarzkondensor. Als Kondensor habe ich zunächst noch Monochromate oder das schon erwähnte Quarz-Flußspat-Objektiv von 16 mm Brennweite be- nutzt, später einen besonderen Kondensor aus Bergkristall. ^) Diese letzte Anschauungsweise hat wohl zuerst Czapski angewandt, um die Vorteile zu illustrieren, die die Verwendung kurzwelligen Lichtes verspricht; vgl. Zitat S. 134. XXI, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen, 151 Dieses Koiidensorsystem besteht aus vier Linsen, deren Achsen mit der optischen Achse des Kristalls zusammenfallen. Das ganze System besitzt eine Brennweite von ca. 4 mm und eine numerische Apertur 1*30, vorausgesetzt, daß die Planfläche der B^rontlinse mit der unteren Fläche des Objektträgers durch eine Flüssigkeit von genügend hohem Brechungsexponenten verbunden wird, Wasser ist dafür schon ausreichend, besser ist jedoch, wenn höhere Aperturen oder sehr schiefes Licht in Frage kommen , reines Glyzerin oder eine gesättigte Lösung von Chloralhydrat in Glyzerin, deren Brechungs- exponent dem des Bergkristalls noch näher kommt als der des reinen Glyzerins. Der Vorteil einer höher brechenden Immersionsflüssigkeit besteht nicht allein darin, daß die Reflexionsverluste für die stark gegen die Achse geneigten Strahlen vermindert werden , sondern auch darin , daß sie im Sinn einer Verminderung der sphärischen Abweichung wirkt. Eine vollkommene Korrektion dieser Abweichung ist bei dem Kondensor nicht erreicht und auch nicht beabsichtigt worden, die Abweichung ist nur soweit vermindert, als es für den besonderen Zweck erforderlich ist und mit einfachen Mitteln zu er- reichen war. Die beiden obersten Linsen des Kondensors bilden eine aplana- tische Duplexfront, sie können leicht abgeschraubt und durcli eine gr()ßere , einfache , aplanatische Frontlinse ersetzt werden. Man er- liält dann ein dreiteiliges System, dessen Brennweite ca. 7 mm und dessen Apertur etwas über 0*80 beträgt. Zur Ausnutzung der vollen Apertur ist bei diesem System eine Immersionsflüssigkeit nicht nötig, es ist aber aus den oben angeführten anderen Gründen ratsam, trotz- dem eine solche zu benutzen. Die zwei unteren Linsen allein ergeben ein System , dessen Brennweite ca. 17 mm und dessen Apertur etwas über 0"oO beträgt, es wird ohne Immersionsflüssigkeit benutzt. Aus optisclien Gründen, vor allem, um trotz der Doppelbrechung des Bergkristalls eine genügend gute Strahlenvereiniguug zu erhalten, mußte die Brennweite ziemlich klein gewählt werden, das hat den weiteren Vorteil, daß das System bei den kleineren Dimensionen der Linsen nicht so teuer wird , wie ein Kondensorsystem von der üb- lichen Größe. Bei gegebener Größe der Lichtquelle und bei gegebenem Ab- stand ist die Größe des objektseitigen Sehfelds , das der Kondensor beleuchtet, dessen Brennweite annähernd proportional. Um immer ein hinreichend großes Bild der Lichtquelle — in unserem Fall der 152 Kühler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. die Lichtquelle vertretenden Prismentläche — zu erhalten, wird man bei dem schwächsten Monochromaten in der Regel die zweilinsige Kombination, bei dem mittleren die dreilinsige und bei dem stärksten die vierlinsige gebrauchen. Bei den mittleren und starken Okularen reicht die Größe des beleuchteten Sehfelds übrigens bei dem drei- linsigen Kondensorsystem auch noch für den schwächsten , und bei dem vierlinsigen für den mittleren Monochromaten aus. Man wird hiervon Gebrauch machen, wenn es sich darum handelt, die Apertur dieser Objektive vollkommen auszunutzen , oder wenn Gründe der Bequemlichkeit für diese Anordnung sprechen. Der Quarzkondensor ist auf ein Schiebrohr aufgeschraubt, das in die bekannte Zentriervorrichtung für Objektive , die als Konden- soren benutzt werden sollen, paßt. Dieses Schiebrohr enthält zugleich eine Irisbleude dicht vor der untersten Linse des Kondensors. Sie kann durch eine besondere Einrichtung trotzdem mit einem bequem zugänglichen Hebel auf die gewünschte Weite eingestellt werden. Die am Diaphragmenträger des Abbe scheu Beleuchtungsapparats an- gebrachte Irisblende kann nicht zweckmäßig angewandt werden, weil sie bei der drei- und vierlinsigen Korabination zu weit vor dem unteren Brennpunkt des Kondensorsystems liegt. Außerdem dient dieser Diaphragmenträger auch zu einem anderen Zweck , der Auf- nahme einer Uranglasplatte. Diese Platte ist auf ihrer Unterseite mit einer eingeätzten Kreis- linie versehen , deren Mittelpunkt auf der Achse des Mikroskops liegt. Sie dient dazu, die Lage des vom Kollektor des Beleuchtuugs- apparats entworfenen Funkenbildes und dessen Größe zu kontrollieren. Nach vollzogener Regulierung ist natürlich der Diaphragmenträger samt der Platte zur Seite zu schlagen, damit die ultravioletten Strahlen ins Mikroskop eintreten können. Für schiefes Licht sind geeignete Blenden über der Irisblende des Quarzkondensors einzulegen. Die Quarzokulare. Das Bild eines Objekts kann man auf zwei verschiedene Arten auf die photographische Platte projizieren : entweder mit dem Objektiv allein, oder mit Hilfe von Okularen. Hier, wo die Objektive in erster Linie für mikrophotographische Aufnahmen bestimmt sind, hätte es vielleicht nahe gelegen, den zuerst genannten Weg ein- XXI, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. I53 zuschlagen , hat mau doch auch bislier die nur für Projektion und Mikrophotographie bestimmten Systeme in der Regel für die Be- nutzung ohne Okuhire korrigiert. Ich habe aber dieses Beispiel schon bei den ersten schwachen Objektiven nicht befolgt; auch bei den Monochromateu ist es nicht geschehen. Vor allem sprach der Umstand dagegen, daß, wenn die Objektive nicht in abnorm kleinen Brennweiten ausgeführt werden , schon für mäßige Vergrößerungen sehr große Kameralängen erforderlich werden. Gegen die Ausführung der Systeme mit wesentlich kürzeren Brennweiten , als sie gewählt worden sind, sprechen aber dieselben Gründe, denen es zuzuschreiben ist , daß sehr kurze Brennweiten überhaupt , auch bei Systemen für subjektive Beobachtungen, nicht mehr ausgeführt werden. Es sind, abgesehen von Gründen rein optischer Natur, die wachsenden tech- nischen Schwierigkeiten, die eine genügend fehlerfreie Herstellung solcher Systeme erschweren und schließlich ganz unmöglich machen, sowie die Unzuträglichkeiteu, die der kleine Objektabstand bei der Herstellung der Präparate und bei deren Untersuchung mit sich bringt. Aus den angeführten Gründen verdiente die Anwendung von Okularen den Vorzug. Hier waren drei Typen zur Wahl gestellt: das Konkavokular — der sogenannte Amputier — das Projektions- okular und das gewöhnliche Okular. Was nun die Verwendbarkeit der drei Typen im vorliegenden Falle angeht, so glaubte ich von dem Amplifier ganz absehen zu sollen. Er ist ziemlich unbequem zu handhaben, vor allem aber ist er kaum anwendbar, wenn die Einstellung des Bildes auf einem am Ort der photographischen Platte aufgestellten Schirm unmöglich ist. Bei der Entscheidung über die beiden anderen Typen sind folgende Punkte zu beachten. Projiziert man ein reelles Bild auf einer photographischen Platte mit einem vollständigen, aus Objektiv und Okular bestehenden Mikro- skop, so ist die Vergrößerung gegeben durch die bekannte Gleichung wo A und f„ die Brennweiten des Objektivs und des Okulars, A die optische Tubuslänge und g' die optische Kameralänge bedeutet. Der Quotient N = ^ 154 Köhler: Mikrophotog-raphische Untersuchungen. XXI, 2. ist, wie schon oben erwähnt, von Abbe die Eigenvergrößerung des Objektivs, der Quotient N =^- die Übervergrößerung des Okulars genannt worden. Setzen wir diese Größe in die erste Gleichung ein , so erhalten wir für die Gesamtvergrößeruug des Mikroskops A Wie diese Formel bequem erkennen läßt, ist bei gegebenem Wert von f^ , also bei einem bestimmten Objektiv , die erreichte Vergrößerung nur von dem Wert des Produkts j:'-iVo, aber nicht von der Verteilung des Betrages auf die beiden Faktoren abhängig. Man kann , im Anschluß an diese Schreibweise , die Wirkung des Okulars als gleichwertig mit einer Vergrößerung der optischen Kamera- länge auf das iV^^ fache auffassen. Man hat nur zu beachten, daß i'' jedesmal von dem hinteren Brennpunkt des Systems , also , beim Gebrauch des Okulars vom hinteren Brennpunkt des ganzen Mikro- skops aus zu messen ist, während es sonst vom hinteren Brennpunkt des Objektivs aus zu messen wäre. Praktisch ist es jedoch durchaus nicht immer gleichgültig, wie sich das Produkt i' • N^ zusammensetzt. Um das zu verstehen, müssen wir uns daran erinnern , daß tatsächlich zwei Abbildungs- vorgänge vorliegen. Die erste Abbildung ist die Erzeugung des reellen Zwischen- bildes durch das Objektiv allein. Hierbei ist die Vergrößerung — sie darf nicht mit der oben erwähnten Eigenvergrößerung des Ob- jektivs verwechselt werden — wo 9Jj^ die Vergrößerung des reellen Bildes, y'j^ dessen Abstand vom hinteren Brennpunkt des Objektivs, und /!, die Objektivbreunweite ist. Der zweite Vorgang ist die Projektion dieses reellen Bildes durch das Okular auf die Platte. Das Okular wirkt dabei gerade wie das Objektiv einer Laterna magica. Die Apertur der abbilden- den Strahlenkegel ist bei jedem beliebigen Okular ein bestimmter kleiner Bruchteil von der Apertur des angewandten Objektivs; die XXI, 2. Köhler: Mikropliotog'rHphische Untersuchungen. I55 Vergrößerung-, die wieder von der ÜbervergTÖßerung iV„ scharf zu unterscheiden ist, berechnet sich nach der Gleichung wo 9^2 *^i6 Vergrößerung des letzten Bildes gegenüber dem reellen Zwischenbihl , j"'.^ den Abstand des letzten Bildes von dem hinteren Brennpunkt des Okulars und /^^ die Okularbrennweite bedeutet. Da der hintere Brennpunkt des Mikroskops in der Regel nicht weit von dem liinteren Brennpunkt des Okulars entfernt liegen wird, so ist meist i"'.2 nur wenig verschieden von j'. Für diese zweite Abbildung findet nun das Seite 146 Ausgeführte sinngemäße Anwendung. Danach ist vor allem ein um so kleinerer Wert der Okularbrennweite f.^^ erforderlich, je stärker die Vergröße- rung sein muß ; auf der anderen Seite darf aber /., um so größer sein, je vollkommener, vor allem auf der Achse, die Korrektion ist, die das Okular aufweist. Mit anderen Worten heißt das , nur bei Okularen, die sorgfältig, wie schwache Objektive, korrigiert sind, kann man lange Brennweiten und relativ große Kameralängen an- wenden, um eine bestimmte Vergrößerung '^^ und damit auch eine bestimmte Gesamtvergrößerung N zu erreichen , für kurze Kamera- längen genügen dagegen auch weniger vollkommen korrigierte Okulare, deren Brennweite dann entsprechend kürzer sein muß. Je größer die Kameralänge ist, mit der ein Okular noch be- nutzt werden darf, desto größer ist natürlich der Spielraum der Vergrößerungen , die es bei verschiedenen Kameralängen zur Ver- fügung stellt; es muß nur dafür gesorgt sein, daß das Okular — oder die „Augenlinse" allein — auf das reelle Zwischenbild ein- gestellt werden kann. Dieses muß nämlich bei jedem Kameraauszug in der gleichen Entfernung vom Objektiv liegen , weil starke Mikro- skopobjektive in der Regel nur für einen bestimmten Bildabstand j'j^ korrigiert sein können. Diese Einrichtung weisen die für mikrophotographische Arbeiten vielfach benutzten Projektionsokulare auf. ^ Im allgemeinen haben sie sich recht gut bewährt, ihrer Anwendung in unserem Falle stellen sich jedoch gewisse Schwierigkeiten entgegen. Zunächst wäre ein ziemlich zusammengesetztes System erforderlich gewesen — die ') Abbe, E., Über neue Mikroskope (Sitzber. d. Jenaischen Gesellsch- f. Med. u. Naturwissensch. 1886. — Ges. Abhandl. Bd. I, No. 6, Jena 1904) 156 Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. XXI, 2. Zeiss sehen Projektionsokulare enthalten z. B. ein einfaches Kollektiv und ein dreifaches Objektiv an Stelle der Augenlinse — und dann hätte das Einstellen auf sehr verschiedene Kameralängen ziemlich komplizierte Einrichtungen nötig gemacht. Vor allen Dingen wäre eine sorgfältig justierte Teilung zum Fokussieren am Okular selbst und eine entsprechende an dem weiter unten zu beschreibenden Sucher erforderlich gewesen. Dem gegenüber bietet das gewöhnliche Okular den Vorteil ein- facher Konstruktion aus zwei dünnen Linsen in festem Abstand , so daß bei der Beschränkung auf eine optische Kameralänge keinerlei Teilungen nötig sind. Überschreitet ferner diese optische Kameralänge eine gewisse Größe nicht, so lassen sich die verschiedenen Vergrößerungen ebenso vollkommen wie bei subjektiver Beachtung durch eine Reihe von Okularen erreichen, und das jedenfalls weit bequemer, als es mit einem oder zwei Projektionsokularen der Fall sein würde. Auch auf den Vorteil, den eine kontinuierliche Abstufung der Vergrößerung bietet , braucht man nicht ganz zu verzichten ; innerhalb gewisser Grenzen kann die optische Kameralänge geändert werden, auch wenn Okulare in fester Fassung zur Anwendung kommen. Einen Beweis dafür liefert schon die subjektive Beobachtung tagtäglich : Beobachter mit verschiedener Sehweite benutzen ja auch dasselbe Mikroskop bei verschiedener Einstellung, d. h. bei verschiedener Lage des aller- dings in diesem Fall virtuellen Bildes. Hinsichtlich der Kosten würden sich im vorliegenden Fall die Projektionsokulare ebenfalls weniger günstig stellen, eben wegen der wesentlich komplizierteren optischen Zusammensetzung und mechani- schen Einrichtung. Um eine ausreichende, bequeme Abstufung der Vergrößerungen für jedes Objektiv zu ermöglichen, habe ich eine Reihe von Okularen berechnet , deren Vergrößerungen (nach Abbe definiert als Quotient der optischen Tubuslänge durch die Okularbrennweite) der Reihe nach die Werte 5, 7, 10, 14 und 20 haben. Die Grenzwerte sind im Anschluß an die bei den Kompensationsokularen eingeführten Vergrößerungen gewählt, mit Rücksicht darauf, daß die Monochromate etwa ebenso starke Okulare vertragen wie die Apochromate ; die Ab- stufung scheint mir deshalb zweckentsprechend, weil die Vergrößerungen, die man bei gleicher optischer Kameralänge erhält, immer im Verhältnis 1 : 2 zunehmen, wenn man von einem Okular zu dem nächst stärkeren übergeht; die Expositionszeiten wachsen dann jedesmal auf das Doppelte. XXL 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. I57 Damit die Einstellung beim Wechseln der Okulare im wesent- lichen erhalten bleibt — eine Einrichtung, die nicht nur der Be- quemlichkeit dient, sondern die streng genommen notwendig ist, damit ein starkes Objektiv bei jedem Okular das bestmögliche Bild gibt — sind die Fassungen der Okulare, ähnlich wie bei den Kompensations- okularen, abgeglichen. Handelt es sich dabei um Okulare von sehr verschiedener Stärke, aber gleichem Typus, so kommen die Austritts- pupillen in sehr verschiedene Höhen zu stehen; da hieraus gewisse Unbequemlichkeiten entspringen - — bei gleichem Kameraauszug würde sich die optische Kameralänge stark ändern — wurde zur Vermei- dung dieses L^belstandes für die drei stärkeren Okulare der Typus des Ramsden sehen, für die beiden schwächeren der Typus des HuYGENS sehen Okulars gewählt. Um Reflexe möglichst abzublenden, ist jedes Okular mit einem abnehmbaren Okulardeckel versehen worden , in dessen Öffnung die Austrittspupille liegt. Um die optische Kameralänge festzustellen, hat man daher nur den Abstand der Platte von dem Okulardeckel zu messen. Es handelte sich nun noch darum, die optische Kameralänge zu ermitteln, bei der auch in ungünstigen Fällen, wenn empfindliche Objekte vorliegen, die Fehler des Okulars auf der Achse noch nicht bemerkbar werden. Die Erfahrung zeigt nun , daß die einfachen HuYGEXs sehen und Ramsden sehen Okulare bei subjektiver Beobachtung vollkommen befriedigende Bilder ergeben. Daraus kann man weiter schließen, daß sie bei zweckmäßiger Konstruktion ebenso gute Er- gebnisse liefern müssen, wenn man sie zur Projektion des Bildes auf die photographische Platte verwendet, unter der Voraussetzung aller- dings, daß man das Photogramm aus einem Abstand betrachtet, der nicht unter den Betrag der optischen Kameralänge herabgeht. Nur unter dieser Voraussetzung erscheinen die Zerstreuungskreise bei der Betrachtung des Photogramms unter demselben Sehwinkel, wie bei subjektiver Beobachtung : stören sie bei dieser nicht , so können sie auch die Bildschärfe des Photogramms nicht schädigen. Im vor- liegenden Fall, bei der angewandten monochromatischen Beleuchtung, liegen sogar die Verhältnisse noch wesentlich günstiger als bei dem zum Vergleich herangezogenen Fall der subjektiven Beobachtung mit weißem Licht. Selbstverständlich muß die Konstruktion der Okulare, insbeson- dere der schwächeren , an die Projektion eines reellen Bildes an- gepaßt werden, um die schon S. 155 erwähnte Verschlechterung des Korrektionszustandes des Objektivs zu verhindern. 158 Köhler: Mikropliotog'raphische Untersuchungen. XXI, 2. Mit verschiedenen optiselien Kameralängen angestellte Versuche ergaben, daß jedenfalls bei Werten, die kleiner sind als ca. 35 cm, noch kein schädlicher Einfluß seitens der Okulare zu bemerken ist; ja man kann derartige Aufnahmen sogar noch aus einer kleinereu Entfernung, oder, was auf dasselbe hinauskommt, mit einer schwachen Lupe betrachten. Zu klein darf man die optische Kameraläuge auch nicht wählen , weil dann die zur Erzielung einer bestimmten Ver- größerung erforderliche Okularbrennweite zu kurz wird : dann leidet die Bildqualität außerhalb der Achse. Zweckmäßig wird man daher nicht viel unter 25 cm herabgehen; dieser Spielraum genügt, um mit Hilfe der verschiedenen Okulare eine Reihe passend abgestufter Vergrößerungen bei jedem Objektiv zu erhalten. Die Vergrößerungen und optischen K a m e r a 1 ä n g e n für die M o n o c h r o m a t e und die Q u a r z o k u 1 a r e bei 160 mm Tubuslänge und der Wellenlänge / = 275 /'ergrößerungen GOO 800 1200 1600 2400 opt. Kameralänge 3l"5cm 30 cm 31-5cm 30 cm 31-5cm Vergrößerungen 700 1000 1500 2000 3000 IT mm (ipt. Kameralänge 24 cm 24-5cm 26 cm 24- 5 cm 26ciu n. A. 1-25 Vergrößerungen 900 1300 1800 2500 3600 o])t. Kameralänge 31 cm 32 cm 31 cm 31 cm 31 cm XXT, 2. Köhler: Mikrophotographische Untersuchungen. 159 Die vorstehende Tabelle ^ibt eine solche Reihe von Veri,'rößeriiny pro- perly directing the curreut it is made to spread out between the vitilline membrane and the blastoderm. The blastoderm soon begins to become opaque and to be less soft. Now the current may be di- rected under the blastoderm to wash it free from the yolk, tili it tloats as a loose cake in the fixing fiuid. It raust then be removed, at once, to a dish of fixative. This may be done by cutting through tlie vitelline membrane and drawing out the blastoderm in a very large pipette or eise by lifting up the blastoderm with a section - lifter. The blastoderm should be flat and free from yolk. Any superfluous yolk should be washed otf as the blastoderm lies upside down in the fixative, using a strong but venj f'nic jet of fixative from a special pipette. To obtain good results the Operation must be performed quickly and two possible difiiculties guar- ded against. The first is the entrance of air bub- bles : this is obviated by squeezing out a slow stream of the fixative as the point of the pipette pierces the vitelline membrane. If, however, air does get in between blasto- derm and vitelline membrane it may be sucked out : and if it does not rise to the top of the pipette the pipette may be withdrawn, the air expelled , and the Operation repeated tili successful. The second ditficulty, the two great hardening and resulting brittleness of the blastoderm , may be obviated by removing the blastoderm at the right stage, which is a matter easily learned. Such fixatives as corrosive and osmic mixtures give trouble by too rapid fixation and when it is necessary to employ them it is XXI, 2. Pirone: Note sur reiiiploi du jode apres la fixation en suhliiiie. i 7;) easier to reinove and to wash the blastodenu in picro-siilidmric be- töre transferring' it to such fixatives. Baltimore, 19 July 1904. [Eingegangen am 29. Juli 1904.] [Institut Imperial de Medecine Experimentale de S'- Petersbourg — Section de Pathologie Generale. Note sur Feiiiploi du jode apres la fixation en sublime, ou en liquides (|ui en contiennent. Par le Dr. R. Pirone. Apres la fixation en sublime, pour extraire cette substance des pieces, le procede ordinaire est celui de laisser les objets dans l'alcool a 70 ^^ eontenant de la teinture de jode en certaine quantite, jusqu'a ce qu'ils ne decolorent plus Talcool. A la teinture de jode on peut substituer la Solution de jode dans le jodure de potassiuni d'apres la formule de Mayek. Dans Tun cas ou dans l'autre, il laut laver ensuite , comme Apathy le conseille , pas nioins que vingt-quatre heures, meme plus, dans de l'alcool pur; et cela soit pour corriger le defaut du sublime, qui rend toujours les tissus un peu cassants, soit pour faciliter les colorations (Bolles Lee et Henneguy). Depuis quelque temps , a cote de ce procede, je profite d'un autre, un peu plus rapide, qui cousiste essentiellement a extraire le sublime des coupes, au lieu de l'extraire des pieces, Voila corament je procede. Les objets fixes sont durcis a Talcool, eclaircis en xylol, enrobes en paraffine et debiles en coupes. Les coupes, collees a l'eau aux couvre-objets, sont plongees dans le xylol pour enlever la paraffine , puis dans l'alcool pour eloigner le xylol , enfin dans l'alcool a 70^. A ce moment , avaiit de passer a la coloration, je les laisse pendant 20 — 2') minutes ou dans de la teinture de jodc- 12* 180 P ir o n e : Note sur l'emploi du jode apres la fixation en sublime. XXI, "2. jodee de Mayer, additionnee avec de Teau distillee ad viui colorem, (tu bien daiis de ralcool a 70** avec la meme teinture. Les coiipes sont rincees eusuite a ralcool , qui enleve le jode , et en cas qu'ils restent encore faibleraeiit teiutes en janue, je les lave a Tean de magnesie. C'est tont. Pour faire agir le jode sur plnsieurs conpes a la t'ois, on pent se servir d'nne boite de Petri remplie ä moitie d'ean ou d'alcool jode, an "fond de laqnelle sont placees les lamelles. Cette Variante dans Temploi du jode apres le sublime, m"a servi tres bien la oii il faliait avoir en peu de temps des preparations histologiques d'objets convenablement fixees et colorees (diagnostique histologique de tumeurs, exanien de fragments de la muqueuse uterine apres räclage, etc.). Dans ces cas, on le sait, pour fixer les objets on a recours a Falcool , et il en taut tout de meme quelques jours pour que lexamen soit accompli. Mon procede par contre, pernict d'employer le sublime dont les avantages, comme fixateur, sont bien superieurs a ceux de l'alcool, meme dans les usages mentionnes, et permet aussi d'executer Texainen en tres peu de temps. II y a encore d'autres cas, surtout dans les travaux histo- pathologiques , oii le sublime par ex. , est tres indique comme fixa- teur , mais ou doit eviter en meme temps un contact prolonge des objets avec l'alcool , qui pourrait reussir nuisible. Or dans ces cas aussi mon procede nie parait ä etre recommande. Enfin je Tai employe dans des recherches d'histologie nor- male (examen des glandes gastriques pendant et hors la digestionj, faisant suivre la coloration de Bion'di-Heidenhain. J'ai obtenu des resultats excellents , parce que le jode agit en meme temps comme dissolvaut du sublime et comme mordant vis-a-vis des elements nucleaires et protoplasmiques des cellules , qui se colorent par la plus vivement. Je laisse de cote les recherches de Cytologie tres fine. Apres le sublime, il faudra, peut-etre, s'en tenir pour elles au procede d'enlever le sublime avant Tinclusion a la paraffine , surtout si Ion veut tenir compte de la possibilite des artefacts, signales par Dahl- gren et ScHAPER, ^ auxquels pourrait donner lieu le sublim»^ contenu dans les tissus, pendant Tinclusion dans la paraffine. Mais pour les travaux ordinaires, encore mieux la on on est ') Cites par Bolles Lej: et Henneguy dans le „Traite des me- thodes techniques". 3me ed. Paris, 1902. XXI, 2. Sommerfeldt: Mikroskop f. mineralogische Untersuchungen. 181 oblige k uue recberche histologique rapide, aiusi que hi oii ou doit eviter autant que possible raction prolongee de ralcool sur les tissus, la Variante signalee peut etre employee avee protit. [Eingegangen am oO. Juli 1904.] Ein für mineralogische IJntersuchnngen bei hoher Temperatur geeignetes Mikroskojj. Von Ernst Soiiiiiierfeldt in Tübingiii. Hierzu ein Holzschnitt. Durch die Anbringung von Erhitzungsapparaten , Flüssigkeits- gefäßen oder manchen anderen Hilfsvorrichtungen an mineralogischen Mikroskopen wird die Drehbarkeit des Präparates fast stets be- hindert , oft ganz unmöglich gemacht. Da indessen nicht eigentlich eine Drehung des Objektes selbst, sondern nur eine relativ zu den Polarisatoren erfolgende Richtungsänderung von Wiclitigkeit ist , so werden schon lange mineralogische Mikroskope mit gleichzeitig ro- tierenden Nikols angefertigt, bei welchen eine gemeinsame Drehung von Polarisator und Analysator um die Instrumentachse möglich ist, ohne daß gleiclizeitig der Winkel zwischen den Nikolhauptschnitten oder die Stellung des Präparates die geringste Änderung erfährt. C. Leiss ist es gelungen^ durch eine zweckmäßige Modifikation der Zahnradübertragung, welche bisher meistens zur Verbindung von Polarisator und Analysator behufs gemeinsamer Bewegung angewandt wurde , den toten Gang zu vermeiden und daher die notwendige Genauigkeit bei der Messung der Bewegung zu ermöglichen. Der- ij C. Leiss, Neues Jahrb. f. Mineral. Beil. -Bd. X, 1895, p. 180 u. 412. 182 Öoiuuierfeldt: Mikroskop f. mineralogische Untersuchungen. XXI, 2. sell)e hat einige Mikroskopniodelle konstruiert,^ bei denen auf die Drehbarkeit des Präparates gänzlich Verzicht geleistet und dnrch diejenige der Nikols ersetzt wird ; es zeichnen sich diese Stative zwar durch Einfacldieit der Handhabung aus , können aber , selbst wenn die i'bertragung eine vollkoninien fehlerfreie Ablesung des Drehungs- winkels gestatten würde, noch folgende schwer zu vermeidende Fehler- quelle bei quantitativen Messungen besitzen : Nur wenn beim Austritt aus dem Analysator die Lichtstrahlen dieselbe Richtung erlangen, welche sie vor dem Eintritt in denselben besassen , stimmt die am Teilkreis abgelesene Drehung mit der faktisch eingetretenen überein, bei einem gewöhnlichen Nikolschen Doppel])risma ist aber diese Be- dingung höchstens uäherungsweise erfüllt. Auch genügt es keines- wegs, die Endflächen des Doppelprismas einander planparallel zu machen , vielmehr kann dasselbe dennoch , falls zufälligerweise die Kittschicht, welche die beiden Einzelprismen verbindet, schwach keil- förmig ist, ablenkend wirken. Da demnach die komplizierte Zahnrad- übertragung oft eine nur scheinbare Genauigkeitserhöhung bedingen dürfte , bevorzugte ich die im folgenden zu beschreibende direkte Verbindung der Polarisatoren, welche den besonderen Vorteil bietet, in bequemer Weise sich in einen Objektdrehtisch umwandeln zu lassen, so daß es nach Belieben möglich ist, entweder das Präparat bei festbleibenden Polarisatoren oder die beiden Polarisatoren ge- meinsam oder einen derselben einzeln bei festbleibendem Präparat um einen genau meßbaren Winkel zu drehen. In der Tat hatte auch bereits Leiss, wohl unter Erkennung dieser und anderer Fehler- (piellen,- solche Mikroskope konstruiert, bei denen sowohl ein dreh- barer Objekttisch, als eine Zahnradübertragung für die gleichzeitige Drehung beider Nikols vorhanden ist; die Modelle'^ sind aber wegen des doppelten Drehmechanismus sehr kompliziert und die vielen ^) Auch von anderer Seite sind derartige Mikroskope, jedoch mit einer weniger vollkommenen Drehungsübertragung, in den Handel gebracht. -) Dieselben hängen mit den speziellen kristallographischen Eigen- schaften stark doppeltbrechender Substanzen zusammen und bedingen, daß besonders Licht, welches stark schriige einfällt, auch durch ein absolut fehlerfreies Nikol einen anderen Austrittswinkel als durch eine planparallele Platte erlangen kann. Die verschiedenartigen Ursachen für diese Ab- weichungen lassen sich durch geeignete Wahl der Schnittflächen teilweise, aber bei keiner der zahlreichen Konstruktionsarten alle gemeinsam ver- meiden. ■') Vgl. Leiss, Die optischen Instrumente der Firma R. Fuess, p. 198 ff. XXI, '2. Soinmerfeldt : Mikroskop f. iiiineialogische Untersuchungen. 133 Attribute beliiiideni scliließiicli eine bequeme Benutzung (ganz ab- geselien von der selir beträchtlichen Preiserhöhung). Der \'orteiI der hier beschriebenen Anordnung besteht demgegenüber darin, daß dieselbe Drehungsachse und derselbe Teilkreis für beide Fälle ausreicht; sie ermöglicht als Objektdrehtisch benutzt die Genauigkeit der gewöhnlichen Mikroskope , als Drehvorrichtung für die Nikols benutzt , erscheint sie zwar bei bloßer Betrachtung der äußeren Mechanik weniger vollkommen als die LEissscbe, aber da in letzterer die Sicherheit vor optischen Fehlern eine geringere als vor mecha- nischen ist, so dürfte die faktische Leistungsfähigkeit der l^Eissschen Anordnung auch bei dieser Verwendungsart kaum der unsrigen über- legen sein. Die letztere besitzt schließlich noch den Vorteil, daß sich die verschiedenartigsten Nebenattribute, wie stereoskopisclie Wippen, Elektrolyseure und anderes durch Klammern (von denen K in unserer Abbildung ein Beispiel ist) bequem mit dem Stativ verbinden lassen. Der Objektdrehtisch besteht aus einem festen Teilkreise, welcher von einem den Xonius tragenden drehbaren Ringe R umgeben ist; mit letzterem ist eine auf der Objektebene senkrecht stehende Stange *S' verbunden, an deren einem Ende eine Zahn- und Triebbewegung für den l'olarisator N angebracht ist, während das andere Ende mittels einer bei S^ lösbar befestigten Q'ierstange die Okularhülse ergreift 184 Sommerfeld t: Mikroskop f. mineralogische Untersuchungen. XXI, 2. und dieser samt den Polarisatoren eine Drehung- um die Instrument- achse ermöglicht. Um der Bewegung des Tubus während der P^in- stelhmg zu folgen , muß entweder die Schraube bei S^ oder 60, welche in Längsnuten sich bewegen, gelöst werden. Zur Messung des Drehungswinkels werden diese Schrauben natürlich festgestellt, dieselben gestatten schließlich noch, falls das Mikroskop längere Zeit hindurch anderen Benutzungszwecken dienen soll, die Stange S nebst der bei Q lösbaren Querstange gänzlich zu entfernen. Alsdann ist die Drehung des Objekttisches ganz besonders bequem , obgleich in den meisten Fällen auch die Mitbewegung der Stange S nicht sonderlich stört. Um das im zentralen Teil des Objekttischkreises befindliche Präparat mit dem die Peripherie umgebenden Ringe und Noniusträger B, zu verbinden, wird an letzterem eine durchsichtige Platte fest angebracht, welche den Teilkreis überdeckt. AVird das Präparat auf diese Platte gelegt , so macht es daher bei vertikal stehendem Mikroskop ohne weiteres eine Drehung des Ringes M mit ; soll das Mikroskop auch in der Horizontalstellung derartig verwandt werden, so bieten sich für Untersuchungen bei gewöhnlicher Tempe- ratur keine Schwierigkeiten , für Erhitzungszwecke hingegen würde statt der für gewöhnlich ausreichenden Glasplatte eine solche aus Glimmer zum Überdecken des Teilkreises benutzt werden. Hierbei nun passiert es leicht , daß die Klammern , welche das Präparat am Hinuntergleiten verhindern, die Glimmerplatte ^ zu fest an den Teilkreis andrücken. Obgleich sich diese letzte Schwierigkeit un- schwer vermeiden ließe , so sah der Verf. sich dennoch nicht vor diese Notwendigkeit versetzt , da bei Erhitzungsversuchen die Drehung der Nikols unter Festhaltung des Präparates große Vor- züge vor der entgegengesetzten Anordnung bietet , und nur bei gewöhnlicher Temperatur sich die letztere oft mehr empfiehlt. Natürlich ist es für diese noch notwendig den Polarisator"- anders als in der Zeichnung, welche die Drehbarkeit des Nikols ver- anschaulicht, zu stellen, und zwar wird der Polarisator samt der Z a h n s t a n g e S., abgelöst und letztere in eine kleine Hülse, welche an dem festbleibenden Teil des Objekttisches angebracht ist, eingesetzt. Dadurch wird verhindert, daß bei der Drehung die Zahn- ^) Dieselbe besitzt zweckmäßigerweise eine zentrale Durchbohrung, da andernfalls die im Gesichtsfelde beündlicbe Glimmersubstanz durch ihre Doppeltbrechung Versuche im polarisierten Licht stört. -') Als Polarisator ersichtlich. Ist endlich eine Durchschueiduug in hori- XXI, 2. Seh aper: Diirclisclineidung großer Wachsplatten- Modelle. 205 zontaler Kichtiing aus diesen oder jenen Gründen angezeigt, so dürfte sicli die in Figur 4 dargestellte Drahtfülirung durch seitlichen Zug am meisten empfehlen. Die hier nur ganz kurz angegebenen Methoden der Schnittführung gestatten natürlich den jeweiligen Be- dürfnissen entsprechend eine vielfache Modifikation und Kombination. Die Erfahrung lehrt dabei am besten, die geeignete Wahl zu treffen. Immerhin ist, wenn irgend anwendbar, die Führung des Drahtes von oben nach unten (Fig. 2) unter Anwendung von Druck am meisten zu empfehlen, indem sie meiner Frfahrung nach die sicherste Führung ermöglicht und am wenigsten ermüdet. Der letztere Vorteil ist dabei nicht zu unterschätzen, indem bei großen Modellen die Prozedur der Durchschneidung oft 10 und mehr Minuten iu Anspruch nimmt, und es wünschenswert ist, dieselbe nicht zu unterbrechen, um eine zu feste Wiederverklebung der Schnittflächen möglichst zu vermeiden. Als ein besonderer Vorzug unserer Methode dürfte endlich noch hervorzuheben sein, daß dieselbe mit Leichtigkeit gestattet, auch beliebig gekrümmte oder winklige Schnittflächen zu er- zeugen, und uns somit ermöglicht, ein Modell in jeder gewünschten Weise in Teilstücke zu zerlegen. Die Führung des Drahtes kann man, wie bisher augegeben, iu den meisten Fällen wohl allein ausführen. Ist das Modell jedoch sehr groß, so empfiehlt es sich zu Zweien zu arbeiten, und zwar in der Weise , daß mau an gegenüberliegenden Seiten des Modells in der Richtung der Schnittebene Aufstellung nimmt, den Draht in ge- eigneter Entfernung mit je einer Zange faßt und nun das zwischen sich ausgespannte Drahtstück, ein jeder auf seiner Seite, durch das Modell hindurchleitet. Auf diese Weise wird bei geringerer Er- müdung eine sicherere Schnittführung erzielt. Es bedarf kaum be- sonderer Erwähnung, daß wir in dem Falle, wo das Modell sich nicht in gewünschter Lage fest aufstellen läßt, und vor allem dann, wenn wir mit Zug nach oben oder nach der Seite arbeiten, der Assistenz bedürfen, um das Modell in der gegebenen Lage zu fixieren. Unmittelbar nach der Durchschueidung wird die Trennung der noch zusammenklebenden Teilstücke vorgenommen , die immer sehr leicht gelingt, wenn der Draht den oben angegebenen richtigen Hitzegrad besaß. Man verfährt am besten in der Weise, daß man an ver- scliiedenen Stellen der Schnittlinie ein wenig mit der Schneide eines breiten Messers eindringt und durch vorsichtige seitliche Hebel- bewegungen die beiden Hälften allmählich zum Auseinanderweichen bringt. Bei größereu und solideren Modellen kann man die Trennung 206 Schaper: Durchschneidung großer Wachsplatten-Modelle. XXI, 2. auch durch leichtes Aufstoßen in der Richtung der Schnittebene auf einer Tischkante befördern. Die bei ruhiger und gleichmäßiger Führung des schneidenden Drahtes stets sehr sauber ausfallenden Schnittflächen bedürfen dann meist nur noch eines leichten Über- fahrens mit dem heißen Schmelzspatel, um die wünschenswerte Ebenheit und Glätte zu erhalten. Breslau, 31. August 1904. [Eingegangen am 2. September 1904.] XXI, 2. Referate. 207 Referate. 1. Lehr- und Handbücher. RÖthig, P. , Handbuch der embryolog- ischen Teclinik. 34 Abb. Wiesbaden (J. F. Bergmann) 1904. In dem vorliegenden Buche hat der Verf. seine Erfahrungen niedergelegt, die er als Assistent für Embryologie am anatomisch- biologischen Institut zu Berlin in 5 Jnhren gesammelt hat. Der Inhalt des Werkes verteilt sich auf die einzelnen Abschnitte folgender- maßen. Das erste Kapitel gibt eine Übersicht über die für den Embryo- logen wichtigsten Fixations- und Färbungsmethoden, ihre Zusammen- setzung und Anwendung. Kapitel II schildert das Einbettungsverfaliren und geht besonders auf die Intermedien zwischen absolutem Alkohol und Paraffin und die Orientierung des einzubettenden Objekts ein. Darauf folgen spezielle Winke für die Einbettung bestimmter Objekte : Eier von Echinodermen, Würmern, Arthropoden, Mollusken, Fischen, Amphibien, Vögeln. Kapitel III führt die für die embryologische Technik wichtigsten Apparate in Wort und Bild vor, so z. B. nach dem Fairchild- ScHAFFERSchen Muster gebaute Körbchen zur schonendsten Behand- lung embryologischer Objekte bei Waschung und Einbettung, den Membranzerteiler von H. Virchow , das Embryoskop von Geklach, das Durchströmungskompressorium von II. !>. Ziegleu, Apparat zum 208 Referate. XXI, 2. Photographieren wagerecht liegender Objekte von der Ober- nnd Unterseite nach 0. Hertwig, den Belichtungsapparat nach Landolt- RöTHiG u. a. m. Kapitel IV' bis XI ist der speziellen embryologischen Technik bei den einzelneu Tierklasseu von den Coe- lenteraten bis zu den Säugetieren gewidmet. Es werden hier eingehend die Beobachtung lebender Objekte und die im spe- ziellen Falle geeigneten Fixations- und Färbungsmethoden besprochen. Besonders dankenswert sind in diesen Abschnitten die Angaben über Fortpflanzung, künstliche Befruchtung, Aufzucht der Brut und be- quemste Beschaffung des Materials , die der Verf. bei jeder ein- zelnen Tierklasse bietet. Kapitel XII behandelt Methoden zur Entwicklungsgeschichte der Gewebe. Wir finden hier die wichtigsten Hilfsmittel für das Studium der Histogenese des Bindegewebes, der elastischen Fasern, der Muskulatur , des Knorpels , Knochen , der Zähne , des Gefäß- systems, des Blutes und des Zentralnervensystems. In Kapitel XIII werden Methoden zur Erforschung der Bildung des Myelins und der ScHWANNSchen Scheide, der Entstehung des Glykogens und die Methoden von Hochstetter zur Darstellung des Hohlgangssystems des embryonalen Körpers geschildert. Kapitel XIV beschäftigt sich mit den Methoden der experimen- tellen Entwicklungsgeschichte, mit der sogenannten Pflüger sehen Zwangslage, der Plattenzwangslage (Pflüger, Roux, Born, Hertwig, Schültze) und anderen Kunstgriffen die Lage der Eier zu beein- flussen, den Zentrifugier- und den Schüttelmethoden. Ferner werden die Anstich-, Zerschneidungs- und Durchschnürungs- methoden von Roux, K. Ziegler, Kopsch, Spemann, Haeckel, v. Ebner, Endres , Herlitzka aufgeführt ; es folgen einige Angaben für das Experimentieren mit Kälte nnd Wärme, Luftdruck, chemischen Reiz- mitteln, mit Elektrizität, verschiedenfarbigem Licht. Schließlich werden noch eingehender geschildert: das Verfahren Roux', um Furchungs- typen durch künstliche Teilung von Öltropfen zu erzeugen, Borns Methode bei seinen Verwachsungsversuchen , die Mittel und Wege zu Bastardierungsversuchen, zur Herbeiführung der künstlichen Par- thenogenese. Das letzte Kapitel ist einer sorgfältigen Darstellung des Rekon- struktionsverfahrens gewidmet. — Aus unserer kurzen Zusammenfassung geht die Reichhaltigkeit des Buches hervor, in dem wir trotz der Menge der angegebenen XXI, 2. Referate. 209 Methoden volle t^bersichtlichkeit bewalu't finilen. Der Verf. Iiat es verstanden mit seinem Handbuch dem Studenten und Forscher einen schätzenswerten Ratgeber an die Seite zu stellen. Levy (Halle a. S.). 2. Chemisch -physikalische Methoden. Karger, G., Mikroskopische Methode der Molekular- gewicht s b e s t i m m u n g (Ber. d . deutscli. ehem. Gesellsch. Bd. XXXVII, 1904, p. 1754). Wenn zwei Lösungen verschiedenen Dampfdrucks sich neben- einander im geschlossenen Raum befinden, so erfolgt eine isotherme Destillation von der Lösung mit größerem nach derjenigen mit kleinerem Dampfdruck, bis der Druck in beiden gleich ist. Alsdann sind auch die molekularen Konzentrationen gleich, welche angeben, wieviel Grammolekiile der Substanz im Liter der Lösung enthalten sind. Man kann nun den Destillationsprozeß an bikonkaven , in Kapillarröhrclien befindlichen Tropfen unter dem INIikroskop mittels Okularmikrometer verfolgen und an dem konstant bleibenden Volum der durch Lufträume getrennten Tropfen genau erkennen, ob zwei Lösungen verschiedener Substanzen äquimolekulare Konzentration haben. Der Verf. vergleicht in dieser Weise Lösungen von Sub- stanzen , deren Molekulargewicht gesucht wird , mit Lösungen einer Substanz von bekanntem Molekulargewicht in demselben Lösungs- mittel und findet nach Ermittlung der Lösungen von gleicher mole- kularer Konzentration das Molekulargewicht der Substanzen. Z. B. er- gab sich, daß eine wässerige Lösung von Traubenzucker (x), welche 2.5'02 g im Liter enthielt, äquimolekular ist mit einer Lösung von 0*14 Grammolekülen Rohrzucker im Liter; also ist 0*14 • x = 25*02 und das gesuchte Molekulargewicht ,/: = 179, während sich für Traubenzucker (CgH^oCy) 180 berechnet. Die Methode liat vor anderen den Vorteil, daß sie für die ver- schiedenartigsten Lösungsmittel und auch für Mischungen derselben olme Voraussetzung irgendwelcher, das Lösungsmittel charakterisieren- der Konstanten (Siedepunkt, Schmelzpunkt, molekulare Siedepunkts- erhi)hung etc.) anwendbar ist. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XXI, 2. 14 210 Referate. XXI, 2. Verf. gibt eine ausführliche Auleitung zur praktischen Aus- führung der Methode, welche er auf Anregung- von L. Errera aus- gearbeitet hat. Vorländer {Halle a. S.). 3. Präparationsmethoden im allgemeinen. Unna, P. G. , Die wirksamen Bestandteile der poly- chromen M e t h y 1 e n b 1 a u 1 ö s u n g und eine Ver- besserung der Spongioplasmafärbung (Monats- hefte f. prakt. Dermatologie Bd. XXXVIII, 1904, p. 119 — 131). Nach Michaelis soll in der polychromen Methylenblaulösung der Methylenazur der eigentlich wirkende Farbstoff sein. Giemsa hat die Methode der Methylenazurdarstellung verbessert und das reine auf diese Weise hergestellte salzsaure Methylenazur ist bei GRtJBLER erhältlich. Unna hat nun Untersuchungen über die Beziehungen des Methylenazurs zur polychromen Methylenblaulösung angestellt. Er kommt zu dem Schlüsse , daß der Körper , welcher die Polychromie (Blau- Violett-Rot) der Färbung bedingt , ein aus Methylenblau durch den Zusatz von Kaliumkarbonat erzeugtes Methylenazurkarbonat in Lösung von kohlensaurem Alkali ist. Er hat daraufhin zwei neue Modifikationen der Spongioplasmafärbung angegeben: A. 1) Ange- säuerte Orceinlösung eine Nacht. 2) Alkohol zum Abspülen. 3) Nicht angesäuerte Orceinlösung 5 Minuten. 4) Alkohol zum Abspülen ; Wasser. 5) Azurmischung 15 Minuten; Wasser. 6) Alkohol, Öl, Balsam. — B. 1) Angesäuerte Orceinlösung eine Nacht. 2) Alkohol zum Abspülen; Wasser. 3) Azurmischuug 15 Minuten; Wasser. 4) Nichtangesäuerte Orceinlösung 5 Minuten. 5) In Alkohol ab- spülen. 6) Ol, Balsam. — Die hierbei benutzte Azurmischung hat folgende Zusammenstellung : Azurkarbonat (Giemsa) 0-25 Kaliumkarbonat 0*25 Methylenviolett (Bernthsen) 1*0 Destilliertes Wasser und Glyzerin zu gleichen Teilen ad lOü-0 In solchen Fällen, wo man zu bestimmten Zwecken, z. B. zum Photo- graphieren, das Spougioplasma noch dunkler gefärbt erhalten will. XXI, 2. Referate. 211 als es diese beiden Methoden ergeben, empfiehlt Verf., in die Modi- fikation B noch eine Vorfärbiing (zugleich Beizung) mit dem kürzlich von ihm für die Epithelfaserung angegebenen Triacid einzuschieben, ohne die für jenen Zweck notwendige Safraninfärbung folgen zu lassen. Die Formel für diese dritte Modifikation (C) würde also lauten: 1) Angesäuerte Orceinlösung eine Nacht. 2) Alkohol zum Abspülen ; Wasser. 3) Wasserblau-Orcem-Eosiumischung (GrIjeler) 3 Minuten; Wasser. 4) Azurmischung 1.5 Minuten; Wasser. 5) Nicht angesäuerte Orceinlösung 5 bis 10 Minuten. 6) Alkohol, Öl, Balsam. Sckiefferdecker {Bonri). Stransky , E. , Bemerkungen über die bei M a ii c hi - F ä r - bung auftretenden arte fizi eilen Schwärzungen (Neurol. Zentralbl. 1903, No. 14, p. 1—4 m. 4 Figg.). Verf. hat im Wiener psychiatrischen Vereine eine Reihe von Präparaten demonstriert (MARCHi-Färbungen an Zupfpräparaten von Meerschweinchennerven), welche zur Illustration des morphologischen Verhaltens von Artefakten an der peripheren Nervenfaser dienten, wie sie bei MARCHi-Imprägjiation zu beobachten sind. Artefakte treten an den Schnitt- beziehungsweise Quetschstellen von peripheren Nerven und mehrere Millimeter weit nach einwärts von solchen auf. Gewöhnlich ist das Bild das folgende : Das Mark zeigt sich von der betreffenden Stelle an nach einwärts mehr oder minder weit teilweise retrahiert, wodurch die Faser längs dieser Strecke sehr dünn ist, um nach einwärts zu allmählich an Breite zuzunehmen, bis sie endlich an einer Stelle kolbenartig anschwillt, um von da weiter nach innen zu wieder allmählich zu ihrer normalen Breitenausdehnung zurückzukehren. Schon das Allmähliche dieser Übergänge sichert die Unterscheidung gegenüber den sogenannten Schaltstücken , beziehungsweise jenen atrophischen P'aserstrecken, wie sie Elzholz beschrieben hat. Der Achsenzylinder nimmt an der Retraktion teil, er ist an mit Safranin nachgefärbten Präparaten in den dünnen Faserstrecken nicht zu sehen, entsprechend den kolbenförmigen Anschwellungen kann man gleich- falls meist Mark und Achsenzylinder nicht unterscheiden: mau sieht eine eigenartige zerworfene Struktur vor sich , innerhalb deren sich am Marchi- Präparate nicht selten einzelne unregelmäßig gebildete schwarze Stippchen erkennen lassen. Wichtiger nun ist es , daß auch noch weiter einwärts von diesen Stellen, da, wo die Faser sonst meist schon einen ziemlich normalen Anblick gewährt, vielfach schwarze Schollen und Stippchen auftreten können, die bei ungenauer Be- 14* 212 Referate. XXI, 2. trachtung- im ersten Moment als pathologische Scliwärzungen im- ponieren können. Aber auch hier gibt es genügend Anhaltspunkte, um die Unterscheidung zu ermöglichen. Diese Schwärzungen stellen sich nämlich kaum jemals als kugelige oder ovoide oder zylindrische Gebilde dar, sondern es sind längliche, Stäbchen- oder pfeilförmige, oft fast mäanderartig sich windende oder komraaähnliche Gebilde, die in der Regel dem Längendurchmesser der Faser i)arallel, nicht selten in Reihen angeordnet stehen ; die Faserbreite nehmen sie nie- mals ein. Verf. hält die histologische Unterscheidung dieser Artefakte gegenüber pathologischen Schwärzungen für hinreichend sicher , um beim Studium an der einzelnen Faser (für den Fall , daß bei der postmortalen Herausnahme des Nerven irgendein mechanisches Trauma trotz aller Vorsicht gesetzt wird) keine Verwechslung eintreten zu lassen. Schiefferdeckei' {Bonn). 4. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A, Niedere Tiere. Seilt - Her , K. , N a b l j u d e n i j a n ad ob m e n o m w e s c h - tschesstw w kletke i tkani. Tschasst I [Saint- HiLAiRE, K. , Untersuchungen über den Stoff- wechsel in der Zelle und in den Geweben. U Teil] (Trav. Soc. Imp. Natural. St. Petersbourg t. XXXIII, 1903, fasc. 2, p. 1—232 av. 5 pls. Teil II: ebendaselbst, t. XXXIV, 1903, fasc. 2, p. 233— 3G5 av. 2 pls.). In dieser umfangreichen Arbeit gibt Verf. auch einige Mit- teilungen über die von ihm benutzten Methoden. Zu seinen Unter- suchungen über die säureausscheidenden Speicheldrüsen bei den Mollusken benutzte er folgende Methoden. Unter- suchung der Objekte im frischen Zustande, Färbung intra vitam und Färbung von Schnitten. Zur Fixierung waren am geeignetsten ab- soluter Alkohol , besonders mit Zusatz einer gewissen Menge von Ammoniak, doppeltchromsaures Kalium mit Essigsäure oder Osmium- säure ; Sublimat und FLEMMixasche Mischung ergaben nicht immer gute Resultate. Eine gewisse Sprödigkeit der Objekte ließ sich nur bei Anwendung der doppelten Einbettungsmethode , Celloidin mit XXI, 2. Referate. 21;! ParafHii, vermeiden. Die Schnitte wurden entweder mir mit Eiweiß oder mit Hilfe von Wasser auf dem Objektträger befestigt. Gefärbt wurde liauptsächlich mit Hämatoxylin nach Böhmer und mit Eisen- hämatoxylin nach Heidexhain , ferner mit den Plasmafärbeniitteln : Methylviolett, Säurefuchsin u. a. — Von den Opisthobranchiata wurden Pleurobranchea und Oscanius untersucht. Selbst während der ener- gischsten Ausscheidung gelang es Verf. nicht, den Austritt der Vakuolen aus der Zelle zu beobachten. Um diese Frage zu lösen , schritt er zur Injektion des Drlisenausführungsganges. Er führte Gelatinemasse, Lösung von Berlinerblau in Glyzerin , oder wässerige Lösung von ammoniakalischem Karmin ein und untersuchte dann die Drüse in toto und an der Hand von Schnitten. Wird die Injektion nicht kräftig ausgeführt , so tritt die Masse aus dem Kanäle der Drüse aus und dringt zwischen den Zellen hindurch. Bei starker Injektion dringt die Masse zwischen der Wand des Röhrchens und der Basis der Zellen ein. Betrachtet man ein solches Röhrchen in toto , so sieht mau dunkel gefärbte kleine Vierecke, welche den Zellen ent- sprechen. Sehr schön sind die Gefäße auf zerzupften Präparaten von zuvor mit blauer Masse injizierten Drüsen zu sehen. — Führt man eine größere Quantität Seewasser in die Leibeshöhle von Pleuro- branchea ein , so nimmt die Zahl der Kalkzellen erheblich zu und ihr Bau w^ird ein anderer, wie bei normalen Tieren. Statt des einen, großen Kalkkörperchens , enthält die Zelle eine Menge glänzender Körner von anscheinend kalkiger Natur , von denen sie ganz ange- füllt erscheint. Der Kern ist rund und von bedeutender Größe. Auf fixierten Präparaten erscheint das Plasma von Körnern zweierlei Art erfüllt. — Die Speicheldrüsen von Dolium galea (Prosobranchiata) können im frischen Zustande nicht untersucht werden , da die in ihnen enthaltene Schwefelsäure alle Elemente zerstört. Bei rascher Neutralisierung gelingt es nur, die Kalkzellen zu unterscheiden. — Als bequemste Methode , die Schwefelsäure festzustellen , erschien Verf. einmal die Untersuchung der Reaktion des Zellinhaltes unter Zuhilfenahme der üblichen Methoden und zweitens das Erzielen von im Wasser fast unlöslichen Niederschlägen von schwefelsaurem Baryum oder schwefelsaurem Blei durch Behandlung mit Baryumchlorid oder essigsaurem Blei. Verf. wandte dieselben entweder in wässeriger Lösung oder in Verbindung mit irgendeiner fixierenden Substanz an. wie z. B. Sublimat, Formol, Pikrinsäure etc. Von Reagentien auf Säure verwendete er Kongorot, Tropaeolin 00, Alizarinsulfosäure, Lakmus , Smaragdgrün , Methylorange. Diese wurden entweder in 214 Referate. XXI, 2. den Körper des lebenden Tieres eingeführt oder es wurden die aus- geschnittenen Drüsen damit bearbeitet. Bei dem Einführen dieser Stoffe in den Körper des Tieres zeigte es sich , daß kein einziger in das Innere der Drüse oder in deren Zellen eindringt. Der Farb- stoff häuft sich gewöhnlich an der Oberfläche an, indem er sich längs des Muskelnetzes , d. h. wahrscheinlich längs der Gefäße an- ordnet. Die Reaktion ist dabei beständig eine alkalische, doch genügt es, die Drüse mit einer Pinzette zu berühren, um eine sauere Reak- tion derselben hervorzurufen; die Säure tritt augenscheinlich sehr leicht durch die Röhrcheu nach außen. Von den Anilinfarben werden durch die Zellen nur Methylenblau und Neutralrot ausgeschieden, welche eben wenig durcli die Säure verändert werden. Sie färben den Inhalt der in den Zellen enthaltenen Vakuolen mehr oder weniger intensiv, besonders wenn dem Farbstofte etwas Soda zugesetzt wird. Verf. beschreibt dann genauer die Erscheinungen , welche eintreten, wenn man die herauspräparierte Drüse in die Farbstoft'lösungen bringt, weswegen auf das Original verwiesen wird. — Zum Studium des Baues der Zellen im Körper der Dicyemiden verwandte V^erf. einmal eine intravitale Färbung mit Methylenblau und mit Xeutralrot : In den Deckzellen färbten sich eine große Menge von kleinen Körnchen rot , die Körner der Achsenzelle färbten sich gar nicht, die Bläschen sehr selten und nur sehr schwach. Die Auf- klärung der Zellstruktur kann auch dadurch befördert werden, daß man die Dicyemiden in Süßwasser mazeriert. In den Belegzellen vergrößern sich dabei die Bläschen in ganz unglaublichem Maße, sie werden nach außen abgeschieden und schwimmen dann in der um- gebenden Flüssigkeit herum. Fixiert wurden die Dicyemiden in O'öprozentiger und in einprozeutiger Osmiumsäure und dann mit Pikrokarmin gefärbt. Ferner zerrieb Verf. ausgeschnittene Stückchen der Venenanhänge auf dem Deckgläschen und fixierte dann rasch mit verschiedenen Flüssigkeiten (Osmiumsäure, FLEMMiNGScher Lö- sung 10 bis 20 Minuten, Sublimat und Essigsäure, Alkohol, dop- peltchromsaurem Kalium mit Essigsäure etc.). Nach dem Aus- Avaschen wurden die Präparate mit Biondi scher Mischung, Hämatoxylin nach Heidenhain etc. gefärbt. — In nicht s ä u r e a u s s c h e i d e n - den Drüsen einiger Mollusken zeigten auf Präparaten, welche mit Biondi scher Mischung, mit Toluidinmischung und Eosin, mit Me- thylenblau und Fuchsin S gefärbt wurden, die durchsichtigen Zellen einen grünen oder bläulichen Schimmer von sehr ungleichmäßiger Stärke (von völliger Farblosigkeit bis zu dunkelblau, resp. grün). — XXI, 2. Referate. 215 Die Zellen der D a r m a n h ä n g- e einiger P o 1 y c h a e t e n wurden an Hermione und Aphrodite untersucht. Die Divertikel des Darmes von Hermione wurden in frischem Zustande , mit vitaler Färbung und in lixiertem Zustande untersucht. Auf Sclinitten, welche mit Sublimat- Essigsäure und mit Flemming scher Mischung fixiert waren , fand Verf. zwei Arten von Zellen , von denen die Körner der einen saure Farben absorbieren (F^osin, Fuchsin, Lichtgrün u. a.); die Zellen der anderen Art sind viel durchsichtiger, ihr Protoplasma färbt sich mit Methylenblau , wobei die zu Gruppen vereinigten Körnchen eine besonders dunkle Färbung annehmen. Die Drüseu- zellen von Aphrodite wurden mit Flemming scher Mischung, nach Teljesnizcki, mit Formol-Sublimat-Essigsäure, mit Alkohol etc. fixiert. Färbung mit Ilämatoxylin nach Heidenhain, Orange, Kongorot. — In dem zweiten Teile seiner Arbeit behandelt Verf. zunächst den Bau des Protoplasmas in den Leukocyten. Er verwandte diese, da die Körper der selbständigen einzelligen Lebewesen zu kompliziert gebaut sind , doch wurden solche immer zum Vergleiche verwendet. p]s wurden vorzugsweise Leukocyten von Ilelix, Astacus, Lumbricus, Tenebrio, Triton, Salamandra, Siredon, Rana, Perca und einigen anderen Tieren benutzt. Verf. konnte leider kein Objekt auffinden, welches sich nach allen Richtungen als passend erwies, es mußten daher die verschiedenen Fragen an den Zellen verschiedener Tiere studiert werden. Fixierte Präparate erlauben durchaus keinen Einblick in die feinere Struktur der Leukocyten. Verf. benutzte daher nur lebende Zellen mit intravitaler Färbung. Diese letztere kann eine langsame oder schnelle sein. Im ersteren Falle bringt man die Zellen (besonders einzellige Tiere) in eine sehr schwache (1 : 10 000) Lösung einer Anilinfarbe, welche von ihnen nach einiger Zeit aufgenommen wird. Bei der zweiten Methode legt man die Zellen in eine stärkere Farblösung , durch welche sie gewöhnlich getötet werden. Man erkennt dieses daran, daß sich der Kern und das gesamte Plasma zu färben beginnt. Der Tod tritt indessen nicht plötzlich ein und man findet während des Absterbens einen Zeit- punkt, in dem die Färbung der intravitalen entspricht. Die Zelle ist dann „überlebend" gefärbt. Für die Leukocyten ist diese zweite Methode die einzig verwendbare, da die in den Zellkörper eingeführte Farbe gewöhnlich die verschiedenen Organe früher hervortreten läßt als sie den Leukocyten färbt. Man muß stets mit Immersion arbeiten, doch kann man die Körperchen nicht im hängenden Tropfen beob- achten. Man muß ein Deckglas auf den l>lutstropfen legen und 216 Referate. XXI, 2. etwas andriicken. Eine Zeitlang- bleiben die Leukocyten am Leben und währenddessen muß man sie beobachten. Man muß hierbei nocli einige Details berücksiclitigen , von denen oft der Erfolg ab- hängt. Besonders geeignet ist eine 0*25prozentige Lösung von Methylenblau in physiologischer Kochsalzli>sung, welche schon einige Monate gestanden hat, oder eine Lösung von Neutralrot. Der Bluts- tropfen wird auf den Objektträger gebracht, ein kleiner Tropfen der Farbflüssigkeit wird zugesetzt und das Deckglas dann sofort auf- gelegt. Die Färbung tritt nicht sofort ein , sondern erst nach etwa 10 bis 20 Minuten. Der Kern färbt sich dabei entweder überhaupt nicht oder schwach diffus. Die Leukocyten der verschiedenen Tiere verhalten sich in bezug anf die Färbung sehr verschieden : einige sterben sehr schnell ab (Krebs), andere dagegen bleiben sehr lange am Leben fllelix). Außer dem Methylenblau und dem Neutralrot hat Verf. auch noch einige andere Anilinfarben versucht , doch er- gaben von diesen nur sehr wenige für seine Zwecke brauchbare Resultate. Auch von ihnen wurden schwache Lösungen in physio- logischer Kochsalzlösung hergestellt. Die besten Resultate ergaben die folgenden Farben : Vesuv in färbt meist dieselben kleinen Körn- chen und Bläschen, wie Methylenblau, bisweilen auch die glänzenden Körnchen. T o 1 u i d i n b 1 a u färbt durchaus ähnlich , wie Methylen- blau, nur langsamer und nimmt in den Bläschen einen stark rötlichen Ton an. Malachitgrün färbt die kleinen Körner, Smaragd- grün nur die fremden Einschlüsse. P^ine charakteristische Färbung ergibt Nilblau: die durch dieses gefärbten Vakuolen zeigen einen himmelblauen Ton und außerdem werden die glänzenden Körner rosa gefärbt. Da die genannten Farben vor dem Methylenblau und dem Neutralrot keine Vorteile boten , so wurden diese ausschließlich be- nutzt, wobei noch zu beachten ist, daß das Neutralrot sehr leicht Kristalle sogar im Innern der Zellen bildet. — Zu seinen Unter- suchungen über die Verdauung aufgenommener Nähr- stoffe im Körper der P h a g o c y t e n benutzte Verf. am liebsten die Zellen von Ilelix, da diese sehr lebendig sind und das Ver- schlucken bei ihnen sehr schnell vor sich geht ebenso wie die Ver- dauung, so daß man den ganzen Prozeß von Anfang bis zu Ende verfolgen kann. Der einzige Nachteil ist der, daß diese Zellen sehr klein sind. Trotzdem hat Verf. dieses Objekt allen anderen vor- gezogen. Trotz der Kleinheit der Zellen kann man in ihnen alle Plasmaelemente erkennen (Körner und Vakuolen); den alveolären Bau des Plasmas zu sehen, gelingt allerdings selten, ^'erf. hat etwas XXI, ± Referate. -JH Säugetierblut dem Tiere eingespritzt und dann von Zeit zu Zeit demselben etwas Blut entnommen. Schon nach einer Stunde ent- halten viele Phagocyten Blutkörperchen. Diese liegen direkt im Zellplasma und erfüllen dieses mitunter ganz. Wegen des Näheren muß auf das Original verwiesen werden. Verf. bespricht dann weiter die Leukocyten von Salamandra, Triton, Siredon, Lumbricus, Astacus, der Raupe von Pieris brassicae , Tenebrio, wesweg-en ebenfalls auf das Original verwiesen wird. o / ,«■ / ; / u ° bcnicfferdecker {Bonn). Prentiss , C. W. , T h e n e u r o f i b r i 1 1 a r s t r u c t u r e s in t h c gang-lia of the leech and crayfish, witli espe- cial reference to the neurone theor}^ (Journ. compar. neurol. vol. XIII, 190:'!, no. o, p. 157 — 175 w. 2 pls.). Die Untersuchungen wurden ausgeführt au den ventralen Ganglien des Blutegels (Hirudo medicinalis) und an den abdominalen Ganglien des Krebses (Astacus fluviatilis). Ein Teil des Materials von Hirudo wurde in folgender Weise behandelt: 10 /^ dicke Schnitte von Prä- paraten, die in Sublimat fixiert waren, wurden mit einer Lösung von 1 : 4000 bis 1 : 6000 von Ammoniummolybdat imprägniert, etwa 1 Minute lang in Wasser von 55 bis 60^ C. differenziert und dann mit einer wässerigen Lösung von Toluidinblau (1 : 3000) gefärbt. In den Nervenzellen wurde eine reine Fibrillenfärbung erhalten, wenn man die Ganglien eine Stunde lang in Ätherdämpfen fixierte, sie in toto mit Toluidinblaulösung (1 : 3000) färbte und die Färbung mittels einer einprozentigen Lösung von Ammoniummolybdat fixierte. Das Material wurde dann entwässert, in Paraffin eingebettet und in der üblichen Weise geschnitten. Die Methode ist einfach, aber unsicher in ihren Resultaten. Es ist eine elektive Methode gleich dem Methylen- blau und nicht alle Fibrillen treten hervor. Oft allerdings wurden Präparate erhalten, auf denen die Fibrillen so klar wie auf einem Schema erschienen. Die Präparate von Astacus wurden alle mit einer intravitalen Methylenblaufärbung hergestellt. Die Fibrillen wurden dadurch differenziert, daß die Ganglien 2 bis 4 Stunden lang in physiologischer Kochsalzlösung verblieben. Die Färbung wurde dann in pikrinsaurem Ammoniak fixiert, wodurch die Fibrillen noch schärfer als durch Molybdat dargestellt wurden. Schieferdecker (Bonn). 218 Referate. XXI, 2. Lenssen , J. , Systeme nerve ux, Systeme circulatoire, Systeme respiratoire et Systeme excreteur de 1 a N e r i t i 11 a f 1 u v i a t i 1 i s [Fragments d ' u n t r a v a i 1 monogr apliique sur cette espece] (La Cellule t. XX, 1902, p. 289—331 av. 3 pls.j. Verf. hebt hervor , daß es unmöglich ist , die Anatomie von Neritina zu studieren , ohne Serienschnitte zu verwenden. Die bei Neritina außerordentlich stark entwickelte Kadula ist ein wesentliches Hindernis für die Herstellung der Schnitte , das man nur durch die Untersuchung einer sehr großen Zahl einigermaßen ausschließen kann. Zur Fixierung wurde hauptsächlich die konzentrierte Sublimatlösung mit Zusatz von Salpetersäure nach Gilson , wie sie in dem tech- nischen Handbuche von Bolles Lee angegeben ist, verwendet. Formol und Chromsäure ergaben nicht so gute Resultate. Hauptsächlich wurde mit Hämatoxylin und dem alkoholischen Karmin von Mayer gefärbt. Die besten Resultate wurden erhalten mit verdünnten alko- holischen Lösungen dieser Stoffe. Man muß langsam färben und dann wieder langsam entfärben. ScMcffcrdecker {Bonn). B, Wirbeltiei'e. Arnold, J., Weitere Beispiele granulärer Fettsynthese [Zungen- und D a r m s c h 1 e i m h a u t] (Anat. Anz. Bd. XXIV, 1904, No. 15, p. 389—400). Bei der Zufuhr von Fetten , Fettsäuren , Seifen , Myelinen ' etc. tritt, wie Verf. bemerkt, in den Zellen ungeachtet der verschiedenen chemischen Zusammensetzung und Löslichkeitsverhältnisse dieser Sub- stanzen Fett in granulärer Form auf. Selbst für diejenigen Zellen, welche dank ihrer phagozytären Figenschaften Öl oder Myelin in korpuskularer Form aufzunehmen vermögen, muß eine nachträgliche synthetische Umsetzung und Bindung an die Granula in Betracht gezogen werden. Nachdem ein solches Verhalten für die verschie- densten Zellformen: Leukozyten, Wanderzellen und Eiterzellen, sowie fixe Bindegewebszellen, Knorpelzellen, Endothelien und Epithelien etc. festgestellt war, erschien es wünschenswert, derartige Versuche auch an Zellen auszuführen, denen als hauptsächliche Aufgabe die Resorp- tion von Fetten zukommt, und anderseits zu prüfen, ob an mit XXI, 2. Referate. 219 Wimpern bekleideten Epithelien bei der Zufiüir von Ol und Seife eine Umsetzung dieser Substanzen erfolgt , und welche Rolle die Strukturbestandteile dieser Zellformen bei diesen Vorgängen spielen. I. Versuche an der F r o s c h z u n g e. Es mußte zunächst der normale Fettgehalt der Frosehzunge festgestellt werden. Hierzu wurden einmal bei Sommer- und Winter fröschen (hauptsächlich Rana fusca) nach Härtung der Zunge in lOprozentiger Formollösung Schnitte mit dem Gefriermikrotom hergestellt und dann mit Sudan oder Marchi- scher Lösung gefärbt. Da zum Studium feinerer Strukturverhältnisse sehr dünne Schnitte (2 bis 5 fx) erforderlich sind, ist Paraffineinbet- tung in Formol gehärteter und mit MARCHischer Lösung behandelter Stücke nicht zu entbehren. Will man den Fettgehalt an Flächen- präparaten untersuchen, so benutze man das folgende Verfahren: Die Zunge eines kurarisierten Frosches wird auf einem Halter (nach Thoma) ausgespannt, mehrfach, um den Schleim zu entfernen, mit Kochsalzlösung (0'6prozentigerj abgespült, dann kurz mit .öOprozen- tigem Alkohol und schließlich mit alkoholischer (TOprozentiger) Sudan- lösung betupft. Es entstehen hierbei leicht Niederschläge, nament- lich wenn der Schleim nicht genügend entfernt worden ist; durch nachträgliches Abspülen mit öOprocentigem Alkohol lassen sich die- selben teilweise beseitigen. Die Bilder gewähren einen lehrreichen Überblick über den Fettgehalt der Zunge. Ist die Alkoholwirkung auf die Oberfläche beschränkt, so kann der Kreislauf erhalten bleiben. Es ergab sich , daß das Zungenepithel bei Sommer- und Winter- fröschen in mäßiger Menge Fett führt. Man muß daher die Tiere vor dem Versuche einige Zeit huugern lassen, a) Versuche mit Seife. Die auf einem Korkrahmen ausgespannte Zunge eines kura- risierten Frosches wurde 12 bis 24 bis 48 Stunden lang in eine Lösung von oleinsaurem Natron (O'l- bis O'öprozentig) in Kochsalz- lösung (0'75prozentig) eingetaucht, mit Kochsalzlösung abgespült, mit öOprozeutigem Alkohol und dann mit Sudanlösung betupft oder aber nach Formolhärtung in der oben für die Schuitte angegebenen Weise behandelt. Da es auch wünschenswert erschien, das Verhalten der Seife und deren Wirkungsweise unmittelbar zu verfolgen , brachte Verf. auch möglichst kleine Körnchen von oleinsaurem Natron in Substanz auf die papilläre Fläche der vorgelagerten Zunge und be- deckte diese mit einem Deckglase. An solchen Objekten kann man beliebig lange Zeit Beobachtungen anstellen. Übergießt man solche Präparate nach 4 bis 6 Stunden mit Sudanlösung, so enthalten die Epithelien der Papulae fungiformes und filiformes massenhafte Fett- 220 Referate. XXI, -2. grauula. Nach dieser Methode konnte ermittelt werden , daß sclion eine Stunde nach Beginn des Versuches eine Vermehrung des Fett- g-ehaltes vorhanden war, nach 12 Stunden war derselbe sclion sehr hochgradig. Zur Untersuchung von Schnitten eignen sich namentlich Zungen, welche 12 bis 24 Stunden in Seifenlösungen eingetaucht waren. Endlich wurden auch Versuche mit gefärbter Seife ange- stellt: es wurde eine gesättigte Seifenlösung mit Sudan III oder Alkannin (GRtJBLER) versetzt, es wurden einige Tropfen absoluten Alkohols zugefügt, man ließ diese Mischung über dem Wasserbade verdunsten und später im Brütofen eintrocknen. Bei Zusatz von Wasser zu diesem Gemenge löst sich dasselbe mit roter oder vio- letter Farbe. Bringt man kleine Teilchen davon auf die vorgelagerte Zunge, so erscheinen auch die kleineren Tröpfchen schwach gelblich gefärbt, die größeren Tropfen enthalten gewöhnlich noch ungelösten Farbstüft". Auch an einzelnen Granula glaubte Verf. einen leicht gelblichen Farbenton wahrzunehmen, t'bergoß man aber nach einigen Stunden mit Sudanlösung, so kamen massenhafte gefärbte Granula zur Wahrnehmung: es waren also zahlreiche auf Sudan reagierende Granula vorhanden, welche sich vitiil nicht gefärbt hatten. Taucht man vorgelagerte Zungen für 12 bis 24 Stunden in gefärbte Seifen- lösung, so zeigt die Schleimhaut, namentlich nach Alkanninseife, sich häutig etwas gefärbt. Doch verschwindet diese Färbung beim Ab- spülen mit Kochsalzlösung. Eine vitale Färbung gelingt also nicht. b) Versuche mit Olivenöl. Hierbei empfiehlt sich die An- wendung von Ölen, welche mit Sudan gefärbt sind, weil man das Verhalten auch kleinerer Tropfen prüfen kann. Alkanninolivenöl alteriert die Gewebe stärker als Sudanolivenöl. Bei der unmittel- baren Beobachtung der Froschzunge tritt erst nach mehreren Stunden in der Umgebung der Oltropfen eine deutlichere Granulierung an den Epithelzellen und nach 12 bis 24 Stunden eine blasige Auf- treibung ein, die aber viel geringer ist als bei den Seifeversuchen. An Zungen, welche längere Zeit in gefärbtes Öl eingetaucht waren, ergeben sich im wesentlichen die gleichen Erscheinungen, nur ist die Färbung einzelner Granula, namentlich bei der Verwendung von Alkanninolivenöl . deutlicher. Könnte man hiernach vielleicht an- nehmen, daß eine Umsetzung des Öles unter solchen Verhältnissen nicht stattfindet, so lehrt die Untersuchung der gehärteten Organe, daß das doch der Fall ist. Um einen Anhaltspunkt dafür zu ge- winnen, wann frühestens Fett unter solchen Bedingungen umgesetzt wird , verfuhr Verf. ähnlich wie bei den Seifeversuchen. Vor Ein- XXI, 2. Keferate. 221 tauclien der Zunge in Siidanoliveuöl scliuitt er ein kleines Stücl^chen der Sclileimhaut aus , um seinen Fettgehalt festzustellen. Solche Proben wurden von Stunde zu Stunde der eingetauchten Zunge ent- nommen. Nach etwa 4 bis 5 Stunden glaubte Verf. eine zweifellose Zunahme des Fettes feststellen zu können. — II. Versuche am Froschdarm. Im Froschraagen wird schon unter normalen Ver- liältnissen ziemlich viel Fett gefunden , und zwar nicht nur auf der Höhe der Falten , sondern aucli in den Driisenepithelien. Viel ge- ringer ist der Fettgehalt des Darmes; meistens sind es nur die Kuppen einzelner Zellen und die basalen Abschnitte solcher, in denen zahlreiche Fettgranula vorkommen. Immerhin empfiehlt es sich, die Tiere vor Beginn der Versuche längere Zeit hungern zu lassen. a) Versuche mit S e i f e f ü 1 1 e r u n g. Meist wurden die Tiere ein- bis zweimal am Tage mit kleinen Körnchen ungefärbter oder gefärbter (Sudan, Alkanna) Seife gefüttert. Nach 12, 24, 36 und 48 Stunden wurden die Tiere getötet. Die gefärbte Seife bietet den Vorteil, daß sich leicht feststellen läßt, wie weit sie im Darme vorgerückt ist, und data die Befunde an den Teilen, welche mit Seifelösung in Berührung gekommen sind , mit denjenigen an den anderen Darmabschnitten verglichen werden können. Um solche Vergleiche anzustellen, hat \'erf. auch mehrfach Unterbindungen des Darmes an verschiedenen Stellen vor Beginn des Versuches vor- genommen. Nach Seifefütterung zeigte sich eine gleichmäßige Füllung der Darmepithelien mit Fett über große Flächen hin. Die Fett- granula erfüllten nicht nur die basalen Abschnitte der Zellen, sondern erstreckten sich in reihenförmiger Anordnung bis zum freibleibenden Grenzsaume ; nur an ganz wenigen Zellen scheinen in diesem ver- einzelte Fettgranula zu liegen. Diese feineren Strukturverhältnisse sind besonders gut zu sehen an feinen Schnitten von MARCHi-Prä pa- raten, b) V e r s u c he mit ( > 1 f ü 1 1 e r u n g. Verf. injizierte den Fröschen je nach ihrer Größe ein- bis zweimal am Tage 0'5 bis 1 cc ungefärbten oder gefärbten ()les. Die Untersuchung des Darmes wurde nach 12, 24, 36 und 48 Stunden vorgenommen. Sonst wie oben. Eine Verschiedenheit gegenüber den Seifenversuchen in bezug auf die P>gebnisse ließ sich nicht nachweisen. — Verf. hebt nocli besonders die Tatsache hervor, daß den Kpithelzellen der Zunge, bewimperten und unbewimperten , außer ihren sonstigen Funktionen die Fähigkeit zukommt, Fett umzusetzen, und daß bei ihnen dieser Vorgang unter den gleichen morphologischen Bildern sich vollzieht wie bei den Darmepithelien , deren wesentliche Aufgabe die Fett- 222 Referate. XXI, 2. resorptiou ist. lu beiden Fällen ist das Fett, wenn nicht ausschließ- licli, so doch hauptsächlich an die Plasmasomen, beziehungsweise die Granula gebunden; bei beiden Zellarten sind die Grenzsäume frei von Fettgranula. Betupft man die papilläre Fläche einer lebenden Froschzunge erst mit Methylenblau und dann mit Neutralrot, so färben sich in der gleichen Zelle die einen Granula blau, die anderen rot, wiederum andere violett, wohl der Ausdruck des wechselnden P\inktionszustandes derselben. Da manche dieser Zellen gleichzeitig Fettgranula enthalten, so ist dieses ein bemerkenswertes Beispiel für das Vorkommen verschiedenartiger Granula in ein und derselben Zelle. Schiefferdecker (Bonn). Ehrlich , L, , Der Ursprung der P 1 a s m a z e 1 1 e n ( Virchow s Arch. Bd. CLXXV, 1904, H. 2, p. 198—237 m. 2 Tfln.). Die guten Methoden zur Darstellung der Plasmazellen sind die- selben, welche heutzutage dem Studium des Protoplasmas überhaupt dienen, um die verschiedenen im Protoplasma vorhandenen Sub- stanzen neben dem Kerne klar hervortreten zu lassen, kann man verschiedene Wege einschlagen, die alle versucht worden sind. Man kann erstens durch geeignete Fixierungsmittel das färberische Überwiegen der sauren Kernsubstanz dem Protoplasma gegenüber herabsetzen, und zwar durch basische Metalloxyde (z. B. Osmium, Eisenverbindungen) und dann die Metallverbindung des Protoplasmas zu färben versuchen (z. B. durch Hämatein). Auf diesem Wege können die eiweißartigen verschiedenen Komponenten des Protoplasmas, vor allem die Nukleoproteide , auf welche in der Pathologie das meiste ankommt, nicht ditFerenziert und dem Studium zugänglich ge- macht werden. Ein zweiter Weg ist viel erfolgreicher. Man fixiert Protoplasma und Kern in möglichst konservativer Weise, nämlich durch absoluten Alkohol und färbt mittels solcher F a r b - mischungen, deren Komponenten zu den Substanzen des Proto- plasmas und Kernes verschiedene Affinität haben. Hierhin gehört in erster Linie die Pyronin-Methylgrün-Mischung von Pappenheim, in der das Pyronin das Grauoplasma und Kernkörperchen, das Methyl- grün das Nuklein des Kernes spezifisch in Kontrastfarbe darstellen. Nach neueren Untersuchungen von Unna gehört auch die polj^chrome Methylenblaulösung hierher, indem das darin befindliche Azur Grauo- plasma und Nuklein, das Methylenviolett das Spongioplasma anfärbt. Endlich kann man noch auf einem dritten Wege zum Ziele ge- langen, indem man ein mit reichen Affinitäten ausgestattetes Färbe- XXI, 2. Referate. 223 mittel zu einer Färbimg des Protoplasmas und Kernes benutzt und dann durch ein geeignetes Entfärbungsmittel, welches zu den Substanzen verschiedene Verwandtschaft hat, dieselben differenziert; hierzu gehören die von Unna zuerst für die Darstellung des Proto- plasmas vorgeschlagenen Methoden , nämlich die Färbung in poly- chromer Methylenblaulösung und nachfolgende Differenzierung durch Glyzerinäther, neutrale Orceinlösung oder Anilin-Alaunmischung. Die von dem Verf. verwendeten Methoden gehören zu den beiden letzten Gruppen und sind Modifikationen der von Unna und Pappenheim angegebenen Methoden, welche sich dem Verf. praktisch bewährt haben. Verf. bemerkt, daß in der Literatur über Plasmazellen eine erstaunliche Menge von unbrauchbaren Methoden empfohlen sind, welche das Wesen der Protoplasmafärbnng von Grund aus alterieren; hierhin gehören die vielfachen Angaben, daß die protoplasmatischen Substanzen sich mittels der obigen Färbungen auch an solchen Ge- weben differenzieren lassen, die in Sublimat, Formol und Chromsalzen fixiert waren; ebenso falsch ist die Behauptung, daß eine Entfärbung mit TOprozentigem Alkohol der Entfärbung mit den oben genannten milden Entfärbungsmitteln im Resultate gleichkommen soll. Bei jeder Plasmazellenfärbung soll man , wo es nur irgend möglich ist , das Gewebe frisch in absoluten Alkohol bringen, es schadet der Färbung nichts, und ist als praktisch zu empfehlen, die zu exzidierende Stelle mit Chloräthyl zu vereisen, worauf sie mit einem Rasiermesser flach abgetragen und nach kurzem Abwaschen des Stückchens in Wasser, um vielleicht vorhandenes Blut zu entfernen , sofort in absoluten Alkohol übertragen wird. Dann folgt eine Einbettung erst in dünne, dann in dicke Celloidinlösung, mit dieser wird das Stückchen sodann auf einem Blocke befestigt und in SOprozentigem Alkohol aufbewahrt. Diese letztere Prozedur ist besonders wichtig wegen der darauf- folgenden Färbemethoden. Es ist bekannt , daß schon die kleinste Spur von Gerbsäure bedeutend auf die Präparate wirkt, da diese Beize die feinen Differenzen derjenigen eiweißartigen Gewebsbestand- teile (Granoplasma) , auf die es hauptsächlich ankommt , vollständig verwischt. Unna rät daher, um die Gerbsäure aus den Kork- oder Holzblöcken zu entfernen, dieselben mehrere Stunden in 2prozentiger Sodalösung auskochen zu lassen. Nach seiner Erfahrung hält es Verf. für nützlich, solche Blöcke mit oder sogar ohne vorherige Aus- kochung dauernd in Alkohol zu halten , bis eine frische Portion A